本文關(guān)鍵詞：GRP78在卵巢癌細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究旨在探討GRP78在卵巢癌細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡中的作用及其作用機(jī)制,了解其對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)情況及對(duì)順鉑敏感性的影響,從而為卵巢癌的治療提供新思路,為克服卵巢癌順鉑耐藥提供新方法。方法本研究通過體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3,以GRP78調(diào)節(jié)因子BAPTA-AM、A23187分別下調(diào)、上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中GRP78表達(dá),以RT-PCR、Western Blot蛋白印跡法分別檢測(cè)SKOV3細(xì)胞中Beclin-1、Bcl-2、CHOP m RNA及其蛋白表達(dá)水平改變;以GFP-LC3-II熒光染色法觀察細(xì)胞自噬水平變化;以Annexin V-FITC法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡變化,以明確GRP78在卵巢癌細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡中的作用;以MTT法檢測(cè)順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3的生長(zhǎng)抑制率,了解GRP78對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)情況及其對(duì)順鉑敏感性的影響。結(jié)果1.SKOV3細(xì)胞中GRP78對(duì)Beclin1、Bcl-2、CHOP m RNA表達(dá)的影響經(jīng)GRP78調(diào)節(jié)因子BAPTA-AM和A23187分別下調(diào)、上調(diào)SKOV3細(xì)胞中GRP78表達(dá)后,卵巢癌細(xì)胞SKOV3中Beclin1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.8605±0.05478)、(0.6537±0.06500),與對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量(0.7724±0.02871)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.768,P0.05;t=2.893,P0.05)。Bcl-2 m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.7136±0.03230)、(0.9075±0.04730),與對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量(0.8450±0.01785)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.334,P0.05;t=3.920,P0.05)。CHOP m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.8108±0.00380)、(0.6195±0.06148),與對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量(0.7116±0.07689)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.141,P0.05;t=2.877,P0.05)。2.SKOV3細(xì)胞中GRP78對(duì)Beclin1、Bcl-2、CHOP蛋白表達(dá)的影響經(jīng)GRP78調(diào)節(jié)因子BAPTA-AM和A23187分別下調(diào)、上調(diào)SKOV3細(xì)胞中GRP78表達(dá)后,卵巢癌細(xì)胞SKOV3中Beclin1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.9521±0.02238)、(0.6375±0.02489),與對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量(0.7890±0.08349)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.268,P0.05;t=3.012,P0.05)。Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.3854±0.03231)、(0.5956±0.02902),與對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量(0.4918±0.03551)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.810,P0.05;t=3.248,P0.05)。CHOP蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.6813±0.09462)、(0.4313±0.09534),與對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量(0.5306±0.00110)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.404,P0.05;t=3.222,P0.05)。3.SKOV3細(xì)胞中GRP78對(duì)細(xì)胞自噬的影響經(jīng)GRP78調(diào)節(jié)因子BAPTA-AM和A23187分別下調(diào)、上調(diào)SKOV3細(xì)胞中GRP78表達(dá)后,卵巢癌細(xì)胞SKOV3中自噬體熒光值分別為(706.25±117.258)、(473.17±127.903),與對(duì)照組熒光值(594.58±126.232)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.381,P0.05;t=4.380,P0.05)。4.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)GRP78對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響B(tài)APTA-AM處理后,SKOV3細(xì)胞凋亡率為27.42%,對(duì)照組為19.57%,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比凋亡率增加。而A23187處理后,SKOV3細(xì)胞凋亡率為12.21%,與對(duì)照組相比凋亡率降低。5.BAPTA-AM、A23187對(duì)SKOV3細(xì)胞順鉑敏感性的影響SKOV3細(xì)胞的順鉑IC50為(3.02±0.624)μg/ml。經(jīng)BAPTA-AM下調(diào)SKOV3細(xì)胞GRP78表達(dá)后,SKOV3細(xì)胞的順鉑IC50為(2.00±0.172)μg/ml,其對(duì)順鉑的敏感性增加了33.78%,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.787,P0.05)。而經(jīng)A23187上調(diào)GRP78后,SKOV3細(xì)胞順鉑IC50為(4.91±2.515)μg/ml,對(duì)順鉑敏感性降低了62.58%,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=29.516,P0.05)。結(jié)論1.GRP78通過調(diào)節(jié)Beclin1、Bcl-2、CHOP等基因表達(dá)而影響卵巢癌SKOV3細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡水平,進(jìn)而影響卵巢癌順鉑敏感性,調(diào)節(jié)GRP78表達(dá)可能成為治療卵巢癌、提高卵巢癌順鉑敏感性的新方法。2.GRP78可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡途徑在卵巢癌順鉑耐藥中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 GPR78 自噬 凋亡 順鉑耐藥
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語/符號(hào)說明12-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 材料和方法16-32
• 1.1 材料16-20
• 1.1.1 細(xì)胞株16
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備16-17
• 1.1.3 相關(guān)試劑及耗材17-18
• 1.1.4 主要液體配制18-20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法20
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)20
• 1.2.2 藥物配制20
• 1.3 RT-PCR檢測(cè)SKOV3細(xì)胞中Beclin1、Bcl-2、CHOP的mRNA表達(dá)20-24
• 1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理20
• 1.3.2 細(xì)胞總RNA提取20-21
• 1.3.3 紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度和純度21
• 1.3.4 RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA21
• 1.3.5 PCR21-23
• 1.3.6 瓊脂糖凝膠電泳23
• 1.3.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析方法23-24
• 1.4 Western Blot法檢測(cè)SKOV3細(xì)胞中Beclin1、Bcl-2、CHOP的蛋白表達(dá)24-28
• 1.4.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理24
• 1.4.2 細(xì)胞總蛋白的提取24
• 1.4.3 蛋白質(zhì)總濃度的測(cè)定24-25
• 1.4.4 蛋白質(zhì)變性25
• 1.4.5 SDS-PAGE電泳、電轉(zhuǎn)移及封閉25-27
• 1.4.6 蛋白質(zhì)免疫檢測(cè)27
• 1.4.7 辣根過氧化物酶（HRP）法顯影27-28
• 1.4.8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析方法28
• 1.5 GFP-LC3-Ⅱ熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞自噬28-29
• 1.5.1 原理28
• 1.5.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理28
• 1.5.3 BAPTA-AM及A23187分別對(duì)SKOV3細(xì)胞自噬的影響28-29
• 1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SKOV3細(xì)胞凋亡29-30
• 1.6.1 原理29
• 1.6.2 細(xì)胞接種及培養(yǎng)29
• 1.6.3 細(xì)胞分組及處理29-30
• 1.7 MTT法測(cè)定順鉑、BAPTA-AM及A23187聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響30-31
• 1.7.1 MTT法的原理30
• 1.7.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理30-31
• 1.7.3 BAPTA-AM及A23187分別聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響31
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法31-32
• 結(jié)果32-36
• 2.1 SKOV3細(xì)胞中GRP78對(duì)Beclin1、Bcl-2、CHOP mRNA表達(dá)的影響32-33
• 2.2 SKOV3細(xì)胞中GRP78對(duì)Beclin1、Bcl-2、CHOP蛋白表達(dá)的影響33-34
• 2.3 GRP78對(duì)SKOV3細(xì)胞自噬的影響34
• 2.4 GRP78對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響34-35
• 2.5 BAPTA-AM、A23187對(duì)SKOV3細(xì)胞順鉑敏感性的影響35-36
• 討論36-45
• 3.1 GRP78與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激36-37
• 3.2 GRP78在細(xì)胞自噬中的作用37-39
• 3.3 GRP78在細(xì)胞凋亡中的作用39-43
• 3.4 GRP78對(duì)卵巢癌細(xì)胞順鉑敏感性的影響43-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 綜述 細(xì)胞自噬及自噬相關(guān)基因Beclin1與卵巢癌52-63
• 綜述參考文獻(xiàn)58-63
• 致謝63

