[目的]構(gòu)建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表達(dá)載體,為進(jìn)一步制備ATRX多克隆抗體以及探討ATRX蛋白在HPV16致宮頸癌中的作用奠定基礎(chǔ)。[方法]以IF-GFP-ATRX質(zhì)粒為模板,PCR擴增獲得ATRX-C_2193-2492基因片段,并克隆至p ET30a(+)空載體上,轉(zhuǎn)化E.coli BL21感受態(tài)細(xì)胞,構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET30a/ATRX-C_2193-2492,經(jīng)PCR、雙酶切以及測序鑒定。將構(gòu)建好的質(zhì)粒p ET30a/ATRX-C_2193-2492轉(zhuǎn)化,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),利用鎳離子親和層析法純化6His-ATRX-C_2193-2492蛋白。[結(jié)果]成功獲得900 bp的ATRX-C_2193-2492基因片段并構(gòu)建了原核表達(dá)載體p ET30a/ATRX-C_2193-2492,且該載體能在E.coli中誘導(dǎo)表達(dá)分子量約34 k Da蛋白產(chǎn)物。[結(jié)論]原核表達(dá)載體p ET30a/ATRX-C_2193-2492能成功誘導(dǎo)...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 ATRX-C2193-2492基因擴增
        1.2.2 p ET30a空質(zhì)粒以及ATRX-C2193-2492PCR產(chǎn)物的雙酶切、連接與轉(zhuǎn)化
        1.2.3 重組載體p ET30a/ATRX-C2193-2492的鑒定
        1.2.4 6His-ATRX-C2193-2492蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
        1.2.5 6His-ATRX-C2193-2492蛋白的純化
2 結(jié)果與分析
    2.1 PCR擴增ATRX-C2193-2492片段
    2.2 p ET30a/ATRX-C2193-2492載體的PCR鑒定
    2.3 p ET30a/ATRX-C2193-2492載體的雙酶切鑒定
    2.4 融合蛋白6His-ATRX-C2193-2492的誘導(dǎo)表達(dá)及其鑒定
    2.5 融合蛋白6His-ATRX-C2193-2492的純化
3 討論
4 結(jié)論



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