目的:神經(jīng)管畸形(neural tube defects,NTDs)是一種常見的出生缺陷,通常是由胚胎發(fā)育早期神經(jīng)管閉合不完全或者閉合失敗引起的。NTDs的發(fā)病率在1‰-5‰,其危險因素涉及環(huán)境、生物、遺傳、輻射和化學藥品等。NTDs作為一種復(fù)雜的多基因疾病,目前尚不清楚其具體病因,其遺傳因素中的基因突變或各信號通路中分子間的相互作用和表達調(diào)控機制異常,可能在NTDs的發(fā)生中起著重要作用。細胞凋亡又稱細胞程序性死亡,在胚胎發(fā)育、組織器官形態(tài)形成和功能確定等生命活動中普遍存在并發(fā)揮著重要作用。研究表明,在神經(jīng)管發(fā)育過程中,由于自身基因缺陷或其他因素引起的細胞凋亡相關(guān)基因的功能紊亂,打破了細胞增殖與凋亡的動態(tài)平衡,則會導致NTDs的發(fā)生。在前期研究中,我們分別發(fā)現(xiàn)microRNA-322(miR-322)和前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9型(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在NTDs中低表達:在糖尿病引起的NTDs中,mi R-322低表達,且抑制高糖誘導的小鼠神經(jīng)干細胞凋亡;在對E11孕鼠血清的蛋白質(zhì)組的分析中發(fā)現(xiàn),與對照組相...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

在孕小鼠E8.5灌胃給予ATRA(70mg/kg),制造胎鼠NTDs模型,并于E9.5觀察胚胎發(fā)育形態(tài)。如圖1.1A所示,對照組小鼠胚胎發(fā)育正常,尾部圓潤飽滿,神經(jīng)管閉合;NTDs組小鼠胚胎表現(xiàn)出發(fā)育遲緩,胚胎體積較小,且神經(jīng)管閉合失敗。隨后,使用HE染色觀察胎鼠骶尾部神經(jīng)管形態(tài)....

隨后,對兩組E9.5小鼠胚胎中miR-322和NOX4的表達水平進行檢測。如圖1.2A所示,使用qRT-PCR檢測miR-322的表達情況,在NTDs小鼠胚胎中miR-322表達水平明顯下調(diào);使用WesternBlot檢測NOX4蛋白的表達情況,發(fā)現(xiàn)NOX4在NTDs組表達明顯....

此外,采用免疫熒光和TUNEL雙染檢測NOX4與細胞凋亡之間的關(guān)聯(lián)。如圖1.3A、1.3B所示,在E9.5小鼠胚胎中,NOX4蛋白廣泛表達,且在NTDs組表達水平明顯高于對照組。通過免疫熒光與TUNEL雙染發(fā)現(xiàn),TUNEL陽性信號更多的與高表達NOX4的細胞共定位。圖1.3C展示....

生物信息網(wǎng)站(microRNA.org,TargetScan,starBase.)預(yù)測提示NOX4可能作為miR-322的候選靶基因。如圖1.4所示,在NOX4mRNA的3’UTR存在一個miR-322的潛在結(jié)合位點(2437-2460)。RNApulldown實驗驗證NO....

本文編號：4011475