發(fā)布時間：2017-05-17 06:14

  本文關(guān)鍵詞：恩度對順鉑耐藥卵巢癌腫瘤血管生成及正�；膶嶒炑芯�，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的卵巢癌因其早期即可發(fā)生盆腔、腹腔內(nèi)種植轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,臨床癥狀不明顯,發(fā)病機制復雜,惡性程度高等原因,死亡率一直居于婦科腫瘤之首,嚴重威脅婦女的生命健康。盡管治療上經(jīng)歷了手術(shù)及放化療,但復發(fā)率卻高達60%,且復發(fā)后大部分患者對作為一線化療藥物的順鉑產(chǎn)生耐藥,致使預后極差。因此有必要尋找一種新的有效的治療方法,全面提高卵巢癌患者的總體生存率,改善患者的生活質(zhì)量。卵巢上皮性癌同其他各種實體瘤一樣,其生長為血管依賴性的。腫瘤的發(fā)展依靠新生血管為其供應養(yǎng)料和氧氣,同時又通過新生血管不斷向四周及遠處運送腫瘤細胞,致使腫瘤轉(zhuǎn)移。于是,如果能有效的抑制新生血管的生成,就可以達到抑制腫瘤發(fā)展及轉(zhuǎn)移的目的。腫瘤血管結(jié)構(gòu)的異常也會導致血管功能的異常。腫瘤血管由于具有不完整性,可導致血流紊亂,無效循環(huán)增加,腫瘤血流在時間及空間上形成異質(zhì)性,最終引起的腫瘤血流的動態(tài)變化可直接影響腫瘤微環(huán)境的代謝,主要表現(xiàn)為缺氧和酸中毒。而低pH及酸中毒互為因果,不斷加劇,最終導致化療藥物輸送的減少及放療抵抗。所以,能否使異常的腫瘤血管趨近正常,繼而可以更有效的將氧氣及藥物輸送到腫瘤細胞,進而提高治療效果?恩度是一種可溶性的抗血管生成的新式抑制劑,能選擇性的抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移及血管構(gòu)成。已有研究闡明,抗血管生成藥物可使腫瘤血管呈現(xiàn)暫時的正�；１狙芯繉嶒灧譃閮刹糠郑阂�、通過觀察恩度對SKOV3/DDP腫瘤細胞上清液誘導的HUVECs增殖、遷移及成管的作用,探討恩度對卵巢癌腫瘤新生血管的影響；二、在成功建立的卵巢癌裸小鼠原位移植模型上觀察恩度使腫瘤血管“正常化”的時間窗。方法第一部分：SKOV3/DDP腫瘤細胞上清液的制備：培養(yǎng)SKOV3/DDP細胞,當其融匯度至70%～80%時,換以無血清RPMI-1640培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24h,離心收集上清,將其與含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基以1：4混合備用。MTT法觀察恩度濃度為10-7,10-4,10-5,10-4,10-3,10-2及10-1mg/ml時,藥物對SKOV3/DDP月中瘤細胞上清液誘導的HUVECs增殖作用的影響。時間設定為24h,48h,72h三個點。細胞劃痕實驗觀察恩度對SK0V3/DDP,腫瘤細胞上清液誘導過的HUVECs遷移的影響。細胞在6孔板中融合度達到90%后,用20p 1的槍頭垂直劃痕,用1×PBS沖洗漂浮細胞。設定恩度濃度為10-6,10-4,10-2mg/ml,繼續(xù)于無血清RMPI-1640培養(yǎng)基中孵育6小時后,直接在倒置相差顯微鏡下拍照。使用ImageJ軟件測量兩端細胞的間距,計算遷移率,繪制圖表,用SPSS18.0進行統(tǒng)計學分析,比較各組遷移情況。成管實驗觀察恩度對SK0V3/DDP腫瘤細胞上清液誘導過的HUVECs在血管形成中的影響。待Matrigel完全呈流動液態(tài)后鋪96孔板,每孔50u 1,置于37-C培養(yǎng)箱放置30min使之凝固。計數(shù)調(diào)節(jié)HUVECs細胞至1×105個/ml,設立對照孔,使恩度終濃度分別為10-6,10-4,10-2mg/ml,37℃恒溫箱中繼續(xù)孵育4h后于倒置顯微鏡下察看血管形成情況并拍照。使用ImageJ軟件測量細胞成管的長度,計算在不同濃度恩度作用下HUVECs的成管率,繪制圖表,用SPSS18.0進行統(tǒng)計學分析,比較各組管腔形成情況。第二部分：MTT法明確SK0V3/DDP細胞對順鉑的耐藥性。