本文關(guān)鍵詞：RNAi干擾NOB1基因?qū)θ寺殉舶┘?xì)胞SKOV3生長影響的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用siRNA干擾人NOB1基因后對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞在體外的生長繁殖、細(xì)胞周期以及凋亡的作用,深入的探討NOB1基因在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中所起的作用,同時(shí)為研究人NOB1基因作為腫瘤治療靶點(diǎn)的分子機(jī)制提供新的線索和參考依據(jù)。方法:1、將人卵巢癌SKOV3細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期,傳代并接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。2、采用Santa Cruz si RNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑將Control siRNA(Flourescein Conjugate)-A轉(zhuǎn)染至人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中,統(tǒng)計(jì)其轉(zhuǎn)染的效率。3、將細(xì)胞分成空白對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組、干擾組和陰性序列對(duì)照組,以Santa Cruz siRNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑為載體將陰性對(duì)照Control siRNA-A和干擾片段NOB1P siRNA(h)分別轉(zhuǎn)染至人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中,而后觀察各組細(xì)胞形態(tài)和生長狀態(tài)。4、采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況。5、采用RT-PCR方法從檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞NOB1mRNA的表達(dá)情況。6、轉(zhuǎn)染后提取各組的總蛋白,通過Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中NOB1蛋白質(zhì)的表達(dá)量。7、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組的細(xì)胞凋亡情況及細(xì)胞周期。結(jié)果:1、將Control siRNA(Flourescein Conjugate)-A轉(zhuǎn)染至人卵巢癌SKOV3細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)經(jīng)轉(zhuǎn)染后的人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中大多數(shù)都有綠色熒光蛋白的表達(dá),且綠色熒光覆蓋率80%以上。2、MTT結(jié)果顯示,NOB1干擾組的人卵巢癌SKOV3細(xì)胞增值活力明顯降低。3、RT-PCR檢測(cè)各組NOB1基因mRNA表達(dá)量,較其他3組,NOB1干擾組中的NOB1表達(dá)量明顯降低(P0.05)。4、用Western blotting蛋白免疫印記法檢測(cè)NOB1蛋白的表達(dá)量,相比較于的其他3組,NOB1干擾組中的NOB1表達(dá)量明顯降低(P0.05)。5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡結(jié)果顯示NOB1干擾組細(xì)胞凋亡率明顯升高(P0.05);檢測(cè)各組細(xì)胞周期結(jié)果顯示,NOB1干擾組的G1期細(xì)胞數(shù)明顯多于其他三組,說明NOB1干擾組的細(xì)胞停滯在G1期,難以進(jìn)入S期。結(jié)論:干擾片段NOB1P siRNA(h)可以轉(zhuǎn)染進(jìn)入人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中,NOB1P si RNA(h)可以抑制人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中NOB1基因的表達(dá),且可以抑制人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的增殖,促進(jìn)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的凋亡并且使其細(xì)胞周期阻滯在G1期。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 NOB1 siRNA 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-9
• 英漢縮略詞對(duì)照表9-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-35
• 1.1 材料12-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-35
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理35
• 2 結(jié)果35-43
• 2.1 轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)35-36
• 2.2 轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的 NOB1 基因的 m RNA 表達(dá)情況36-38
• 2.3 轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的 NOB1 的蛋白表達(dá)情況38-40
• 2.4 轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的增殖情況40
• 2.5 轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的凋亡情況40-41
• 2.6 轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的周期情況41-43
• 3 討論43-48
• 3.1 本課題的重要意義43-44
• 3.2 si RNA 技術(shù)的簡(jiǎn)介44-46
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析46-48
• 4 結(jié)論48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 綜述50-54
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄54-55
• 致謝55

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