本文關(guān)鍵詞：EFEMP1對(duì)卵巢癌增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移作用探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究依據(jù)卵巢癌為婦科惡性腫瘤,死亡率高居不下,其發(fā)病隱匿,易于腹腔廣泛播散和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,是其發(fā)現(xiàn)晚、死亡率高的關(guān)鍵。EFEMP1分子是新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞基質(zhì)fibulin家族蛋白,研究表明EFEMP1參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)、粘附和運(yùn)動(dòng)過(guò)程,并與多種腫瘤的發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。我們利用有限稀釋法篩選出高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株S1、S21,它們具有高度的同源性,能保證異質(zhì)性最小的要求,且具有不同的侵襲轉(zhuǎn)移特性。我們利用DNA微陣列分析對(duì)兩者的基因表達(dá)差異進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)基因差異1.5倍以上的多達(dá)1596個(gè)基因,其中EFEMP1在高轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S1中呈現(xiàn)高表達(dá),而在低轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S21中呈現(xiàn)低表達(dá),兩者差異11.739倍,差異顯著(P=0.0030.001)。細(xì)胞爬片、Real time RT-PCR和Western blot均證實(shí)在高轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S1中EFEMP1的表達(dá)明顯高于低轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S21中的表達(dá)。同時(shí)在前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)EFEMP1在卵巢癌組織中明顯上調(diào),同時(shí)其過(guò)表達(dá)與卵巢癌惡性分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。據(jù)以上數(shù)據(jù),我們推測(cè)EFEMP1可能與卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系。因此,本課題展開(kāi)EFEMP1對(duì)卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移作用影響的探究。研究目的1.明確EFEMP1在影響卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中作用影響；2.明確EFEMP1在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為卵巢癌的預(yù)后判斷和更有效抑制侵襲性的卵巢癌提供理論基礎(chǔ)。研究方法(1)有限稀釋法從同一卵巢癌細(xì)胞系SKOV3中分離得到高轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S1、低轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S21,S1和S21具有高度同源性,能夠滿足異質(zhì)性最小的要求。(2)利用DNA微陣列分析檢測(cè)兩細(xì)胞株基因表達(dá)差異,同時(shí)用細(xì)胞爬片、real time RT-PCR和western blot進(jìn)行驗(yàn)證。(3)構(gòu)建慢病毒載體外源性強(qiáng)制EFEMP1在低轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S21中高表達(dá),同時(shí)利用RNA干擾沉默EFEMP1在高轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S1中的表達(dá),利用細(xì)胞體外功能分析技術(shù)比較外源性強(qiáng)制高表達(dá)EFEMP1前后與RNA干擾沉默EFEMP1前后細(xì)胞增殖、凋亡與侵襲移動(dòng)能力變化。(4)進(jìn)一步構(gòu)建可視裸鼠移植瘤模型,體內(nèi)模擬卵巢癌生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程,深入研究EFEMP1在卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲與移動(dòng)作用影響。(5)體內(nèi)體外全面深入研究EFEMP1分子在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。研究結(jié)果1.EFEMP1分子在不同轉(zhuǎn)移能力細(xì)胞株中表達(dá)差異DNA微陣列分析結(jié)果顯示,基因差異1.5倍以上的多達(dá)1596個(gè)基因,主要涉及TRAIL、SIP、 TNF、 PI3K、 EGFR1、TGFBR等多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,其中EFEMP1在高轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S1中呈現(xiàn)高表達(dá),而在低轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S21中呈現(xiàn)低表達(dá),兩者差異11.739倍,差異顯著(P=0.0030.001),細(xì)胞爬片、real time RT-PCR和western blot均證實(shí)EFEMP1在高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中表達(dá)差異。