本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞抑制作用及其機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)觀察二甲雙胍(Merformin)對(duì)于子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞系中的REDD1(發(fā)育及DNA損傷反應(yīng)調(diào)節(jié)基因1)、p-AKT ser473(473絲氨酸殘基磷酸化AKT)、AKT(蛋白激酶B)蛋白表達(dá)、AKT蛋白磷酸化程度和REDD1、AKT、mTOR(哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白)mRNA水平的影響進(jìn)行分析,并對(duì)可能存在的REDD1及AKT/mTOR信號(hào)通路之間的相互作用與影響進(jìn)行研究,探討二甲雙胍對(duì)于子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞遷移能力的影響及REDD1、p-AKT及mTOR信號(hào)分子在其中發(fā)揮的作用。方法:選取適量子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株置于37℃、5%CO2環(huán)境的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng),采用含有10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞達(dá)到匯片程度時(shí),按照5×105個(gè)/瓶將細(xì)胞接種于25cm2的培養(yǎng)瓶中,觀察Ishikawa細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,以后每隔2天更換一次細(xì)胞培養(yǎng)液。當(dāng)Ishikawa細(xì)胞的體積達(dá)到90%以后,將其放置于不含有血清的RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)12h,再分別使用1mmol/L、5mmol/L和10mmol/L的二甲雙胍進(jìn)行藥物干預(yù)48h。同時(shí)使用等體積無(wú)血清的RPMI1640培養(yǎng)液作為對(duì)照組。將Ishikawa細(xì)胞按照不同干預(yù)分組進(jìn)行Transwell遷移小室和細(xì)胞劃痕法檢測(cè),以了解不同濃度二甲雙胍對(duì)Ishikawa細(xì)胞遷移能力影響的差異,同時(shí)提取各組細(xì)胞的RNA及總蛋白,分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westem-blot蛋白電泳對(duì)各組REDD1、AKT、mTOR mRNA表達(dá)、REDD1、AKT、p-AKT蛋白表達(dá)的程度進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:1、二甲雙胍能夠明顯抑制子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞的遷移能力,同時(shí)其抑制程度隨著二甲雙胍濃度增加而增大,當(dāng)二甲雙胍濃度達(dá)到10mmol/L時(shí),其對(duì)細(xì)胞遷移能力的抑制作用最強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、不同濃度的二甲雙胍作用于Ishikawa細(xì)胞以后,能明顯提高REDD1/mTOR信號(hào)通路中REDD1的表達(dá),分別是對(duì)照組的2.97倍、3.25倍、4.87倍,二甲雙胍濃度1mmol/L組與對(duì)照組、10mmol/L組與其它組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AKT mRNA的表達(dá)分別是對(duì)照組的1.10倍、1.02倍、1.00倍,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同時(shí)能明顯下調(diào)其下游mTOR基因的表達(dá),分別是對(duì)照組的0.70倍、0.54倍、0.37倍,二甲雙胍濃度1mmol/L組與對(duì)照組、10mmol/L組與其它組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、二甲雙胍能夠明顯增加REDD1/AKT/mTOR信號(hào)通路中的REDD1蛋白的表達(dá),同時(shí)還可對(duì)AKT磷酸化水平即p-AKT蛋白的表達(dá)進(jìn)行抑制,但對(duì)AKT蛋白的表達(dá)無(wú)明顯影響。p-AKT的表達(dá)分別是對(duì)照組的0.70倍、0.51倍、0.20倍,而且10mmol/L組的二甲雙胍抑制能力最強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。REDD1蛋白的表達(dá)分別為對(duì)照組的3.05倍、5.51倍、11.92倍,也呈現(xiàn)出劑量依賴的趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AKT的磷酸化水平(P-AKT/AKT比值)也有較明顯的下降,AKT的磷酸化水平分別是對(duì)照組的0.62倍、0.36倍、0.15倍。AKT蛋白的表達(dá)分別是對(duì)照組的1.06倍、1.03倍、1.07倍,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:二甲雙胍在作用于子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞后,可以抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的遷移能力,且抑制程度隨著二甲雙胍濃度的上升而增強(qiáng);能夠上調(diào)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi)REDD1的表達(dá),抑制mTOR表達(dá),同時(shí)還可下調(diào)AKT磷酸化水平,這些效應(yīng)均具有劑量依賴性。而REDD1/mTOR與AKT/mTOR信號(hào)通路可能是調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞遷移侵襲能力的關(guān)鍵細(xì)胞信號(hào)網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)。二甲雙胍可能通過(guò)REDD1及AKT/mTOR信號(hào)通路的交互作用來(lái)抑制REDD1的表達(dá),下調(diào)AKT的磷酸化水平進(jìn)而抑制mTOR的表達(dá),最終發(fā)揮出二甲雙胍在Ishikawa細(xì)胞系中的抗腫瘤細(xì)胞遷移侵襲的作用。
【關(guān)鍵詞】：二甲雙胍 人子宮內(nèi)膜癌 細(xì)胞遷移 REDD1 mTOR信號(hào)通路 AKT磷酸化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英縮略詞表10-11
• 第1章 前言11-15
• 第2章 材料與方法15-28
• 2.1 主要耗材及試劑15-17
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞及干預(yù)藥物15
• 2.1.2 主要試劑及其產(chǎn)地15-16
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備及產(chǎn)地16-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)具體方法17-28
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)用品及液體的配制17-19
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)方法19-20
• 2.2.3 分組及藥物干預(yù)20
• 2.2.4 Ishikawa細(xì)胞遷移能力檢測(cè)20-21
• 2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)21-24
• 2.2.6 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)24-27
• 2.2.7 數(shù)據(jù)處理27-28
• 第3章 結(jié)果28-35
• 3.1 二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞遷移的影響28-31
• 3.1.1 二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞Transwell assay小室穿越遷移能力的影響28-30
• 3.1.2 細(xì)胞劃痕法(Wound healing assay)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞爬行遷移能力的影響30-31
• 3.2 二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞REDD1及AKT/mTOR信號(hào)通路的影響31-35
• 3.2.1 二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞REDD1及AKT/mTOR信號(hào)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)和磷酸化水平的影響31-33
• 3.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞REDD1及AKT/mTOR信號(hào)通路中相關(guān)基因表達(dá)的影響33-35
• 第4章 討論35-41
• 第5章 結(jié)論與展望41-43
• 5.1 結(jié)論41
• 5.2 展望41-43
• 致謝43-44
• 參考文獻(xiàn)44-54
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果54-55
• 綜述55-61
• 參考文獻(xiàn)58-61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王夢(mèng)瑩;秦淑蘭;賴曉陽(yáng);;二甲雙胍對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制[J];山東醫(yī)藥;2016年01期

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  本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞抑制作用及其機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：442048