本文關(guān)鍵詞：孕婦B族鏈球菌感染熒光PCR檢測(cè)技術(shù)的建立和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[背景]B族鏈球菌(Group B Streptococcus,GBS)為革蘭氏陽性球菌,是圍產(chǎn)期和新生兒感染疾病的首要致病菌。GBS按其型的特異性可分為至少10個(gè)血清型,任何血清型都能引起早發(fā)型GBS感染。已有研究發(fā)現(xiàn),GBS還可引起尿路感染、羊膜炎、產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎、傷口感染、產(chǎn)時(shí)和/或產(chǎn)后菌血癥以及死產(chǎn),生殖道GBS菌落可引起胎膜早破或早產(chǎn),GBS也已成為新生兒出生后2個(gè)月內(nèi)菌血癥和腦膜炎的最常見致病菌。目前的GBS檢測(cè)方法有:病原分離、革蘭氏染色、免疫熒光抗體檢測(cè)、血清淀粉培養(yǎng)基比色法,檢測(cè)抗原的多種方法如同協(xié)同凝集試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、以及DNA探針,但血清學(xué)方法多存在耗時(shí)、耗力、準(zhǔn)確率低等缺點(diǎn),而新發(fā)展的快速檢測(cè)分子生物學(xué)的常規(guī)方法在某些方面可以彌補(bǔ)血清學(xué)的不足,但是環(huán)境污染、重復(fù)性不高、靈敏度不足、假陽性等限制了推廣應(yīng)用。[目的]建立合理檢測(cè)方法,快速檢測(cè)孕婦感染的B族鏈球菌。[研究方法]本研究采用了實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增特異性DNA靶片斷,使用熒光標(biāo)記的雜交探針進(jìn)行檢測(cè)并實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。通過對(duì)GBS引物探針的驗(yàn)證、最低檢出險(xiǎn)、線性范圍、準(zhǔn)確性、特異性、干擾物質(zhì)、重復(fù)性等進(jìn)行評(píng)價(jià),采用熒光PCR法與序列分析法同時(shí)對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè),綜合各種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果,對(duì)熒光PCR法試劑進(jìn)行靈敏度、特異性、總符合率、Kappa值一致性評(píng)價(jià)及Kappa值的假設(shè)檢驗(yàn)(U),評(píng)價(jià)臨床考核試驗(yàn)的真實(shí)性及可靠性。[結(jié)果]結(jié)果顯示:本反應(yīng)體系的靈敏度確定為1×104CFU/ml,線性范圍為1×108copies/ml—2×103copies/ml,準(zhǔn)確率為100%,特異性良好、不存在干擾,精密度參考品變異系數(shù)CV均小于5%,重復(fù)性符合要求。用建立的方法檢測(cè)蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院200份樣本,37份陽性全部檢出,163陰性全部為陰性。[結(jié)論]通過性能評(píng)價(jià)試驗(yàn)和臨床樣本驗(yàn)證,本研究建立的實(shí)時(shí)定量熒光PCR方法是一種特異性強(qiáng)、靈敏度高,重復(fù)性好,快速安全的檢測(cè)方法,可以用于GBS的快速檢測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：B族鏈球菌 熒光定量PCR 快速檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.251;R440
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-20
• 1.1 B族鏈球菌生物學(xué)10-11
• 1.2 B族鏈球菌流行病學(xué)11-14
• 1.3 B族鏈球菌臨床特征14-16
• 1.4 B族鏈球菌感染診斷16-19
• 1.5 本研究研究目的和試驗(yàn)設(shè)計(jì)19-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法20-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.1.1 臨床樣本20
• 2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株20-21
• 2.1.3 試劑21
• 2.1.4 主要儀器21
• 2.2 熒光PCR法建立21-24
• 2.2.1 引物與探針的設(shè)計(jì)合成21
• 2.2.2 熒光PCR反應(yīng)體系21-22
• 2.2.3 最低檢出量的評(píng)價(jià)22
• 2.2.4 線性范圍的評(píng)價(jià)22
• 2.2.5 準(zhǔn)確性的評(píng)價(jià)22-23
• 2.2.6 特異性的評(píng)價(jià)23
• 2.2.7 干擾物質(zhì)的評(píng)價(jià)23
• 2.2.8 重復(fù)性評(píng)價(jià)23
• 2.2.9 核酸提取方法評(píng)價(jià)23-24
• 2.2.10 穩(wěn)定性24
• 2.3 熒光PCR法與測(cè)序方法的比較24-27
• 2.3.1 測(cè)序模板制備24-25
• 2.3.2 表 2.5 B族鏈球菌Nested PCR反應(yīng)體系25
• 2.3.3 PCR產(chǎn)物直接送給委托Life公司的測(cè)序服務(wù)機(jī)構(gòu)進(jìn)行測(cè)序25-26
• 2.3.4 實(shí)驗(yàn)方案26-27
• 2.4 統(tǒng)計(jì)分析27-29
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-41
• 3.1 B族鏈球菌的引物和探針的驗(yàn)證29
• 3.2 最低檢出量的評(píng)價(jià)29-30
• 3.3 線性范圍的評(píng)價(jià)30-31
• 3.4 準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)31
• 3.5 特異性評(píng)估31-32
• 3.6 干擾物質(zhì)32-33
• 3.7 重復(fù)性評(píng)價(jià)33-34
• 3.8 核酸提取方法評(píng)價(jià)34-38
• 3.9 穩(wěn)定性38-40
• 3.10 200 例臨床樣本檢測(cè)結(jié)果40-41
• 第四章 結(jié)果討論41-46
• 4.1 GBS感染的危害41
• 4.2 GBS傳統(tǒng)檢測(cè)方法41-42
• 4.3 GBS抗原檢測(cè)法42-43
• 4.4 本研究建立的液相法為基礎(chǔ)的核酸提取系統(tǒng)結(jié)合熒光定量PCR檢測(cè)43-45
• 4.5 本研究結(jié)果45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文54-55
• 附錄55-58
• 致謝58-59

【引證文獻(xiàn)】

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐永萍;;B族鏈球菌感染對(duì)母兒的影響(國內(nèi)外文獻(xiàn)研究)B族溶血性鏈球菌與圍產(chǎn)結(jié)局及預(yù)防[A];第五屆環(huán)渤海圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨山東省第四次圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

  本文關(guān)鍵詞：孕婦B族鏈球菌感染熒光PCR檢測(cè)技術(shù)的建立和應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：376444