天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

慢病毒介導(dǎo)的hTERT-shRNA聯(lián)合光動力治療對宮頸癌細胞SiHa的影響

發(fā)布時間:2017-05-14 17:14

  本文關(guān)鍵詞:慢病毒介導(dǎo)的hTERT-shRNA聯(lián)合光動力治療對宮頸癌細胞SiHa的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:背景:宮頸癌是全球女性最常見的生殖道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在發(fā)展中國家居首位,僅次于乳腺癌的發(fā)生。高危型人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因,從宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)發(fā)展至浸潤型宮頸癌是個連續(xù)發(fā)展的過程,大約經(jīng)歷10年左右。近年來,由于宮頸液基細胞學(xué)的應(yīng)用以及宮頸癌篩查的廣泛普及,使得宮頸癌在癌前病變階段就被識別,宮頸癌的發(fā)病率和死亡率有所下降。傳統(tǒng)的治療方法包括放療、化療和手術(shù)治。光動力治療(photodynamic therapy,PDT)是腫瘤治療的一種新模式,通過光敏劑在病變組織中集聚,然后給予特定波長的激光照射后,釋放大量的活性氧(ROS),從而破環(huán)腫瘤組織。四甲基吡啶卟啉[meso-5,10,15,20-Tetrakis-(N-methyl-4-pyridyl) porphine, TMPyP4]是一種人工合成的新型水溶性光敏劑,為四價陽離子卟啉化合物,進入細胞后可以定位于細胞核,結(jié)合并穩(wěn)定端粒序列上的G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu),從而抑制端粒酶活性。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的組成部分(hTERT)作為端粒酶的活性成分,以自身的RNA為模板合成端粒重復(fù)序列,進而維持端粒長度,維持染色體的穩(wěn)定性。本研究旨在利用慢病毒作為載體將Lenti-hTERT-shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至正常的和接受TMPyP4-PDT的宮頸癌SiHa細胞株,旨在觀察hTERT在宮頸癌的光動力治療中的作用和可能的機制,為宮頸癌的臨床治療提供一種新的輔助治療手段。目的:探討hTERT基因干擾對宮頸癌SiHa細胞株的凋亡、侵襲能力的影響及其在TMPyP4-PDT治療中的可能機制。方法:利用免疫熒光技術(shù)確定最適感染復(fù)數(shù)(MOI)值,利用PCR和免疫熒光(IF)技術(shù)對hTERT基因的干擾序列進行篩選,篩選出干擾效率最高的shRNA序列,并在體外轉(zhuǎn)染宮頸癌SiHa細胞系,用于后續(xù)實驗。選擇宮頸癌SiHa細胞系,實驗分為4組:空白對照組、單純基因治療組(轉(zhuǎn)染Lenti-hTERT-shRNA)、單純TMPyP4-PDT組、聯(lián)合治療組。CCK-8法檢測各處理組的細胞增殖活性;AnnexinV-PE/7-AAD雙染試劑盒檢測各組細胞的凋亡率;Transwell試驗檢測各組細胞侵襲能力的改變;RT-PCR法檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表達;Western Blot檢測Bcl-2, Bax, Caspase-3, Caspase-8基因蛋白水平的表達。結(jié)果:最適感染復(fù)數(shù)(MOI)值為20,在4個干擾片段sh-1515、sh-1693、sh-1788、sh-1135中,sh-1693的轉(zhuǎn)染效率最高,用于后續(xù)實驗。CCK-8結(jié)果示:空白對照組、單純基因治療組、單純光動力治療組、聯(lián)合治療組的細胞存活率依次為(1.0±0.03)%、(0.75±0.02)%、(0.62±0.05)%、(0.19±0.03)%。聯(lián)合治療組的早期/總凋亡率明顯高于其他3組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Transwell實驗結(jié)果顯示:聯(lián)合治療組與單純基因治療組和單純光動力治療組相比,穿膜細胞數(shù)明顯減少且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR結(jié)果示:與單純基因治療組和單純光動力治療組相比,聯(lián)合治療組中基因Bcl-2、Caspase-8 mRNA的表達下降,Bex、Caspase-3 mRNA的表達升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western Blot結(jié)果示:Bcl-2、Caspase-8蛋白表達水平降低,Bax、Caspase-3蛋白表達水平升高。結(jié)論:下調(diào)hTERT基因通過降低靶基因Bcl-2、Caspase-8的表達和增加Bax、 Caspase-3的表達,在宮頸癌的TMPyP4-PDT中起到誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡、抑制其增值能力和侵襲能力的作用。
【關(guān)鍵詞】:宮頸腫瘤 SiHa細胞 人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶 光動力治療 四甲基吡啶卟啉
【學(xué)位授予單位】:山東大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R737.33
【目錄】:
  • 中文摘要6-8
  • 英文摘要8-10
  • 符號說明10-11
  • 前言11-13
  • 材料與方法13-27
  • 結(jié)果27-29
  • 討論29-35
  • 結(jié)論35-36
  • 附圖36-39
  • 參考文獻39-44
  • 致謝44-45
  • 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章45-46
  • 附件46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王虎;蔡定芳;;Ca~(2+)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑的細胞凋亡[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2006年04期

2 蔡艷玲;羅小玲;葛連英;劉愛群;謝裕安;;RNAi沉默hTERT基因誘導(dǎo)大腸癌SW480細胞凋亡[J];中國腫瘤生物治療雜志;2011年01期


  本文關(guān)鍵詞:慢病毒介導(dǎo)的hTERT-shRNA聯(lián)合光動力治療對宮頸癌細胞SiHa的影響,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



本文編號:365770

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/fuchankeerkelunwen/365770.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶ad583***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
婷婷激情四射在线观看视频| 亚洲中文字幕人妻av| 日韩在线视频精品视频| 中文字幕一区二区免费| 亚洲国产精品久久精品成人| 欧美一区二区三区在线播放| 一区二区免费视频中文乱码国产 | 欧美乱视频一区二区三区| 午夜视频免费观看成人| 人妻一区二区三区多毛女| 国产成人av在线免播放观看av| 色播五月激情五月婷婷| 亚洲精品成人综合色在线| 日韩精品视频一二三区| 亚洲性生活一区二区三区| 亚洲高清欧美中文字幕| 精品国模一区二区三区欧美| 精品国产一区二区欧美| 国产午夜福利在线免费观看| 亚洲中文字幕人妻av| 久久天堂夜夜一本婷婷| 亚洲国产欧美精品久久| 又黄又色又爽又免费的视频| 日韩高清毛片免费观看| 免费亚洲黄色在线观看| 成人你懂的在线免费视频| 国内精品美女福利av在线| 欧美一区二区不卡专区| 国产精品福利一二三区| 欧美日韩三区在线观看| 欧美多人疯狂性战派对| 亚洲天堂久久精品成人| 久久夜色精品国产高清不卡| 国产精品蜜桃久久一区二区| 中文字幕日韩欧美理伦片| 日本人妻丰满熟妇久久| 中文字幕五月婷婷免费 | 东京干男人都知道的天堂| 99久久人妻精品免费一区| 国产福利在线播放麻豆| 91精品日本在线视频|