目的:探討肽聚糖識別蛋白1（peptidoglycan recognition protein 1,PGLYRP-1）抗鼠衣原體（Chlamydia muridarum,Cm）小鼠生殖道感染的作用及效果。方法:PCR技術(shù)擴增PGLYRP-1基因,構(gòu)建pET-28a（+）/PGLYRP-1原核表達質(zhì)粒。經(jīng)測序鑒定后,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中,IPTG誘導(dǎo)表達PGLYRP-1重組蛋白,Ni²⁺-NTA對重組蛋白進行純化,Western blot鑒定;BCA法測定PGLYRP-1重組蛋白的濃度;多粘菌素B去除重組蛋白的內(nèi)毒素。選取6-8周齡BALB/c小鼠,注射甲羥孕酮2.5mg,同步小鼠體內(nèi)雌激素。1周后,分為三組:第一組為陰性對照,注射等體積PBS;第二組為PGLYRP-1蛋白抗感染組,以5.0×10~5 IFUs的Cm接種于小鼠陰道后穹隆,劑量為15μL/只,感染后的第7d和第10d,分別取25μL劑量為50μg、100μg、200μg的PGLYRP-1蛋白注射至抗感染組小鼠陰道后穹隆;第三組感染Cm作為陽性對照,即用5.0×10~5IFUs的Cm接種于小鼠陰道后... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要縮略詞對照索引
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 主要儀器設(shè)備
    2.2 菌株和細胞株
    2.3 試劑
第3章 實驗方法
    3.1 PET-28A(+)/PGLYRP-1 原核表達載體的構(gòu)建與鑒定
    3.2 PGLYRP-1 重組蛋白的表達
    3.3 PGLYRP-1 重組蛋白的純化與鑒定
    3.4 PGLYRP-1 重組蛋白濃度的測定
    3.5 多粘菌素B(PMB)去除蛋白的內(nèi)毒素
    3.6 鼠衣原體的培養(yǎng)
    3.7 PGLYRP-1 重組蛋白的抗感染動物實驗
    3.8 小鼠上生殖道病變的肉眼觀察及組織病理學評分
    3.9 統(tǒng)計學方法
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 PGLYRP-1 原核表達載體構(gòu)建鑒定
    4.2 重組蛋白PGLYRP-1 的誘導(dǎo)表達
    4.3 PGLYRP-1 重組蛋白的純化與濃縮
    4.4 WESTERN BLOT法鑒定PGLYRP-1 蛋白
    4.5 小鼠包涵體的計數(shù)
    4.6 小鼠輸卵管的積水情況
    4.7 小鼠輸卵管的病理改變
    4.8 小鼠輸卵管組織勻漿的細胞因子檢測
第5章 討論
第6章 結(jié)論
附錄 PET-28A(+)/PGLYRP-1 原核表達重組質(zhì)粒測序圖譜
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者攻讀學位期間的科研成果
資助基金項目
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]哺乳動物中肽聚糖識別蛋白的研究進展[J]. 李圣各,袁子越,張嶸.  沈陽藥科大學學報. 2016(08)

博士論文
[1]鼠衣原體質(zhì)粒缺失株的構(gòu)建及體外傳代對其生物學特性和致病性的影響[D]. 陳超群.南華大學 2015



本文編號：3707295