卵巢癌由于早期癥狀不明顯、治療預(yù)后不佳,成為最常見、最致命的婦科腫瘤,是婦女死亡的主要原因。目前臨床上治療卵巢癌的主要方式是手術(shù)治療聯(lián)合術(shù)后化療。術(shù)后復(fù)發(fā)性以及化療耐藥性,使得患者生存質(zhì)量難以得到保障,那么尋求新的卵巢癌治療方法久變得尤為迫切。卵泡抑素樣蛋白1(FSTL1)是一種富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白,具有多種生物學(xué)功能。近年來關(guān)于FSTL1在各種疾病、腫瘤等方面都有初步研究,但其在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中的機(jī)制仍不清楚。因此對FSTL1及其作用機(jī)制進(jìn)行研究有可能為治療腫瘤提供新的思路。我們前期研究表明是Notch3信號通路介導(dǎo)PTH調(diào)控卵巢癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和干細(xì)胞干性,后來在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)PTH可以促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞中FSTL1的表達(dá)。本課題擬在此前的研究基礎(chǔ)上探究FSTL1對卵巢癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的影響,揭示FSTL1在調(diào)節(jié)卵巢癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和干細(xì)胞干性中的作用。首先我們在蛋白質(zhì)水平上檢測了PTH對卵巢癌細(xì)胞中FSTL1表達(dá)的影響。通過用PTH作用于卵巢癌細(xì)胞,利用Western blot檢測發(fā)現(xiàn)PTH可以促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞中FSTL1的表達(dá)。接下來,我們通過Western blot、細(xì)胞克隆形...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語
第一章 緒論
    1 引言
        1.1 卵巢癌
        1.2 FSTL1
            1.2.1 FSTL1的生物學(xué)特征
            1.2.2 FSTL1在相關(guān)腫瘤中的研究
            1.2.3 FSTL1參與的腫瘤信號通路
        1.3 Notch3信號通路及其在腫瘤細(xì)胞中的研究
        1.4 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及其相關(guān)研究
        1.5 瘤干細(xì)胞(CSCs)及其相關(guān)研究
    2 前期研究結(jié)果
    3 研究目的和意義
    4 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及設(shè)計(jì)方案
        4.1 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        4.2 實(shí)驗(yàn)方案
第二章 甲狀旁腺激素上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中FSTL1的表達(dá)
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 材料與試劑
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 主要溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞復(fù)蘇與傳代
            2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.1.2 細(xì)胞傳代
        2.2 細(xì)胞分盤
        2.3 藥物給予實(shí)驗(yàn)
        2.4 細(xì)胞裂解液的制備
        2.5 蛋白濃度測定及樣品制備
        2.6 Westernblot
    3 結(jié)果與分析
        3.1 PTH上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中FSTL1的表達(dá)
    4 討論
第三章 FSTL1調(diào)控卵巢癌細(xì)胞EMT過程
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 材料與試劑
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 主要溶液配制
        1.3 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 .質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.2 提取質(zhì)粒
        2.3 慢病毒包裝
            2.3.1 質(zhì)粒擴(kuò)增
            2.3.2 培養(yǎng)、分盤293T細(xì)胞
            2.3.3 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
            2.3.4 病毒收集
            2.3.5 感染目的細(xì)胞
        2.4 細(xì)胞傷口愈合實(shí)驗(yàn)(Cellwoundhealing)
        2.5 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(Cellinvasionassays)
        2.6 克隆形成實(shí)驗(yàn)(ColonyFormationAssays)
        2.7 細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)(Cellviability)
        2.8 細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 結(jié)果與分析
        4.1 過表達(dá)FSTL1增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)
        4.2 過表達(dá)FSTL1增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞EMT過程
        4.3 過表達(dá)FSTL1促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞傷口愈合
        4.4 過表達(dá)FSTL1促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞侵襲
        4.5 過表達(dá)FSTL1促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞平板克隆的形成
        4.6 過表達(dá)FSTL1增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞增殖能力
        4.7 加入重組蛋白rhFSTL1增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞EMT
        4.8 加入重組蛋白rhFSTL1促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖
        4.9 敲低FSTL1的表達(dá)會抑制卵巢癌細(xì)胞EMT過程
        4.10 敲低FSTL1的表達(dá)會抑制卵巢癌細(xì)胞增殖
    5 討論
第四章 FSTL1調(diào)控卵巢癌細(xì)胞干細(xì)胞干性
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 材料與試劑
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2 細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染
        2.3 細(xì)胞裂解液制備
        2.4 蛋白濃度測定
        2.5 Westernblot
        2.6 微球形成實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 過表達(dá)FSTL1增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞干細(xì)胞干性
        3.2 重組蛋白rhFSTL1增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞干細(xì)胞干性
        3.3 敲低FSTL1的表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞干細(xì)胞干性
        3.4 微球形成實(shí)驗(yàn)
    4 討論
第五章 Notch3信號通路介導(dǎo)FSTL1調(diào)控卵巢癌細(xì)胞EMT和干細(xì)胞干性
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 材料與試劑
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2 蛋白質(zhì)提取
        2.3 蛋白質(zhì)濃度測定與定量
        2.4 Westernblot
        2.5 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.6 細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 Notch3信號介導(dǎo)FSTL1的表達(dá)
        3.2 敲低Notch3會抑制卵巢癌細(xì)胞中FSTL1的表達(dá)
        3.3 敲低Notch3表達(dá)抑制卵巢癌EMT和干細(xì)胞干性
        3.4 敲低Notch3表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞的克隆形成
        3.5 敲低Notch3表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖能力
        3.6 重組蛋白rhFSTL1對低表達(dá)Notch3卵巢癌細(xì)胞的影響
    4 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
碩士期間獲獎情況
碩士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3832706