設定培養(yǎng)板中順鉑的濃度分別為0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/ml,在恒溫培養(yǎng)箱中孵育48h后,用全自動酶標儀選擇490nm的波長檢測出溶液吸光值,記錄分析數(shù)據(jù),并繪制出不同藥物濃度下的細胞存活生長曲線。裸小鼠卵巢原位移植模型使用SK0V3/DDP細胞系。建立卵巢癌模型時,先將計數(shù)后的SK0V3/DDP細胞注射到雌性裸小鼠頸部皮下,待皮下瘤直徑1cm后將小鼠拖頸處死,超凈臺內(nèi)將皮下瘤取出切成小塊,而后將小塊瘤組織植入剩余雌性裸小鼠左側(cè)卵巢內(nèi),持續(xù)追蹤觀察原位移植腫瘤在裸小鼠卵巢內(nèi)的生長狀況。當腹部可捫及腫塊時將荷瘤鼠處死,解剖并取出原位移植處的腫瘤,與正常裸小鼠卵巢組織及皮下腫瘤組織均做病理切片,HE染色后進行觀察。確定模型構(gòu)建成功后,將30只滿足實驗要求的裸小鼠原位移植模型隨機分為6組,每組5只：其中3組每次腹腔注射恩度10mg/kg,一次注射量均為0.2ml,在第3、6、9天分別各處死一組,對照組為剩余3組,每日腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.2ml,在對應時間內(nèi)處死。恩度處理不同時間后,用CD31染色檢測腫瘤血管內(nèi)皮細胞完整性。ImageJ軟件進行完整血管的計數(shù),被抗體染色的細胞,要形成一個完整的管腔結(jié)構(gòu)才認為是一個可計數(shù)的血管。結(jié)果一部分：不同濃度的恩度(10-1,10-6,10-5,10-4,10-3,10-2,10-1mg/ml)分別處理HUVECs細胞24h,48h,72h后,對細胞增殖無明顯影響,各組間存活率無統(tǒng)計學差異。恩度給藥組劃痕區(qū)間距相較對照組大,兩兩比較均有統(tǒng)計學差異(P0.05)。而不同濃度藥物對HUVECs細胞遷移作用未有明顯差異,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。對照組及實驗組均有管腔形成,分布均勻,鏡下未見明顯差異,用ImageJ圖像分析軟件計算細胞成管長度后發(fā)現(xiàn),對照組及實驗組差異不明顯,無統(tǒng)計學意義(P0.05)。二部分：順鉑對SK0V3/DDP及SK0V3細胞的IC50分別為(11.647±1.078)μg/ml和(2.486±0.983)u g/ml,表明人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細胞耐藥株較敏感株而言,對順鉑的作用不明顯,差異有統(tǒng)計學意義(F=2.386,P0.05)。荷瘤裸小鼠在處死后剖腹探查時可見原位移植處局部有癌腫包塊形成,與周圍組織有粘連,病理切片顯示原位瘤塊具有癌細胞的明顯特征。3、6、9天對照組腫瘤血管結(jié)構(gòu)紊亂迂曲、管徑不一,且分支多,絕大多數(shù)外周被覆不完整的內(nèi)皮細胞。而恩度給藥3天及9天的血管完整性增加(23%±4.58%,17.67%±8.34%,P0.05),分支較少；特別是給藥6天后發(fā)現(xiàn),血管管壁完整,直徑均勻,完整性明顯增加(75.33%±8.02%,P0.O1VS3天及9天)。結(jié)論一部分：恩度對SK0V3/DDP腫瘤細胞上清液誘導的HUVECs增殖及管腔形成無明顯作用,對細胞遷移作用欠佳。二部分：成功的利用SK0V3/DDP腫瘤細胞建立了裸小鼠卵巢原位移植移植模型�；谀Ｐ突A上給藥后發(fā)現(xiàn),恩度能夠在治療第6天時使耐藥性卵巢癌腫瘤血管產(chǎn)生一個明顯的正常化“時間窗”,該時期較為短暫,但完整性極佳。
【關(guān)鍵詞】：恩度 順鉑耐藥性卵巢癌 腫瘤血管正常化
【學位授予單位】：長江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文符號縮寫詞表11-13
• 第一部分 恩度對腫瘤上清液誘導的HUVECs增殖、遷移及成管的影響13-25
• 引言13-14
• 第一節(jié) 實驗材料及方法14-19
• 第二節(jié) 實驗結(jié)果19-22
• 第三節(jié) 討論22-25
• 第二部分 恩度使腫瘤血管“正�；睍r間窗的觀察25-37
• 引言25-26
• 第一節(jié) 實驗材料及方法26-31
• 第二節(jié) 實驗結(jié)果31-34
• 第三節(jié) 討論34-37
• 參考文獻37-41
• 綜述41-49
• 參考文獻45-49
• 致謝49-50
• 個人簡介50-51

