發(fā)布時(shí)間：2017-05-23 19:17

  本文關(guān)鍵詞：鉑耐藥和鉑敏感上皮性卵巢癌中HMGB1、BRCA1和P62蛋白的表達(dá)及其臨床意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：在體外細(xì)胞水平從細(xì)胞自噬角度探討卵巢癌耐藥的發(fā)生機(jī)制,檢測(cè)自噬調(diào)節(jié)基因HMGB1和P62在卵巢癌中的表達(dá)。免疫組化檢測(cè)耐藥相關(guān)基因BRCA1和自噬調(diào)節(jié)基因HMGB1和P62在上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況,分析其表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期、化療耐藥的關(guān)系以及兩兩之間表達(dá)的相關(guān)性,了解BRCA1、HMGB1和P62在卵巢癌中的表達(dá)、生物學(xué)行為及其預(yù)后的關(guān)系；進(jìn)一步闡明卵巢癌中細(xì)胞自噬相關(guān)基因]HMGB1和P62與耐藥基因BRCA1的關(guān)系,探討卵巢癌耐藥的機(jī)理,為指導(dǎo)臨床選擇合適的治療方案、判斷預(yù)后以及尋找有效的逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥方法提供理論依據(jù)。方法：(1)采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度順鉑(cisplatin, DDP)對(duì)SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞的抑制作用,以及用半定量PCR (Semi-quantitative PCR, RT-PCR)、Western Blotting等技術(shù),檢測(cè)HMGB1和P62的表達(dá)。(2)采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)BRCA1、HMGB1和P62在良性上皮性卵巢腫瘤組織、交界性腫瘤及上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)。其中良性上皮性卵巢腫瘤組織13例；卵巢交界性腫瘤組織8例；上皮性卵巢癌組織共39例,其中漿液性腺癌23例、粘液性腺癌4例、子宮內(nèi)膜樣腺癌5例、透明細(xì)胞癌5例、混合性癌2例。組織學(xué)分級(jí)：高分化8例、中低分化31例。(2012年)FIGO分期為：Ⅰ-Ⅱ期19例,Ⅲ-Ⅳ期20例；鉑敏感26例,鉑耐藥13例；(3)用SPSS19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,采用χ2檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.不同濃度DDP處理SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞后,均有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)及促凋亡作用,且呈時(shí)間和劑量依賴性。研究發(fā)現(xiàn)HMGB1 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)低于SKOV3細(xì)胞。P62 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)也低于SKOV3細(xì)胞。2.免疫組化結(jié)果顯示BRCA1蛋白位于細(xì)胞核中,呈棕褐色顆粒；而P62蛋白表達(dá)定位于胞漿中,呈棕褐色顆粒：HMGB1蛋白位于細(xì)胞胞核及部分胞漿,呈棕褐色顆粒。3. BRCA1蛋白的表達(dá)：在13例卵巢良性腫瘤組織中BRCA1蛋白表達(dá)陽(yáng)性的有7例(53.8%)；8例卵巢交界性腫瘤中BRCA1蛋白表達(dá)陽(yáng)性的4例(50%)；39例上皮性卵巢癌組織中表達(dá)陽(yáng)性的有8例(23.1%)。上皮性卵巢癌組織中BRCA1蛋白的表達(dá)水平明顯低于良性腫瘤及卵巢交界性腫瘤組織,有顯著性差異(χ2=6.440,P=0.0400.05)。BRCA1表達(dá)與臨床病理學(xué)特征無顯著相關(guān)性(P0.05)。在上皮性卵巢癌中BRCA1蛋白在鉑敏感卵巢癌的陽(yáng)性表達(dá)低于耐藥卵巢癌,具有極顯著的差異(χ2=7.863,P=0.0050.01)。4. HMGB1蛋白的表達(dá)：HMGB1在卵巢惡性腫瘤組織、卵巢癌交界性腫瘤、卵巢良性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為97.4%(38/39)、100%(8/8)、92.3%(12/13)。在不同卵巢組織中,HMGB1表達(dá)陽(yáng)性率無顯著差異(P0.05)。HMGB1表達(dá)與腫瘤組織類型有關(guān)(P0.05),與其它臨床病理學(xué)特征無顯著相關(guān)性。HMGB1蛋白在鉑敏感和耐藥性上皮性卵巢癌中無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.P62蛋白的表達(dá)：P62在卵巢惡性腫瘤組織、卵巢癌交界性腫瘤、卵巢良性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為53.8%(21/39)、50%(4/8)、0%(0/13)。上皮性卵巢癌組織中P62蛋白的表達(dá)水平明顯高于良性腫瘤及卵巢交界性腫瘤組織,有顯著性差異(χ2=11.117,P=0.004)。P62表達(dá)與腫瘤分期有關(guān),而與其它臨床病理學(xué)特征沒有顯著相關(guān)性。上皮性卵巢癌中P62蛋白在鉑敏感中的陽(yáng)性表達(dá)率高于耐藥卵巢癌,有顯著差異性(χ2=6.174,P=0.013)。6.在卵巢癌組織中,BRCA1和P62蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.399,P=0.012)。結(jié)論：1. HMGB1 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP中的表達(dá)率下調(diào),HMGB1在兩種細(xì)胞中呈無或弱相關(guān)性,HMGB1可能與卵巢癌耐藥無關(guān)。P62 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP中的表達(dá)率也下調(diào)。