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉爽;林靜嫻;劉琦;石群立;王建東;吳元赭;;維A酸干預(yù)前后卵巢癌細(xì)胞中維A酸受體的表達(dá)變化及意義[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2007年11期

2 ;發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];生命世界;2009年02期

3 ;美發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2009年04期

4 向君彥;夏新蜀;王昕娜;徐靜;王萍;江園;余和平;白定群;許川山;;低強(qiáng)度中頻超聲殺傷卵巢癌細(xì)胞的初步研究[J];激光雜志;2011年01期

5 陳韻仙;;下泌尿道切除作為卵巢癌細(xì)胞減少術(shù)的一部分[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè);1983年03期

6 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2對(duì)卵巢癌細(xì)胞遷徙和浸潤(rùn)能力的影響[J];癌癥;2003年10期

7 ;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[J];發(fā)明與創(chuàng)新;2003年12期

8 高琨,李力,陳心秋,張瑋;雌孕激素對(duì)卵巢癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響[J];腫瘤防治研究;2004年04期

9 王威廉,陳心秋,恩帝安,馬加薩,周德南,唐凱,黃薇;抗卵巢癌細(xì)胞膜抗體對(duì)卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)及荷瘤小鼠的體內(nèi)聚集性的實(shí)驗(yàn)研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