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1 ;恩度常見問題簡答[J];中國醫(yī)療前沿;2007年03期

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3 葉振華;;重組人血管內(nèi)皮抑制素(恩度)的醫(yī)學觀點淺談[J];中國醫(yī)療前沿;2009年07期

4 蘇中華;嚴浩林;;恩度治療惡性腫瘤11例臨床療效觀察[J];重慶醫(yī)學;2009年02期

5 張永紅;;恩度治療中晚期非小細胞肺癌臨床療效觀察[J];中外醫(yī)療;2011年09期

6 高爽;楊向紅;范一博;曲秀娟;劉云鵬;;恩度對腫瘤上清液誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖、凋亡的影響及其機制的初步研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2011年11期

7 劉秀峰;秦叔逵;王琳;錢軍;陳映霞;何澤明;龔新雷;楊柳青;;恩度與化療聯(lián)合治療多種晚期惡性腫瘤的臨床觀察[J];臨床腫瘤學雜志;2007年04期

8 溫林春;章龍珍;;恩度聯(lián)合放療治療局部晚期非小細胞肺癌的療效觀察[J];腫瘤基礎與臨床;2009年03期

9 劉妍;張傳桂;李凱;;恩度對不同狀態(tài)內(nèi)皮細胞表面標記物影響的實驗研究[J];中國腫瘤臨床;2009年23期

10 李衛(wèi)星;;恩度與化療聯(lián)合治療多種晚期惡性腫瘤的臨床觀察[J];中外醫(yī)療;2013年29期

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1 潘雁;;重組人血管內(nèi)皮抑制素(恩度)治療惡性腫瘤的臨床研究進展[A];2009年中國藥學大會暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

2 潘雁;;重組人血管內(nèi)皮抑制素(恩度)治療惡性腫瘤的臨床研究進展[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

3 曾哲超;詹麗芬;許慎;;恩度局部用藥聯(lián)合化療治療惡性胸腹腔積液的臨床觀察[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

