本文關鍵詞：自噬在紫杉醇誘導siha細胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：宮頸癌在女性惡性腫瘤的發(fā)病率中僅次于乳腺癌，，是女性生殖器官最常見的惡性腫瘤。宮頸癌的臨床治療手段主要以手術和放療為主，輔以化療。盡管治療手段得到不斷地改進，但是晚期患者生存率并沒有顯著提高，同時近幾年來宮頸癌發(fā)病群體低齡化趨勢越來越明顯、以手術和放療為主的治療方法的對卵巢功能的影響較大及新輔助化療（NACT）的臨床效果比較明顯，現(xiàn)階段宮頸癌的化療越來越受到關注。作為宮頸癌一線化療藥物的紫杉醇已經(jīng)證實在引起多種腫瘤細胞凋亡的同時還可以引起腫瘤細胞的自噬，由于自噬的兩面性，本實驗初步探討自噬在紫杉醇誘導siha細胞凋亡中的作用和機制，希望能夠為宮頸癌的臨床化療進行新的優(yōu)化。 目的：采用人宮頸癌siha細胞為研究對象，探討自噬在紫杉醇誘導siha細胞凋亡中的作用和機制。為臨床宮頸癌化療方案的優(yōu)化以及新的治療切入點的探索提供合理的理論基礎及依據(jù)。 方法:本實驗采用體外培養(yǎng)人宮頸鱗癌siha細胞株，進行以下研究。 1、通過MTT比色法檢測紫杉醇誘導宮頸癌Siha細胞的死亡情況，并初步探討自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）對該種死亡的作用。 2、通過流式細胞術進一步檢測紫杉醇誘導宮頸癌Siha細胞的凋亡以及3-MA對該種細胞死亡的影響。 3、通過吖啶橙染色(AO染色)證明紫杉醇誘導宮頸癌Siha細胞死亡的過程中伴隨著自噬產生。 4、通過蛋白印跡證明紫杉醇誘導宮頸癌Siha細胞死亡的過程中自噬相關蛋白LC3表達情況以及3-MA對其的影響。實驗結果均采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和分析，并以P＜0.05表示實驗數(shù)據(jù)的差異有統(tǒng)計學意義。 實驗結果: 1、MTT實驗結果證實：紫杉醇作用siha細胞24h后與對照組比較，紫杉醇1μmol/L組、紫杉醇2μmol/L組細胞生存率明顯降低（p0.05），并且呈濃度依賴性（p0.05），紫杉醇+3-MA組與紫杉醇組比較，細胞生存率降低,并有統(tǒng)計學差異（p0.05）。 2、流式細胞術結果進一步證實了上述MTT結果。 3、吖啶橙染色的實驗結果顯示：熒光顯微鏡下紫杉醇組、紫杉醇+3-MA組與Control組及Control+3-MA組相比，細胞胞漿中嗜酸性紅色熒光顆粒明顯增多，紫杉醇+3-MA組與紫杉醇組相比胞漿內嗜酸性紅色熒光顆粒明顯減少。 4、蛋白印跡結果顯示：紫杉醇組、紫杉醇+3-MA組與Control組相比自噬蛋白LC3表達明顯升高，并且呈濃度依賴性（p0.05）。紫杉醇+3-MA組與紫杉醇組相比自噬蛋白LC3表達明顯降低。 實驗結論: 1、紫杉醇可使siha細胞凋亡，并且產生自噬，這種自噬是保護性的，是宮頸癌siha細胞產生耐藥的一種重要因素。 2、抑制自噬能夠增強紫杉醇對宮頸癌細胞的殺傷作用,為自噬抑制劑增強宮頸癌化療敏感性提供理論依據(jù)。
【關鍵詞】：自噬 siha細胞 宮頸癌 紫杉醇
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 前言4-7
• 摘要7-10
• Abstract10-16
• 英文縮寫詞表16-18
• 第1章 引言18-19
• 第2章 綜述19-25
• 2.1 自噬的概念及生物學意義19-21
• 2.2 自噬與凋亡21-23
• 2.3 自噬與紫杉醇23-24
• 2.4 自噬抑制劑 3-甲基腺嘌呤（3-MA）24
• 2.5 自噬與宮頸癌24-25
• 第3章 材料與方法25-35
• 3.1 實驗材料25-29
• 3.1.1 細胞株和主要試劑25
• 3.1.2 主要試劑的配制25-27
• 3.1.3 實驗設備27-29
• 3.2 實驗方法29-35
• 3.2.1 細胞培養(yǎng)29
• 3.2.2 MTT 法測細胞生存率29-30
• 3.2.3 流式細胞術（FCM）檢測細胞凋亡及 3MA 對在紫杉醇誘導 siha 細胞凋亡中的作用30-32
• 3.2.4 AO（吖啶橙）染色檢測紫杉醇誘導 siha 細胞自噬，以及3MA 對其的影響32-33
• 3.2.5 Western 蛋白印跡實驗檢測 LC3 蛋白表達量33-35
• 3.3 統(tǒng)計學分析35
• 第4章 實驗結果35-39
• 4.1 MTT 法檢測細胞生存率35
• 4.2 流式細胞術進一步檢測紫杉醇誘導宮頸癌 Siha 細胞的凋亡及 3-MA 對其的影響35-36
• 4.3 吖啶橙染色實驗結果36-38
• 4.4 Western 蛋白印跡實驗檢測 LC3 蛋白表達量38-39
• 第五章 討論39-41
• 第六章 結論41-42
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫陽;晉龍;劉佳華;林賽梅;楊茵;眭玉霞;石紅;;細胞自噬對紫杉醇誘導宮頸癌CaSki細胞死亡的影響(英文)[J];中南大學學報(醫(yī)學版);2010年06期

  本文關鍵詞：自噬在紫杉醇誘導siha細胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：487033