本文關(guān)鍵詞：氯硝柳胺促進(jìn)SKOV3細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng),觀察腸驅(qū)蟲藥氯硝柳胺(Niclosamide)對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,并探討其抑制SKOV3細(xì)胞存活的內(nèi)在分子機(jī)制。方法:1、MTT法檢測(cè)不同濃度氯硝柳胺對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用并篩選出適宜藥物濃度(4umol/L和8umol/L)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、MTT法檢測(cè)氯硝柳胺聯(lián)合臨床一線化療藥物對(duì)SKOV3細(xì)胞的毒性作用。3、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定氯硝柳胺及氯硝柳胺聯(lián)合化療藥物對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡作用的影響。4、實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、4u M Niclosamide組、8u M Niclosamide組、化療藥物組、4u M Niclosamide+化療藥物組及8u M Niclosamide+化療藥物組;RT-PCR法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組Wnt/β-catenn信號(hào)通路中β-連環(huán)蛋白(β-catenin)和細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)m RNA表達(dá)的變化,Western blot法檢測(cè)β-catenin和Cyclin D1蛋白含量的表達(dá)變化。5、統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果:1、MTT結(jié)果:氯硝柳胺抑制SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng),且其抑制作用與藥物劑量及作用時(shí)間呈正相關(guān)。統(tǒng)計(jì)后分析,氯硝柳胺抑制50%SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物濃度隨氯硝柳胺作用時(shí)間延長(zhǎng)而降低:24h的IC50濃度約為6.29u M/L,48h的IC50濃度約為3.55u M/L,72h的IC50濃度約為1.31u M/L。本實(shí)驗(yàn)選取4u M/L及8u M/L作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。2、MTT結(jié)果:8u M/L氯硝柳胺對(duì)SKOV3細(xì)胞的抑制作用顯著高于4u M/L氯硝柳胺,差異有意義(P=0.000)。氯硝柳胺聯(lián)合順鉑對(duì)于SKOV3細(xì)胞的抑制作用與單用氯硝柳胺組相比,差異無(wú)明顯意義(P0.05)。3、FCM結(jié)果:氯硝柳胺聯(lián)合順鉑用藥組與單純氯硝柳胺用藥組分別作用于SKOV3細(xì)胞24h后腫瘤細(xì)胞的凋亡率無(wú)明顯差異。4、RT-PCR及Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明:予氯硝柳胺作用24h后,Wnt/β-catenin通路中β-catenin及Cyclin D1 m RNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)水平較正常對(duì)照組降低,且氯硝柳胺藥物濃度越高,β-catenin及Cyclin D1 m RNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)水平越低(P=0.000);氯硝柳胺聯(lián)合一線化療藥物作用24h后檢測(cè)β-catenin及Cyclin D1m RNA及翻譯蛋白產(chǎn)物表達(dá)量,結(jié)果顯示,與單用氯硝柳胺組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、抗腸寄生蟲藥氯硝柳胺對(duì)SKOV3細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑制作用,在一定范圍內(nèi)與藥物劑量及作用時(shí)間呈正相關(guān)。2、氯硝柳胺阻斷Wnt/β-catenin通路的轉(zhuǎn)導(dǎo),在一定范圍內(nèi)其阻斷作用與藥物劑量相關(guān),即藥物濃度越高,其抑制作用越顯著。3、氯硝柳胺促進(jìn)SKOV3細(xì)胞凋亡與其抑制β-catenin及Cyclin D1基因和蛋白的表達(dá)有關(guān)。4、氯硝柳胺與一線化療藥物順鉑配伍使用無(wú)協(xié)同殺傷SKOV3細(xì)胞的作用。5、化療藥物順鉑殺傷SKOV3的作用與Wnt/β-catenin通路無(wú)明顯相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 氯硝柳胺 β-連環(huán)蛋白 細(xì)胞周期蛋白D1
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 對(duì)象與方法13-25
• 1 研究對(duì)象13
• 2 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 3 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24-25
• 結(jié)果25-32
• 1 SKOV3細(xì)胞的鏡下形態(tài)25
• 2 氯硝柳胺對(duì)SKOV3細(xì)胞的毒性作用25-26
• 3 氯硝柳胺聯(lián)合化療藥物對(duì)SKOV3細(xì)胞的毒性作用26-27
• 4 FCM定量觀察細(xì)胞凋亡27-29
• 5 氯硝柳胺及氯硝柳胺聯(lián)合DDP作用SKOV3細(xì)胞 24h后β-catenin與Cyclin D1 m RNA表達(dá)情況29-31
• 6 氯硝柳胺及氯硝柳胺聯(lián)合DDP作用SKOV3細(xì)胞24h后β-catenin與CyclinD1蛋白 表達(dá)情況31-32
• 討論32-41
• 1 Wnt/β-catenin信號(hào)通路32-33
• 2 Wnt/β-catenin信號(hào)通路與卵巢癌33-34
• 3 氯硝柳胺抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)34-39
• 4 氯硝柳胺臨床應(yīng)用的可能性及面臨的挑戰(zhàn)39
• 5 展望39-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況48-49
• 綜述 卵巢癌干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀及相應(yīng)的靶向治療49-62
• 綜述參考文獻(xiàn)56-62
• 致謝62

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