目的:女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤嚴(yán)重威脅女性生命健康,卵巢癌是其中死亡率最高惡性腫瘤。卵巢癌是一種很難早期發(fā)現(xiàn)和早期診斷的疾病,70%的患者確診時已屬晚期^[1]。目前雖然卵巢癌在治療方面有了很大的提高,相關(guān)靶向藥物已經(jīng)應(yīng)用于臨床,但其5年生存率仍徘徊于25～45%^[2]。主要原因可能是卵巢有較高的復(fù)發(fā)率、較強(qiáng)的化療耐藥能力、免疫逃逸能力、較高的轉(zhuǎn)移率等。因此卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制一直是婦科腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究的重點,尋找高效、特異的腫瘤標(biāo)記物及有效的藥物作用靶點,對于卵巢癌的診斷及疾病進(jìn)展監(jiān)測十分重要。人附睪蛋白4(Human Epididymis Protein 4,HE4),最初在附睪上皮細(xì)胞中檢測到其特異性表達(dá)于而得名^[3]。有研究者利用基因組分析比較,發(fā)現(xiàn)HE4在卵巢癌中高表達(dá)^[4],隨后有研究者^[5]通對2607個項目進(jìn)行Meta分析發(fā)現(xiàn),HE4在卵巢癌的診斷和疾病進(jìn)展監(jiān)測中具有更高的敏感性和特異性,其陽性似然比、陰性似然比均優(yōu)于CA125,且HE4在良性疾病中的陽性表達(dá)率低于...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :YWHAE與 HE4 為相互作用蛋白及其在卵巢組織中的表達(dá)及臨床意義
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 細(xì)胞系
            2.1.2 標(biāo)本來源
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 主要工作液的配制
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 Western Blot
            2.2.3 免疫共沉淀
            2.2.4 免疫熒光共聚焦
            2.2.5 免疫組織化學(xué)
            2.2.6 瞬轉(zhuǎn)干擾YWHAE細(xì)胞系建立
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 免疫共沉淀檢測YWHAE和 HE4 的互作關(guān)系
        3.2 免疫熒光共定位法檢測YWHAE和 HE4 的表達(dá)及共定位
        3.3 Western Blot檢測YWHAE和 HE4 的相互調(diào)節(jié)機(jī)制
        3.4 YWHAE在各組卵巢組織中的表達(dá)情況
        3.5 YWHAE的表達(dá)情況與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系
        3.6 YWHAE表達(dá)情況與卵巢癌患者生存預(yù)后的關(guān)系
        3.7 YWHAE、HE4 蛋白在卵巢癌組織中表達(dá)具有明顯相關(guān)性
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 YWHAE對上皮性卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 材料
            7.1.1 細(xì)胞系
            7.1.2 裸鼠
            7.1.3 主要試劑
            7.1.4 主要儀器
            7.1.5 主要工作液的配制
        7.2 方法
            7.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            7.2.2 穩(wěn)轉(zhuǎn)過表達(dá)YWHAE細(xì)胞系建立
            7.2.3 Western blot
            7.2.4 侵襲實驗
            7.2.5 劃痕試驗
            7.2.6 MTT實驗
            7.2.7 細(xì)胞周期實驗
            7.2.8 細(xì)胞凋亡實驗
            7.2.9 裸鼠成瘤實驗
        7.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    8 結(jié)果
        8.1 YWHAE在各種卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)的情況
        8.2 建立YWHAE差異表達(dá)卵巢癌細(xì)胞系模型
        8.3 差異表達(dá)YWHAE對卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的影響
        8.4 差異表達(dá)YWHAE對卵巢癌細(xì)胞遷移能力的影響
        8.5 差異表達(dá)YWHAE對卵巢癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化能力的影響
        8.6 差異表達(dá)YWHAE對卵巢癌細(xì)胞增殖能力的影響
        8.7 差異表達(dá)YWHAE對卵巢癌細(xì)胞周期的影響
        8.8 差異表達(dá)YWHAE對卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響
        8.9 差異表達(dá)YWHAE對卵巢癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力的影響
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 :YWHAE影響上皮性卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制研究
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 材料
            12.1.1 細(xì)胞系
            12.1.2 主要試劑
            12.1.3 主要儀器
            12.1.4 主要工作液的配制
        12.2 方法
            12.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            12.2.2 Western blot
            12.2.3 細(xì)胞通路抑制劑添加實驗
            12.2.4 細(xì)胞體外侵襲能力
            12.2.5 劃痕試驗檢測細(xì)胞遷移能力
            12.2.6 MTT檢測細(xì)胞增殖能力
        12.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    13 結(jié)果
        13.1 數(shù)據(jù)庫預(yù)測
        13.2 差異表達(dá)YWHAE前后PI3K、AKT、m-TOR及其磷酸化水平的表達(dá)變化
        13.3 差異表達(dá)YWHAE前后MEK、p-MEK、ERK、p-ERK的表達(dá)變化
        13.4 過表達(dá)YWHAE的卵巢癌細(xì)胞系中加入PI3K通路抑制劑及MAPK通路抑制劑對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的改變
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3831041