2.外源性強(qiáng)制EFEMP1與RNA干擾沉默EFEMP1前后細(xì)胞功能變化(1)慢病毒感染細(xì)胞后,轉(zhuǎn)染效率80%以上,real time RT-PCR、western blot及免疫組化驗(yàn)證了轉(zhuǎn)染效果。(2)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線與細(xì)胞軟瓊脂克隆技術(shù)結(jié)果顯示RNA干擾沉默EFEMP1顯著抑制了高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株細(xì)胞增殖,同時(shí)外源性強(qiáng)制EFEMP1高表達(dá)的低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株增殖能力顯著提高。(3)細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果, EFEMP1降表達(dá)導(dǎo)致G1/G0期細(xì)胞增多,S期(分裂期)細(xì)胞減少,抑制細(xì)胞增殖；EFEMP1過(guò)表達(dá)細(xì)胞株G1/G0期細(xì)胞減少,S期(分裂期)細(xì)胞增多,促進(jìn)細(xì)胞增殖。(4)細(xì)胞侵襲與移動(dòng)實(shí)驗(yàn)表明,外源性強(qiáng)制EFEMP1過(guò)表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞侵襲與移動(dòng),而RNA干擾沉默EFEMP1抑制細(xì)胞侵襲與移動(dòng)。3.建立裸鼠移植瘤模型,體內(nèi)觀察EFEMP1對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用的影響(1)基因干擾組,所形成瘤體體積較小,腫瘤生長(zhǎng)較緩慢,成瘤率亦較低；基因過(guò)表達(dá)組腫瘤生長(zhǎng)快,體積大,成瘤率為100%。(2)基因過(guò)表達(dá)組所形成的瘤塊組織呈多結(jié)節(jié)狀,包膜間斷不完整,與周圍組織連接較為緊密,不易分離�；蚋蓴_組所形成的瘤塊組織相對(duì)較小,形狀光滑橢圓,包膜也較為完整且易于分離。(3)移植瘤組織切片結(jié)果顯示,相對(duì)于高轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株S1,EFEMP1干擾組小鼠腫瘤組織中腫瘤細(xì)胞較少,并且無(wú)肺轉(zhuǎn)移；而與低轉(zhuǎn)移克隆細(xì)胞株相比,EFEMP1過(guò)表達(dá)組中腫瘤細(xì)胞增多,肺轉(zhuǎn)移增加,低轉(zhuǎn)移組無(wú)肺轉(zhuǎn)移；S1、S21-exEFEMP1、的肺轉(zhuǎn)移率分別為100%、80%。研究結(jié)論(1)EFEMP1分子與卵巢癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；(2)EFEMP1分子促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲與移動(dòng)；(3)EFEMP1分子促使分裂期細(xì)胞增多,EFEMP1降表達(dá)造成細(xì)胞周期阻滯,從而促進(jìn)細(xì)胞增殖,減少凋亡。
【關(guān)鍵詞】：EFEMP1 卵巢癌 增殖 侵襲 移動(dòng)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 縮略詞表13-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-32
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料17-21
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法步驟21-32
• 結(jié)果與分析32-43
• 1. 細(xì)胞培養(yǎng)32-33
• 2. 慢病毒轉(zhuǎn)染情況33-35
• 3. EFEMP1影響卵巢癌細(xì)胞增殖能力35-37
• 4. EFEMP1對(duì)細(xì)胞周期影響情況37-38
• 5. EFEMP1對(duì)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力影響38-40
• 6. EFEMP1對(duì)裸鼠體內(nèi)移植瘤生長(zhǎng)情況40-43
• 討論43-46
• 結(jié)論46
• 創(chuàng)新性46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 致謝53-55
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文55-56
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表56

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4 ;卵巢腫瘤[J];國(guó)外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年10期

5 秦平,陳焰;二維超聲及彩色多普勒聯(lián)合應(yīng)用對(duì)卵巢腫瘤的診斷[J];中國(guó)超聲醫(yī)學(xué)雜志;2001年07期

6 王月香;超聲多普勒技術(shù)在卵巢腫瘤診斷上的新進(jìn)展[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年06期

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10 ;卵巢腫瘤[J];國(guó)外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年03期

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9 許幼峰;郭e

本文編號(hào)：439591