本研究通過轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）和Small RNA-seq,并引入mRNA和miRNA整合分析方法,鑒定與早期胚胎停育（Early Embryonic Arrest,EEA）相關(guān)的關(guān)鍵基因和miRNA,并通過比較基因組學(xué)和結(jié)構(gòu)序列分析方法預(yù)測人基因組中的新miRNAs。利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)初步鑒定早期胚胎停育相關(guān)靶基因與miRNA的互作關(guān)系。我們首先比較了早期胚胎停育患者和正常早期妊娠（Normal pregnency,NP）婦女絨毛組織的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果和microRNA譜。我們發(fā)現(xiàn),在早期胚胎停育患者的絨毛組織中,miR-518b異常高表達(dá),進(jìn)一步預(yù)測miR-518b的靶基因并比對轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,發(fā)現(xiàn)Early growth response protein 1（EGR1）可能為miR-518b的靶基因,雙熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)證實(shí)miR-518b直接靶向EGR1 3’UTR端,且EGR1在早期胚胎停育絨毛組織中異常低表達(dá)。因此,我們深入研究了miR-518b通過靶向EGR1在胚胎停育發(fā)病機(jī)制中的調(diào)控作用。第一章:通過轉(zhuǎn)錄組RNA測序鑒定與胚胎停育相關(guān)的候選基因。利用高通量測... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：157 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果

miR-518b靶向EGR1參與早期胚胎停育的機(jī)制研究 博士學(xué)位論文在EEA組和NP組中發(fā)現(xiàn)了190個(gè)差異表達(dá)基因（P <0.01，F(xiàn)DR q <0.05和| log2FC |> 1）。其中，61 個(gè)下調(diào)基因，129 個(gè)上調(diào)基因（P <0.05，F(xiàn)DR q<0.05 和| log2FC |> 1）。差異表達(dá)基因的火山圖及部分差異表達(dá)的基因熱圖見圖 1-2。190 個(gè)差異基因的細(xì)節(jié)、名稱，以及 p 和 q 值，顯示在附錄一中。

圖 1-3 關(guān)于樣品之間基因表達(dá)的相關(guān)性的熱圖。Figure 1-3 Heat map of the correlation about gene expression between samples.1.4.2 差異表達(dá)基因的 q-PCR 驗(yàn)證為了檢驗(yàn)測序的可靠性，我們隨機(jī)選擇了 10 個(gè)通過 Transcriptome-S篩選有差異表達(dá)的基因，包括 STAT5A，SLC4A1，CP，NNAT，ITGA9，ELK1，TPPP3，PAEP，KLF1 和 EGR1，使用 q-PCR 技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證其在絨毛組織（EEA，n = 20 和 NP，n = 20）中的表達(dá)。q-PCR 的結(jié)果與 RNA-S結(jié)果一致（圖 1-4）。 這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了 RNA-Seq 的可靠性。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]妊娠期糖尿病胎盤組織hsa-miR95-5p、hsa-miR-548am-5p和hsa-miR-1246的表達(dá)及意義[J]. 李偉,胡寶春,龔照.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2016(04)
[2]has-miR-27a和has-miR-124a基因單核苷酸多態(tài)性與妊娠期糖尿病的相關(guān)性[J]. 王曉晶,聶敏,李偉,平凡,馬良坤,高勁松,劉俊濤.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2014(11)
[3]胚胎著床的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[J]. 雷偉,楊增明.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2010(06)



本文編號(hào)：3608967