本文關(guān)鍵詞：替西羅莫司協(xié)同順鉑對宮頸癌Hela細胞的作用及其機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:宮頸癌作為一種嚴重威脅女性健康的疾病,由于其具有易復發(fā)、易轉(zhuǎn)移的特點,使得宮頸癌的化學藥物療法日益受到關(guān)注。治療中使用到的化療藥物以鉑類為主,雖然化療效果值得肯定,但毒副作用明顯,易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移、耐藥等困擾,臨床極為期待新的有效的化療組合方案。已有研究證明,m TOR抑制劑雷帕霉素及其類似物依維莫司和替西羅莫司都可以和順鉑聯(lián)合使用,是治療腫瘤的潛在組合藥物。m TOR抑制劑主要以m TOR蛋白為靶點有效地抑制腫瘤細胞的增殖生長,促進腫瘤細胞的凋亡,逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞對化療藥物順鉑的耐藥性。盡管越來越多的證據(jù)表明m TOR抑制劑與順鉑這種聯(lián)合治療在抗腫瘤領(lǐng)域應用的巨大潛力,但是替西羅莫司與順鉑的聯(lián)合使用對宮頸癌的研究并無報道,且對其詳細的作用機制尚不清楚。目的:本課題在細胞水平,考察替西羅莫司與順鉑對宮頸癌Hela細胞的有效性,篩選出最佳的藥物聯(lián)用組合方案,同時探索替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用的機制。方法:1.采用MTT比色法考察替西羅莫司與順鉑單獨或聯(lián)合作用于對宮頸癌Hela細胞24h、48h、72h的抗增殖活性,計算半數(shù)抑制濃度IC50,篩選出最優(yōu)的組合方案;2.采用流式細胞術(shù)考察替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用對宮頸癌Hela細胞的誘導凋亡作用及周期阻滯作用,探討聯(lián)用組合方案的有效性;3.采用Transwell小室模型考察替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用對宮頸癌Hela細胞的抗侵襲能力,考察聯(lián)用組合方案對腫瘤微環(huán)境的影響。4.采用Western Blot法考察替西羅莫司與順鉑單獨或聯(lián)合應用對宮頸癌Hela細胞中m TOR信號通路相關(guān)蛋白m TOR、70s6k、4EBP1,周期相關(guān)蛋白cyclin D1及凋亡相關(guān)蛋白cleaved-PARP、bcl-2的表達水平的影響。結(jié)果:1.MTT結(jié)果表明替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用于宮頸癌Hela細胞顯示出優(yōu)于單獨給藥處理的抗增殖活性。經(jīng)過對半數(shù)抑制濃度IC50的計算,結(jié)果顯示在加入替西羅莫司時,Hela細胞對順鉑的敏感度增強,聯(lián)用組合IC50值為0.726±0.550,相較于順鉑單藥(1.115±0.239)有所降低。此外,通過對聯(lián)合指數(shù)CI的計算可知聯(lián)用組合方案主要表現(xiàn)出協(xié)同效應(CI1)。2.流式細胞術(shù)檢測替西羅莫司與順鉑聯(lián)合對宮頸癌Hela細胞的促凋亡作用結(jié)果顯示,替西羅莫司與低濃度的順鉑聯(lián)合作用時,其凋亡率提升至34.617±3.201%,顯著高于兩種藥物單獨處理的凋亡率3.流式細胞術(shù)檢測替西羅莫司與順鉑聯(lián)合的周期阻滯作用結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥組導致了細胞周期的重新分布,明顯抑制了G2/M期細胞的轉(zhuǎn)化,引發(fā)S期檢查點失調(diào),導致S期細胞的聚集積累。0.75μg/m L順鉑單獨處理48h后的Hela細胞表現(xiàn)出均勻分布在G2期(45.01±4.1%)和S期(42.87%±6.78%),在加入0.05μmol/L和0.1μmol/L替西羅莫司后,G2期細胞百分比為30.21±3.56%、34.94±5.04%,S期細胞百分比為61.62±6.60%、56.42±4.89%。4.Transwell小室模型考察聯(lián)合用藥組對宮頸癌Hela細胞侵襲能力的結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥可以有效抑制細胞的侵襲能力。這一結(jié)果說明二者的聯(lián)合作用在腫瘤微環(huán)境中起到了一定的抗血管生成作用。5.Western Blot法檢測m TOR信號轉(zhuǎn)導途徑關(guān)鍵蛋白的表達結(jié)果表明,聯(lián)合用藥組主要是通過對m TOR信號轉(zhuǎn)導途徑的介導,抑制其下游蛋白70s6k、4EBP1的磷酸化,阻斷腫瘤細胞的生存通路來協(xié)同順鉑發(fā)揮細胞毒性。同時,替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用可以有效地降解DNA修復酶PARP,抑制負調(diào)控凋亡蛋白bcl-2的表達并抑制細胞周期蛋白家族cyclin D1蛋白的表達從而調(diào)控細胞周期分布。