本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的hTERT-shRNA聯(lián)合光動力治療對宮頸癌細胞SiHa的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：宮頸癌是全球女性最常見的生殖道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在發(fā)展中國家居首位,僅次于乳腺癌的發(fā)生。高危型人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因,從宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)發(fā)展至浸潤型宮頸癌是個連續(xù)發(fā)展的過程,大約經(jīng)歷10年左右。近年來,由于宮頸液基細胞學(xué)的應(yīng)用以及宮頸癌篩查的廣泛普及,使得宮頸癌在癌前病變階段就被識別,宮頸癌的發(fā)病率和死亡率有所下降。傳統(tǒng)的治療方法包括放療、化療和手術(shù)治。光動力治療(photodynamic therapy,PDT)是腫瘤治療的一種新模式,通過光敏劑在病變組織中集聚,然后給予特定波長的激光照射后,釋放大量的活性氧(ROS),從而破環(huán)腫瘤組織。四甲基吡啶卟啉[meso-5,10,15,20-Tetrakis-(N-methyl-4-pyridyl) porphine, TMPyP4]是一種人工合成的新型水溶性光敏劑,為四價陽離子卟啉化合物,進入細胞后可以定位于細胞核,結(jié)合并穩(wěn)定端粒序列上的G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu),從而抑制端粒酶活性。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的組成部分(hTERT)作為端粒酶的活性成分,以自身的RNA為模板合成端粒重復(fù)序列,進而維持端粒長度,維持染色體的穩(wěn)定性。本研究旨在利用慢病毒作為載體將Lenti-hTERT-shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至正常的和接受TMPyP4-PDT的宮頸癌SiHa細胞株,旨在觀察hTERT在宮頸癌的光動力治療中的作用和可能的機制,為宮頸癌的臨床治療提供一種新的輔助治療手段。目的：探討hTERT基因干擾對宮頸癌SiHa細胞株的凋亡、侵襲能力的影響及其在TMPyP4-PDT治療中的可能機制。方法：利用免疫熒光技術(shù)確定最適感染復(fù)數(shù)(MOI)值,利用PCR和免疫熒光(IF)技術(shù)對hTERT基因的干擾序列進行篩選,篩選出干擾效率最高的shRNA序列,并在體外轉(zhuǎn)染宮頸癌SiHa細胞系,用于后續(xù)實驗。選擇宮頸癌SiHa細胞系,實驗分為4組：空白對照組、單純基因治療組(轉(zhuǎn)染Lenti-hTERT-shRNA)、單純TMPyP4-PDT組、聯(lián)合治療組。CCK-8法檢測各處理組的細胞增殖活性；AnnexinV-PE/7-AAD雙染試劑盒檢測各組細胞的凋亡率；Transwell試驗檢測各組細胞侵襲能力的改變;RT-PCR法檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表達；Western Blot檢測Bcl-2, Bax, Caspase-3, Caspase-8基因蛋白水平的表達。結(jié)果：最適感染復(fù)數(shù)(MOI)值為20,在4個干擾片段sh-1515、sh-1693、sh-1788、sh-1135中,sh-1693的轉(zhuǎn)染效率最高,用于后續(xù)實驗。CCK-8結(jié)果示：空白對照組、單純基因治療組、單純光動力治療組、聯(lián)合治療組的細胞存活率依次為(1.0±0.03)%、(0.75±0.02)%、(0.62±0.05)%、(0.19±0.03)%。聯(lián)合治療組的早期/總凋亡率明顯高于其他3組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Transwell實驗結(jié)果顯示：聯(lián)合治療組與單純基因治療組和單純光動力治療組相比,穿膜細胞數(shù)明顯減少且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR結(jié)果示：與單純基因治療組和單純光動力治療組相比,聯(lián)合治療組中基因Bcl-2、Caspase-8 mRNA的表達下降,Bex、Caspase-3 mRNA的表達升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western Blot結(jié)果示：Bcl-2、Caspase-8蛋白表達水平降低,Bax、Caspase-3蛋白表達水平升高。結(jié)論：下調(diào)hTERT基因通過降低靶基因Bcl-2、Caspase-8的表達和增加Bax、 Caspase-3的表達,在宮頸癌的TMPyP4-PDT中起到誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡、抑制其增值能力和侵襲能力的作用。
【關(guān)鍵詞】：宮頸腫瘤 SiHa細胞 人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶 光動力治療 四甲基吡啶卟啉
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-27
• 結(jié)果27-29
• 討論29-35
• 結(jié)論35-36
• 附圖36-39
• 參考文獻39-44
• 致謝44-45
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章45-46
• 附件46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王虎;蔡定芳;;Ca~(2+)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑的細胞凋亡[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2006年04期

2 蔡艷玲;羅小玲;葛連英;劉愛群;謝裕安;;RNAi沉默hTERT基因誘導(dǎo)大腸癌SW480細胞凋亡[J];中國腫瘤生物治療雜志;2011年01期

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的hTERT-shRNA聯(lián)合光動力治療對宮頸癌細胞SiHa的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：365770