本文關鍵詞：宮頸鱗癌中HPV E6與p53和PinX1表達水平及端粒酶活性關系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的：宮頸癌是威脅女性生殖健康的惡性腫瘤,其發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第三位,近年來年輕患者的宮頸癌發(fā)病率呈上升趨勢。由于其確切的發(fā)病機制目前仍然不清,因此給臨床防治帶來極大的困難。持續(xù)的高危型人乳頭瘤病毒(high-risk human papillomaviruses, HR-HPV)的感染,是導致宮頸癌發(fā)生的重要誘因。99%宮頸癌的患者合并了HPV感染。HPV可能通過某些機制啟動癌基因的激活進而使正常細胞發(fā)生轉化。研究發(fā)現(xiàn),在宮頸癌中HPV主要通過原癌蛋白E6來促進端粒酶活性。HPV E6能破壞細胞正常的調(diào)節(jié),包括急性損傷調(diào)節(jié)以及起始基因的穩(wěn)定,維持腫瘤的惡性表達。近來研究發(fā)現(xiàn),端粒是保護染色體末端的重要組成部分,端粒酶活性異常升高與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關,端粒酶過度激活會錯誤修復嚴重縮短的端粒,使得細胞無法進入正常死亡,反而向癌細胞轉化。野生型p53是重要的信號調(diào)節(jié)因子、抑癌基因。約一半的人類惡性腫瘤中p53基因發(fā)生了突變,突變型p53使損傷的DNA細胞進行惡性復制,p53突變成了癌基因。然而,在宮頸癌的相關研究中,p53主要以失活為主,很少發(fā)生突變,因此p53的失活對宮頸癌發(fā)生發(fā)展起著重要作用。另外,端粒酶的強效抑制因子PinX1是一種重要的抑癌基因,在正常的組織中幾乎都表達,在大部分的腫瘤中都可以發(fā)現(xiàn)PinX1的缺失。PinX1不僅強有力地抑制了端粒酶的活性,而且在端粒酶長度的維持上也起著重要的作用。新近研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌細胞系中PinX1是p53的新的靶基因,存在“p53-PinX1"通路,該通路可以被HPVE6沉默,然而宮頸癌在體組織中并未得到相關驗證。本研究選取宮頸鱗癌、宮頸鱗癌癌旁組織、正常宮頸組織三組對照研究。探討在體組織中HPV E6,p53, PinX1的表達變化,以及端粒酶活性、端粒長度變化情況。通過相關性分析,了解它們在體水平的內(nèi)在聯(lián)系,為"p53-PinX1"通路提供佐證,從而為宮頸癌的發(fā)病機制及臨床診治提供新思路和新靶點。主要研究內(nèi)容：第一部分宮頸鱗癌組織中HPV E6,p53及PinX1的表達1.檢測在體水平HPV E6,p53,PinX1分子的mRNA在宮頸鱗癌、癌旁組織、正常宮頸組織的表達水平；2.檢測宮頸癌組織、癌旁組織、正常宮頸組織中HPV E6.p53及PinX1蛋白的表達水平；3.通過免疫組化再次檢測HPV E6,p53,PinX1在三種組織中的表達及分布情況。第二部分宮頸鱗癌組織中端粒酶活性及端粒長度的變化1.檢測宮頸癌組織中端粒酶活性及端粒長度；2.檢測HPV E6,p53,PinX1,端粒酶活性及端粒長度的相關性。主要研究方法：1.由深圳華大基因提供HPV基因測序檢測,篩選HPV感染宮頸鱗癌及無HPV感染的正常宮頸,收集2013年3月-2014年2月第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院婦產(chǎn)科確診臨床分期I B1-Ⅱ A2未行放化療宮頸鱗癌患者17例；正常宮頸組織10例。2.qPCR和Western blot檢測相關分子在mRNA和蛋白的表達水平；3.免疫組化檢測HPV E6,p53,PinX1在宮頸鱗癌、癌旁組織、正常宮頸組織中的表達及分布情況；4.端粒酶活性(TRAP法)測定宮頸鱗癌、癌旁組織、正常宮頸組織中端粒酶活性的變化,并進行定量分析；5.利用基因組DNA作為模版,采用PCR方法檢測設計特異的端粒區(qū)域引物檢測不同組織中端粒的長度；6.Spearman相關性分析HPV E6,p53,PinX1,端粒酶活性,端粒長度在宮頸鱗癌中的關系。主要研究結果：1.在mRNA水平：宮頸鱗癌中HPV E6表達顯著高于癌旁組織(P0.05),因正常宮頸組織HPV E6幾乎不表達,故HPV E6無正常對照組；在宮頸鱗癌組織中p53及PinX1的表達顯著低于癌旁組織及正常宮頸組織(P0.05),癌旁組織中p53及PinX1的表達水平顯著低于正常組織(P0.05)；2.利用Western blot通過半定量分析,在宮頸癌中HPV E6的蛋白表達顯著高于癌旁組織(P0.01),同時p53、PinX1的蛋白表達顯著低于癌旁及正常組織(P0.01),在癌旁組織中p53及PinX1的表達水平顯著低于正常組織(P0.01)；3.免疫組化再次證實,HPV E6在宮頸癌中較癌旁組織HPV E6表達顯著增高,正常宮頸組織幾乎無HPV E6表達,p53、PinX1在宮頸癌組織中表達顯著低于癌旁及正常宮頸組織；4.與癌旁組織及正常宮頸組織相比宮頸鱗癌中端粒酶活性顯著增強(P0.01),端粒長度增加(P0.01)；5. Spearman相關性分析結果顯示：在宮頸癌中HPV E6表達與p53、PinX1呈負相關關系(P0.05),與端粒酶活性表達呈正相關關系(P0.01),p53表達與PinX1表達呈正相關關系(P0.01)。結論：在宮頸癌組織中發(fā)現(xiàn)HPV E6表達上調(diào),p53及PinX1表達下調(diào),同時端粒酶活性增強,端粒長度增加,這不僅為“p53-PinXl"通路提供了在體水平的佐證,存在“HPVE6→p53下調(diào)→PinX1下調(diào)→端粒酶活性升高、端粒長度增加”的宮頸癌發(fā)病機制,更提示該機制可能在宮頸癌的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。
【關鍵詞】：宮頸鱗癌 HPV E6 p53 PinX1 端粒
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 縮略表語4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 宮頸鱗癌組織中HPV E6,p53及PinX1的表達13-27
• 2.1 材料與方法13-21
• 2.2 結果21-24
• 2.3 討論24-26
• 2.4 小結26-27
• 第三章 宮頸鱗癌組織中端粒酶活性及端粒長度的變化27-41
• 3.1 材料與方法27-36
• 3.2 結果36-39
• 3.3 討論39-40
• 3.4 小結40-41
• 全文總結41-42
• 參考文獻42-45
• 文獻綜述 宮頸癌的診治進展45-52
• 參考文獻49-52
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況52-53
• 致謝53