10 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力的實(shí)驗(yàn)研究[J];腫瘤;2004年05期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王文霞;孔北華;李鵬;曲迅;;蛋白酶體抑制劑對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用機(jī)制[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 劉娟娟;林蓓;趙越;李飛飛;郝瑩瑩;張帆;朱連成;張淑蘭;;巖藻糖基化抗原對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];東北三省第四屆婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

3 陳心秋;王威廉;趙芳芳;周德南;唐凱;;~(131)Ⅰ—抗卵巢癌抗體聯(lián)合外放射對(duì)卵巢癌細(xì)胞的體外殺傷實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2003年

4 王威廉;陳心秋;恩帝安.馬加薩;周德南;唐凱;;抗卵巢癌抗體對(duì)卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒及載瘤裸鼠體內(nèi)聚集性實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2003年

5 許沈華;牟瀚舟;顧琳慧;朱赤紅;劉祥麟;;高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞差異表達(dá)基因在染色體定位及其功能[A];浙江省生理科學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

6 唐東平;陳心秋;唐凱;張潔清;賀海平;;11種化療藥物對(duì)卵巢癌細(xì)胞的抑制作用及其有核細(xì)胞細(xì)胞毒性研究[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

7 李曉峰;王欣;馬開東;劉寶林;;卵巢癌細(xì)胞的低溫保存及致死特性研究[A];上海市制冷學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

8 梁念慈;何太平;覃燕梅;吳科鋒;;抗癌草藥半邊旗有效成分對(duì)卵巢癌細(xì)胞基因表達(dá)的影響[A];第十屆全國生化與分子藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年

9 郝瑩瑩;林蓓;趙越;歐陽玲;張淑蘭;;α1,2巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 李長(zhǎng)東;張為遠(yuǎn);苑春莉;韓麗英;;卵巢癌細(xì)胞對(duì)人樹突狀細(xì)胞成熟及功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會(huì)暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 記者 任海軍;卵巢癌為何常常復(fù)活？生死命懸一基因[N];新華每日電訊;2009年

2 靖九江;4-HPR有望用于治療卵巢癌[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

3 邰 舉;韓國醫(yī)學(xué)專家發(fā)現(xiàn)精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

4 邰舉;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王萍;丙泊酚對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲和紫杉醇誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用中轉(zhuǎn)錄因子Slug的影響[D];山東大學(xué);2015年

2 魏星;CGI-58基因調(diào)控脂代謝介導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李曉;卵巢癌細(xì)胞影響外周血T淋巴細(xì)胞功能和分化的研究[D];浙江大學(xué);2006年

4 彭萍;白細(xì)胞介素12基因轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞后和卵巢癌細(xì)胞融合作為卵巢癌腫瘤疫苗的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

5 張晶晶;卵巢癌細(xì)胞與腹膜間皮細(xì)胞相互作用對(duì)侵襲轉(zhuǎn)移微環(huán)境的影響[D];山東大學(xué);2006年

6 李慧慧;雌激素及其代謝物和抗壞血酸對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用及相互影響[D];山東大學(xué);2013年

7 李留霞;基因調(diào)控溶血磷脂酸作用通路抑制卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2008年

8 黃妍;卵泡刺激素對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 劉穎濤;Rab25對(duì)卵巢癌的促進(jìn)作用及其分子調(diào)節(jié)機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 李琴華;制瘤素對(duì)卵巢癌細(xì)胞的影響及其機(jī)制的體外研究[D];吉林大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曾麗;AKT2通過PKM2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞增殖作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 雷婧;SDF-1激活PI3K-Akt通路在卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

3 牛貝貝;GDF15對(duì)卵巢癌細(xì)胞遷移、增殖的影響及其可能機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 陳燕;卡鉑與吉西他濱單獨(dú)或聯(lián)合用藥對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3及裸鼠皮下移植腫瘤生長(zhǎng)抑制作用的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 李釗;應(yīng)用葉酸受體靶向} 米載體增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞光動(dòng)力殺傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

6 劉瑞寒;塞來昔布誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

7 侯棟;PARP1在卵巢癌的表達(dá)及抗氧化作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 周靜;PADI4基因?qū)Σ煌琾53狀態(tài)的卵巢癌細(xì)胞系生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的影響[D];山東大學(xué);2015年

9 林怡君;樺木酸誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞CA0V3凋亡機(jī)制的研究[D];延邊大學(xué);2015年

10 姜霞;miR-182對(duì)瘦素誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及調(diào)控機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：GRP78在卵巢癌細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：419449