本文關(guān)鍵詞：定點(diǎn)編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒構(gòu)建及jmjd3基因敲除對人宮頸癌細(xì)胞體外效應(yīng)觀察，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用TALEN技術(shù)構(gòu)建編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒,并觀察Jmjd3敲除后人宮頸癌細(xì)胞體外生長情況。方法:構(gòu)建編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒載體(TALEN左臂質(zhì)粒L1及TALEN右臂質(zhì)粒R1),經(jīng)酶切鑒定,測序驗證;用TALEN左臂L1、TALEN右臂R1、EGFP熒光質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染人宮頸癌細(xì)胞系Hela,同時設(shè)未轉(zhuǎn)染的宮頸癌細(xì)胞為空白對照,轉(zhuǎn)染24小時后計算轉(zhuǎn)染效率。隨后采用濃度為2ug/ul嘌呤霉素溶液進(jìn)行篩選至空白對照組細(xì)胞全部死亡(3d),共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),行RT-PCR檢測宮頸癌細(xì)胞內(nèi)jmjd3 m RNA表達(dá)水平,MTT檢測細(xì)胞增殖活力。結(jié)果:經(jīng)酶切鑒定,DNA測序及blast比對分析證實成功構(gòu)建編輯人jmjd3基因TALEN質(zhì)粒對;轉(zhuǎn)染后Hela細(xì)胞與空白對照組相比,可見質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組jmjd3m RNA表達(dá)水平明顯降低,表達(dá)抑制率為(46.5±2.0)%;MTT檢測表明質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、針對人jmjd3基因位點(diǎn)人工構(gòu)建的TALEN質(zhì)粒,可實現(xiàn)對人基因組jmjd3基因位點(diǎn)的編輯。2、編輯jmjd3基因可使宮頸癌細(xì)胞系Hela細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制,說明jmjd3參與宮頸癌細(xì)胞增殖調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：TALEN jmjd3 基因編輯 宮頸癌 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文縮略詞表8-9
• 第1章 前言9-12
• 第2章 材料與方法12-32
• 2.1 菌種12
• 2.2 質(zhì)粒12
• 2.3 細(xì)胞株12
• 2.4 常用軟件12
• 2.5 主要儀器12-13
• 2.6 主要試劑13-15
• 2.6.1 質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定主要試劑13-14
• 2.6.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染主要試劑14
• 2.6.3 RT-PCR實驗主要試劑14
• 2.6.4 MTT實驗主要試劑14-15
• 2.7 主要試劑的配制15-16
• 2.7.1 細(xì)胞培養(yǎng)主要試劑的配制15
• 2.7.2 RT-PCR實驗主要試劑配制15
• 2.7.3 MTT主要試劑配置15
• 2.7.4 大腸桿菌培養(yǎng)主要試劑配置15-16
• 2.8 TALEN質(zhì)粒的構(gòu)建與測序16-22
• 2.8.1 TALEN質(zhì)粒的設(shè)計與合成16-19
• 2.8.2 TALEN質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化19
• 2.8.3 TALEN質(zhì)粒單克隆的挑取和培養(yǎng)19-20
• 2.8.4 TALEN載體鑒定20-21
• 2.8.5 TALEN表達(dá)載體的測序驗證21-22
• 2.9 TALEN質(zhì)粒的編輯效應(yīng)檢測22-31
• 2.9.1 TALEN質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞及藥物篩選22-27
• 2.9.2 RT-PCR檢測jmjd3 mRNA表達(dá)水平27-30
• 2.9.3 MTT檢測細(xì)胞體外增殖情況30-31
• 2.10 統(tǒng)計學(xué)處理31-32
• 第3章 結(jié)果32-43
• 3.1 編輯人JMJD3 TALEN質(zhì)粒的構(gòu)建32-33
• 3.2 編輯人JMJD3 TALEN質(zhì)粒酶切鑒定33-34
• 3.3 編輯人JMJD3 TALEN質(zhì)粒測序34-35
• 3.4 編輯人JMJD3 TALEN質(zhì)粒BLAST比對分析35-39
• 3.5 編輯人JMJD3 TALEN質(zhì)粒電泳鑒定39
• 3.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率檢測39-40
• 3.7 藥物篩選后細(xì)胞數(shù)對比40
• 3.8 HELA細(xì)胞總RNA電泳結(jié)果40-41
• 3.9 編輯JMJD3 后HELA細(xì)胞MRNA表達(dá)情況41
• 3.10 編輯JMJD3 后HELA細(xì)胞增殖情況分析41-43
• 第4章 討論43-46
• 第5章 結(jié)論與展望46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 附圖51-52
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果52-53
• 綜述53-64
• 參考文獻(xiàn)60-64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：定點(diǎn)編輯人jmjd3基因的TALEN質(zhì)粒構(gòu)建及jmjd3基因敲除對人宮頸癌細(xì)胞體外效應(yīng)觀察，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：369241