提示P62表達(dá)水平的變化在鉑耐藥卵巢癌中扮演著一定的角色,并可能與上皮性卵巢癌鉑耐藥的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。2.上皮性卵巢癌中BRCA1蛋白在鉑敏感卵巢癌的陽(yáng)性表達(dá)低于耐藥卵巢癌,說明BRCA1蛋白可能介導(dǎo)卵巢癌耐藥的發(fā)生、發(fā)展過程。3. HMGB1蛋白表達(dá)在不同卵巢組織和鉑敏感卵巢癌及耐藥卵巢癌中無明顯差異,可能與卵巢癌耐藥過程無關(guān)。HMGB1表達(dá)與腫瘤組織類型有關(guān),說明HMGB1可能參與了卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。4.P62蛋白的表達(dá)與卵巢癌臨床分期有關(guān),提示P62可能與卵巢癌的發(fā)展有關(guān)；上皮性卵巢癌中P62蛋白在鉑敏感卵巢癌的陽(yáng)性表達(dá)高于耐藥卵巢癌,說明P62蛋白可能參與卵巢癌耐藥的發(fā)生發(fā)展過程。5. BRCAl和P62在卵巢癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),P62陽(yáng)性表達(dá)越高,BRCA1陽(yáng)性表達(dá)則越低。兩者可能共同參與了卵巢癌的疾病惡性進(jìn)展過程及不良預(yù)后,對(duì)卵巢癌的預(yù)后及術(shù)后的治療可能有一定的指導(dǎo)作用。并且BRCA1和P62可作為預(yù)測(cè)上皮性卵巢癌鉑耐藥的標(biāo)志性蛋白。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 BRCA1 HMGB1 P62 自噬 免疫組織化學(xué)
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-16
• 英文縮略詞16-18
• 第一章 緒論18-30
• 1.1 卵巢癌及其耐藥的研究進(jìn)展18-21
• 1.1.1 卵巢癌的危害18
• 1.1.2 卵巢癌的常用治療方法及作用機(jī)制18-19
• 1.1.3 卵巢癌化療耐藥19-21
• 1.2 卵巢癌與自噬21-22
• 1.3 自噬概述22-24
• 1.3.1 自噬的概念及功能22-23
• 1.3.2 自噬與腫瘤23-24
• 1.4 HMGB1概述24-26
• 1.4.1 HMGB1的基本結(jié)構(gòu)及功能24-25
• 1.4.2 HMGB1與腫瘤的關(guān)系25-26
• 1.5 P62概述26-27
• 1.5.1 P62的基本結(jié)構(gòu)及功能26-27
• 1.5.2 P62與腫瘤的關(guān)系27
• 1.6 BRCA1概述27-28
• 1.6.1 BRCA1的基本結(jié)構(gòu)及功能27-28
• 1.6.2 BRCA1與腫瘤的關(guān)系28
• 1.7 選題意義及目的28-30
• 第二章 自噬與人卵巢癌順鉑耐藥的關(guān)系和作用機(jī)制研究30-44
• 2.1 前言30
• 2.2 材料30-33
• 2.2.1 細(xì)胞株30
• 2.2.2 主要試劑及配制30-32
• 2.2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器32-33
• 2.3 方法33-39
• 2.3.1 SKOV3/DDP耐藥細(xì)胞系的建立33
• 2.3.2 SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞株培養(yǎng)33
• 2.3.3 CCK-8法檢測(cè)耐藥指數(shù)33-34
• 2.3.4 QRT-PCR檢測(cè)HMGB1、p62 mRNA的表達(dá)34-36
• 2.3.5 Western Blotting檢測(cè)HMGB1、p62蛋白在SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)水平36-38
• 2.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理38-39
• 2.4 結(jié)果39-41
• 2.4.1 細(xì)胞抑制情況及SKOV3/DDP細(xì)胞順鉑耐藥水平39
• 2.4.2 RT-PCR結(jié)果39-40
• 2.4.3 Western Blotting結(jié)果40-41
• 2.5 討論41-44
• 第三章 BRCA1、HMGB1、P62在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其臨床意義44-60
• 3.1 前言44-45
• 3.2 材料與方法45-46
• 3.2.1 臨床資料45
• 3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑45
• 3.2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器45-46
• 3.3 免疫組化46-48
• 3.3.1 石蠟切片逐級(jí)脫臘和水化的時(shí)間46
• 3.3.2 免疫組化步驟及注意事項(xiàng)46-47
• 3.3.3 免疫組織化學(xué)的用途47-48
• 3.4 結(jié)果判定48
• 3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理48
• 3.6 結(jié)果分析48-56
• 3.6.1 BRCA1蛋白的表達(dá)結(jié)果48-51
• 3.6.2 HMGB1蛋白的表達(dá)結(jié)果51-53
• 3.6.3 P62蛋白的表達(dá)結(jié)果53-56
• 3.6.4 BRCA1、P62蛋白在卵巢癌中表達(dá)的相關(guān)性56
• 3.7 討論56-60
• 3.7.1 BRCA1在BET、交界性腫瘤、EOC中的表達(dá)56-57
• 3.7.2 HMGB1在BET、交界性腫瘤、EOC中的表達(dá)57-58
• 3.7.3 P62在BET、交界性腫瘤、EOC中的表達(dá)58-60
• 第四章 結(jié)論與展望60-62
• 參考文獻(xiàn)62-71
• 致謝71-72
• 附錄72-74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 趙婷秀;莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2004年

  本文關(guān)鍵詞：鉑耐藥和鉑敏感上皮性卵巢癌中HMGB1、BRCA1和P62蛋白的表達(dá)及其臨床意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：388869