本文關(guān)鍵詞：DYRK1B在子宮內(nèi)膜癌組織和細胞中的表達及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組織和各細胞系中的表達,應用AZ191(Dyrk1B抑制劑)“降調(diào)”Dyrk1B的表達后,觀察其對子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖能力、細胞凋亡率及Dyrk1B蛋白表達水平的影響,探討Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌中的作用和意義。方法:(1)體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細胞株Ishikawa(高分化)、HEC-1A(中分化)、HEC-1B(中分化)、AN3CA(未分化),采用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法檢測不同濃度AZ191(0.5μM,1μM,2.5μM,5μM,10μM,25μM,50μM,100μM)作用48小時后四種細胞的增殖能力。(2)流式細胞術(shù)檢測AZ191(0μM,5μM,10μM)作用48小時后HEC-1A、HEC-1B和AN3CA的細胞凋亡率。(3)采用蛋白印跡法(Western Blot)檢測AZ191(0μM,5μM,10μM)作用48小時后Ishikawa、HEC-1A、HEC-1B和AN3CA細胞中Dyrk1B蛋白的表達。(4)選取2011年1月~2014年9月大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科存檔的手術(shù)切除石蠟包埋子宮內(nèi)膜癌組織174例,子宮內(nèi)膜癌前病變組織35例,選擇同期因子宮肌瘤或子宮脫垂行子宮切除術(shù)、且術(shù)后病理證實為正常子宮內(nèi)膜組織54例(包括分泌期、增殖期及萎縮期內(nèi)膜)作為對照組,應用免疫組化法檢測Dyrk1B在各組子宮內(nèi)膜組織中的表達,并分析其與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理因素之間的關(guān)系。結(jié)果:(1)AZ191作用48小時后,各實驗組細胞生存率均明顯低于對照組(P0.05),且AZ191對子宮內(nèi)膜癌各細胞系的抑制作用無差別(P0.05),均呈劑量依賴型。(2)AZ191作用48小時后,實驗組細胞的凋亡率與對照組相比均明顯上升,差異有顯著性(P0.05),其中10μM AZ191誘發(fā)受試HEC-1A、HEC-1B和AN3CA三種細胞系發(fā)生的細胞凋亡率均上升近2倍。(3)AZ191作用48小時后,蛋白印跡法檢測發(fā)現(xiàn)實驗組細胞的Dyrk1B蛋白表達水平均低于對照組,且呈濃度依賴型。(4)免疫組化檢測顯示,Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組與子宮內(nèi)膜癌前病變組中均呈高水平表達,其表達率分別為73.6%(128/174),80%(28/35),兩組間無差異(P0.05),但兩組分別與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。同時,也發(fā)現(xiàn)Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達強度與肌層浸潤深度有關(guān)(P0.05),與病理分型、分期、分級均無關(guān)(P均0.05);在血清CA125、CA19-9水平異常升高組中Dyrk1B均呈高表達,表達率分別為89.4%(42/47)、87.5%(28/32),與血清水平正常組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組織和細胞中均有表達,抑制劑AZ191“降調(diào)”Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌細胞中的表達后可明顯促進細胞凋亡和抑制細胞增殖。因此,推測Dyrk1B可能參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展,其可能成為未來治療子宮內(nèi)膜癌的新靶點。
【關(guān)鍵詞】：Dyrk1B 子宮內(nèi)膜癌 凋亡 流式細胞學技術(shù)
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-19
• 一、主要材料13-14
• 1．細胞來源13
• 2．臨床標本來源13
• 3．主要試劑與耗材13-14
• 4．主要實驗儀器14
• 二、方法14-19
• 1．細胞培養(yǎng)及傳代14-15
• 2. MTT 比色法檢測不同濃度 AZ191 作用 48 小時后子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖能力15
• 3．流式細胞儀檢測不同濃度 AZ191 作用 48 小時后子宮內(nèi)膜癌細胞的凋亡倍數(shù)15-16
• 4. 蛋白印跡法檢測不同濃度 AZ191 作用 48 小時后子宮內(nèi)膜癌細胞中 Dyrk1B 蛋白的表達16-18
• 5．免疫組化染色法檢測 Dykr1B 在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達18-19
• 三、統(tǒng)計學處理19
• 結(jié)果19-25
• 1. AZ191 對子宮內(nèi)膜癌細胞株 Ishikawa、HEC-1A、HEC-1B 及 AN3CA 細胞生存率的影響19-21
• 2. AZ191 誘導子宮內(nèi)膜癌細胞 HEC-1A、HEC-1B 和 AN3CA 發(fā)生細胞凋亡的結(jié)果21
• 3. AZ191 對 Ishikawa、HEC-1A、HEC-1B 和 AN3CA 細胞的 Dyrk1B 蛋白表達水平的影響21-22
• 4. 免疫組化檢測 Dyrk1B 在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達22-25
• 討論25-29
• 1．Dyrk1B簡介26
• 2．Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌細胞及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達26
• 3．Dyrk1B介導子宮內(nèi)膜癌細胞的凋亡過程26-27
• 4．Dyrk1B在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達與臨床病理因素的關(guān)系27-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻30-33
• 綜述33-53
• 參考文獻44-53
• 致謝53-54

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫雯;DYRK1B在子宮內(nèi)膜癌組織和細胞中的表達及意義[D];大連醫(yī)科大學;2015年

  本文關(guān)鍵詞：DYRK1B在子宮內(nèi)膜癌組織和細胞中的表達及意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：380413