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賈傳弟;;高效液相色譜法測定敗醬草片中芍藥苷的含量測定[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2010年04期

2 徐屏;劉建忠;梁文珍;;子宮內(nèi)膜異位癥術后應用化ve湯臨床觀察[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2010年06期

3 馬新英;張鑫;劉海飛;劉素潔;趙子英;;調(diào)肝健脾解毒湯防治宮頸癌盆腔放療所致急性直腸放射反應臨床研究[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2011年11期

4 周加林;施衛(wèi)兵;;自擬茵蒲合劑治療妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥30例[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2012年07期

5 牛玉敏;朱桃花;;疤痕子宮再次妊娠分娩方式探討[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術學院學報;2009年02期

6 徐嶸嶸;;剖宮產(chǎn)率上升的主要因素分析及應對措施探討[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術學院學報;2009年04期

7 孫陽春;;67例子宮腺肌病臨床分析[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術學院學報;2009年05期

8 徐慶先;陳珉;;96例子宮內(nèi)膜異位癥的臨床分析[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術學院學報;2010年03期

9 張本順;;胎盤植入保守治療17例臨床分析[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術學院學報;2011年04期

10 錢玉靜;;新生兒窒息產(chǎn)科因素分析與預防[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術學院學報;2011年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方家;李林;梁小濱;刁軍成;;無排卵性不孕癥臨床研究及新展望[A];江西省第八次中西醫(yī)結合活血化瘀學術研討會暨心腦血管病培訓班論文集[C];2009年

2 吳棟才;戴英;陶久紅;聞新慧;;HPV及TCT應用于宮頸癌篩查的研究[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第十一屆全國學術會議論文匯編[C];2011年