結(jié)論:實驗結(jié)果表明替西羅莫司可以協(xié)同順鉑增強其抗宮頸癌細胞的活性,主要是通過PI3K/AKT/m TOR信號轉(zhuǎn)導途徑發(fā)揮二者協(xié)同效應。另一方面,替西羅莫司通過抑制細胞周期蛋白家族的cyclin D1蛋白的表達,阻止其與細胞周期蛋白依賴激酶相結(jié)合,調(diào)節(jié)酶活性協(xié)調(diào)周期進程,誘發(fā)細胞進一步分裂的DNA、蛋白質(zhì)、促成熟因子無法順利合成,將更多的細胞阻滯在DNA合成期,從而更有效地誘發(fā)腫瘤細胞的凋亡。這些結(jié)果為替西羅莫司與順鉑的聯(lián)合用藥提供了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：替西羅莫司 順鉑 宮頸癌 mTOR信號通路 協(xié)同效應
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語說明5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 綜述11-23
• 1.1 宮頸癌的主要治療手段11-12
• 1.2 傳統(tǒng)靶向化療藥物順鉑12-15
• 1.2.1 順鉑的抗腫瘤作用12-13
• 1.2.2 順鉑的作用機制13-15
• 1.3 新型mTOR抑制劑替西羅莫司15-21
• 1.3.1 替西羅莫司簡介15-16
• 1.3.2 替西羅莫司的抗腫瘤活性及其作用機制16
• 1.3.3 替西羅莫司的抗血管生成作用及其作用機制16-17
• 1.3.4 替西羅莫司抗腫瘤治療的臨床應用17-18
• 1.3.5 替西羅莫司與其他藥物聯(lián)合應用的研究18-21
• 1.4 課題的提出21-23
• 第二章 材料與方法23-33
• 2.1 材料與儀器23-24
• 2.1.1 細胞系23
• 2.1.2 材料23
• 2.1.3 主要儀器23-24
• 2.1.4 主要溶液配制24
• 2.2 方法24-33
• 2.2.1 細胞的培養(yǎng)24-25
• 2.2.2 細胞形態(tài)學觀察25-26
• 2.2.3 MTT比色法檢測藥物對細胞的增殖抑制作用影響26
• 2.2.4 流式細胞術(shù)檢測藥物對細胞周期阻滯作用影響26
• 2.2.5 流式細胞術(shù)檢測藥物對細胞促凋亡作用影響26-27
• 2.2.6 Transwell小室模型檢測藥物對細胞侵襲能力的影響27-28
• 2.2.7 Western blot檢測藥物對mTOR通路相關(guān)蛋白及周期、凋亡蛋白的影響28-31
• 2.2.8 分析及統(tǒng)計學方法31-33
• 第三章 實驗結(jié)果33-49
• 3.1 替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用對Hela細胞的形態(tài)學的改變33
• 3.2 替西羅莫司與順鉑單獨或聯(lián)合作用對Hela細胞的抗增殖活性33-39
• 3.2.1 順鉑對Hela細胞的抗增殖活性33-35
• 3.2.2 替西羅莫司對Hela細胞的抗增殖活性35-36
• 3.2.3 替西羅莫司可以增強順鉑的抗增殖活性36-38
• 3.2.4 替西羅莫司與順鉑表現(xiàn)出協(xié)同效應38-39
• 3.3 替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用對Hela細胞的促凋亡作用39-40
• 3.4 替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用對Hela細胞的周期阻滯作用40-42
• 3.5 替西羅莫司與順鉑聯(lián)合作用對Hela細胞的侵襲能力的影響42-44
• 3.6 替西羅莫司與順鉑聯(lián)合對mTOR通路相關(guān)蛋白表達水平的影響44-45
• 3.6.1 對mTOR靶點的影響44
• 3.6.2 對mTOR信號轉(zhuǎn)導通路下游蛋白的影響44-45
• 3.7 替西羅莫司與順鉑聯(lián)合對凋亡和周期相關(guān)蛋白表達水平的影響45-49
• 3.7.1 對凋亡相關(guān)蛋白的影響45-46
• 3.7.2 對周期相關(guān)蛋白的影響46-49
• 第四章 討論與分析49-55
• 4.1 替西羅莫司協(xié)同順鉑增強細胞毒性49-51
• 4.2 替西羅莫司聯(lián)合順鉑作用的抗腫瘤機制51-55
• 4.2.1 通過抑制PI3K/AKT/mTOR通路活性51-52
• 4.2.2 抑制腫瘤細胞S期向G2期的轉(zhuǎn)化52-53
• 4.2.3 對腫瘤細胞侵襲能力的影響53-55
• 第五章 總結(jié)與展望55-57
• 5.1 全文總結(jié)55
• 5.2 創(chuàng)新點55-56
• 5.3 展望56-57
• 參考文獻57-67
• 致謝67-69
• 碩士期間發(fā)表論文和獎勵情況69

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7 鄭從q

本文編號：508685