4 汪冬香;劉繼玲;劉金鳳;;恩度治療晚期非小細胞肺癌不良反應的觀察和護理[A];中華護理學會全國腫瘤護理新進展研討會論文匯編[C];2011年

5 劉麗;李濤;郎錦義;付彬玉;李伯森;張軍;徐可;;同步放化療聯(lián)合恩度治療不能手術(shù)的局部晚期(ⅢB及Ⅳ期)非小細胞肺癌的前瞻性臨床研究[A];中華醫(yī)學會放射腫瘤治療學分會六屆二次暨中國抗癌協(xié)會腫瘤放療專業(yè)委員會二屆二次學術(shù)會議論文集[C];2009年

6 黃品同;張瑩;張毅;孔凡雷;葉智敏;翁慧芳;劉春媚;;超聲造影評價恩度對兔腹主動脈粥樣斑塊內(nèi)新生血管的影響[A];2012年浙江省超聲醫(yī)學學術(shù)年會論文集[C];2012年

7 馬會芳;王留興;張偉杰;;恩度/貝伐單抗聯(lián)合化療對晚期非小細胞肺癌臨床療效的對比[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

8 許子霞;;恩度持續(xù)泵注聯(lián)合PICC化療患者的護理[A];全國靜脈輸液治療護理學術(shù)交流會議論文匯編[C];2012年

9 陳淑敏;;恩度聯(lián)合順鉑腹腔灌注的臨床護理[A];2012年“河南省腫瘤專科護士職業(yè)安全防護及新技術(shù)交流”學術(shù)會議論文集[C];2012年

10 杜海軍;;重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合肝動脈灌注化療栓塞治療中晚期肝癌的臨床應用[A];2012年浙江省放射學術(shù)年會論文集[C];2012年

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1 記者 勇軍邋通訊員 曉冰 晶思 李鋒;“恩度”上市一年銷售1.5億[N];煙臺日報;2007年

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4 生;恩度首次亮相世界肺癌大會引來專家目光[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

5 木香;用創(chuàng)新維護人類健康尊嚴[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

6 秦建成;恩度：誕生世界首例餓死腫瘤新藥[N];中國國門時報;2009年

7 記者 陳會揚;抗腫瘤新藥恩度完成Ⅳ期臨床試驗[N];健康報;2010年

8 本報記者 項錚;先聲：以自主創(chuàng)新藥物成就未來[N];科技日報;2010年

9 本報記者　 楊明方;恩度,餓死癌細胞[N];人民日報;2006年

10 記者　 郭麗君;我國自主知識產(chǎn)權(quán)抗腫瘤新藥恩度上市[N];光明日報;2006年

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1 辛剛;恩度使腫瘤微血管正�；瘯r間窗及與順鉑聯(lián)合治療卵巢癌荷瘤鼠的實驗研究[D];山東大學;2011年

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1 邱毓琪;恩度對順鉑耐藥卵巢癌腫瘤血管生成及正常化的實驗研究[D];長江大學;2015年

2 李星宇;恩度聯(lián)合mut1抗原特異DC-T細胞對Lewis肺癌小鼠的抗腫瘤效應研究[D];山東大學;2015年

3 劉敏;重組人內(nèi)皮抑素—恩度對裸鼠宮頸癌移植瘤生長、轉(zhuǎn)移影響的研究[D];河北醫(yī)科大學;2008年

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6 袁靜;恩度與多西紫杉醇不同順序用藥的抗腫瘤效應觀察[D];天津醫(yī)科大學;2011年

7 李娜;恩度聯(lián)合順鉑對荷瘤動物腫瘤血管正常化及循環(huán)血管內(nèi)皮細胞的影響[D];天津醫(yī)科大學;2012年

8 劉妍;恩度對不同狀態(tài)內(nèi)皮細胞及相應標記物的影響[D];天津醫(yī)科大學;2007年

9 楊小宇;非小細胞肺癌術(shù)后輔助化療聯(lián)合恩度靶向治療的分子生物學研究[D];大連醫(yī)科大學;2011年

10 馬春華;冷凍消融聯(lián)合重組人血管內(nèi)皮抑制素（恩度）治療肺腺癌移植瘤的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2012年

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