3 沈莉;;產(chǎn)后抑郁癥中醫(yī)藥研究進展[A];中國中西醫(yī)結合學會精神疾病專業(yè)委員會第十一屆學術年會論文匯編[C];2012年

4 王榮國;;針刀結合骨盆矯正治療原發(fā)性痛經(jīng)3例[A];2011中國針灸學會年會論文集（摘要）[C];2011年

5 邵梅;;何嘉琳主任治療內(nèi)異癥之經(jīng)行吐衄經(jīng)驗[A];第十一次全國中醫(yī)婦科學術大會論文集[C];2011年

6 張琪;朱名宸;;自擬促排卵方治療排卵障礙型不孕癥60例臨床觀察[A];第十一次全國中醫(yī)婦科學術大會論文集[C];2011年

7 徐慧軍;顏建敏;薛輝;;加減益經(jīng)湯對有卵泡型卵巢早衰的臨床研究[A];第五次全國中醫(yī)藥防治血栓病學術交流會暨中華中醫(yī)藥學會血栓病分會換屆改選工作會議論文集[C];2011年

8 陳素琴;;隱性胎盤早剝35例診治分析[A];浙江省第十九屆農(nóng)村衛(wèi)生改革與發(fā)展學術會議大會論文集[C];2011年

9 許麗琴;周立清;;中西醫(yī)結合治療慢性盆腔炎68例療效觀察[A];浙江省第十九屆農(nóng)村衛(wèi)生改革與發(fā)展學術會議大會論文集[C];2011年

10 俞信忠;許平;曾艷;吳滿武;范佳鳴;錢磊;楊志浩;金晶;;536例女性單純皰疹病毒-Ⅱ型近期感染狀況分析[A];第六屆全國優(yōu)生科學大會論文匯編[C];2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦明春;壽胎丸加味方治療腎虛型先兆流產(chǎn)、習慣性流產(chǎn)的臨床研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2010年

2 徐洪斌;宮頸癌新輔助化療和影響根治性治療后預后因素的評估[D];華中科技大學;2011年

3 熊瑾;得氣、心理因素對針刺治療原發(fā)性痛經(jīng)療效影響的臨床研究[D];華中科技大學;2011年

4 葉茂;復方金剛藤膠囊的臨床前研究[D];華中科技大學;2011年

5 曾晶;益氣化瘀方對藥物流產(chǎn)及產(chǎn)后炎癥模型大鼠子宮復舊不全干預作用實驗研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2011年

6 宋燕;子宮肌瘤全子宮切除術中西醫(yī)結合臨床路徑的構建和評價性研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

7 方穎妍;肝郁型高泌乳素血癥患者人格特征及大鼠模型神經(jīng)內(nèi)分泌改變的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

8 孫曉玲;基于沙眼衣原體感染的抗精子免疫模型及中藥干預和免疫功能變化[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

9 陳妙霞;針藥結合對圍絕經(jīng)期綜合征療效及生存質(zhì)量的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

10 孫娟;艾灸神闕穴配合溫針灸治療原發(fā)性痛經(jīng)的臨床及實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 江源;術中應用5-Fu緩釋劑治療晚期卵巢癌的近期療效觀察[D];南京醫(yī)科大學;2010年

2 馮秀麗;RUNX3和EZH2蛋白在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達[D];鄭州大學;2010年

3 姜平;新密市農(nóng)村地區(qū)子宮頸癌認知現(xiàn)狀及篩查結果分析[D];鄭州大學;2010年

4 馬麗紅;FADD、Livin在稽留流產(chǎn)絨毛組織中的表達及其意義[D];鄭州大學;2010年

5 張林東;PLGF、Bcl-2及FasL在胎兒生長受限中的研究[D];鄭州大學;2010年

6 張小明;圍絕經(jīng)期抑郁癥與性激素水平關系的研究[D];鄭州大學;2010年

7 代波;中藥五號栓治療宮頸糜爛濕熱下注證臨床觀察[D];湖南中醫(yī)藥大學;2010年

8 王麗君;紫石英對排卵障礙大鼠模型卵巢局部FSH、LH影響的機制研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2010年

9 張樹怡;補腎化瘀方對PCO模型大鼠卵巢顆粒細胞膜上INSR和IGFR基因表達的影響[D];湖南中醫(yī)藥大學;2010年

10 李艷麗;慢性乙型肝炎中醫(yī)證型與IL-4相關性研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2010年

  本文關鍵詞：宮頸鱗癌中HPV E6與p53和PinX1表達水平及端粒酶活性關系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：396096