本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍通過調(diào)節(jié)EGFR信號通路抑制子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道最常見的三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病率逐年增高,美國癌癥協(xié)會統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明2014年在美國大約有52630例新增病例以及大約8590例死亡病例[1]。某些研究發(fā)現(xiàn)糖尿病、胰島素抵抗以及肥胖是發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌的危險因素[2,3],不幸的是,肥胖不僅是子宮內(nèi)膜癌的一個危險因素,同時也認為其增加了患者的死亡風險[4]。手術(shù)常常用于治療早期的子宮內(nèi)膜癌患者,而對于月經(jīng)不調(diào)、多囊卵巢及長期不排卵的年輕患者而言:如何保留其生育功能一直是治療的難點[5]。孕激素及其合成形式醋酸甲羥孕酮(MPA)在臨床上已經(jīng)廣泛應用于治療希望保留生育功能以及晚期、復發(fā)的子宮內(nèi)膜癌患者,但其治療有效率一直不太理想,研究表明長期孕激素治療的反應率僅達16%-34%[6]。一些研究認為孕激素耐藥的產(chǎn)生是治療子宮內(nèi)膜癌失敗的根本原因[7]。改善孕激素耐藥,提高孕激素治療子宮內(nèi)膜癌的效果是目前臨床上面臨的一個難題。因此尋找一種藥物能夠緩解子宮內(nèi)膜癌的進展或者改善子宮內(nèi)膜癌的預后是現(xiàn)在臨床治療上亟待解決的問題。研究表明腫瘤細胞能夠分泌大量的生長因子,其中表皮生長因子(EGF)和胰島素樣生長因子(IGF)是重要的能夠促進上皮增生的生長因子,其能夠促進細胞的增殖同時抑制癌細胞的凋亡。表皮生長因子系統(tǒng)(EGFs)是由EGF及其受體EGFR(表皮生長因子受體)組成[8]。表皮生長因子受體(EGFR)家族是跨膜受體酪氨酸激酶的一種,共包括四個成員,分別是Erb B-1,也被稱為EGFR,因為EGFR是原癌基因c-erb B1的表達產(chǎn)物;Erb B-2(也被稱為HER2或者neu);Erb B3(也被稱為HER3)及Erb B4(也被稱為HER4),其通過調(diào)控多種與細胞生長相關(guān)的基因的表達來調(diào)節(jié)細胞周期的進展從而影響細胞的增殖、遷移、分化和生存[9]。大量的研究報道表明EGFR在大量的腫瘤細胞中過度表達,包括子宮內(nèi)膜癌細胞;過度表達的EGFR與疾病不良的預后相關(guān)[10]。關(guān)于子宮內(nèi)膜癌孕激素耐藥機制的研究中,有報道稱孕激素耐藥與EGFR過度激活有關(guān),但其具體調(diào)節(jié)機制不明[11]。近年研究表明,表皮生長因子受體(EGFR)過表達可降低子宮內(nèi)膜癌細胞對孕激素的敏感性,使其產(chǎn)生耐藥,誘導子宮內(nèi)膜癌細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化;EGFR表達過高可導致其下游信號分子持續(xù)活化,而其通路抑制劑AG1478可有效抑制該通路重要信號分子的激活[12]。流行病學調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌患者中約11.1%合并糖尿病,糖尿病與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系已由隊列研究和病例對照研究所證實:合并2型糖尿病可使子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風險增加1-3倍[13]。臨床工作中胰島素增敏藥二甲雙胍廣泛應用于治療2型糖尿病,在婦科領(lǐng)域中為改善胰島素抵抗癥狀,被廣泛應用于多囊卵巢綜合癥的治療。研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可提高孕激素治療早期子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜非典型增生的臨床治療效果[14-17]。本課題的前期研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍通過激活AMPK信號通路,活化的AMPK抑制AKT/m TOR信號通路,此級聯(lián)導致了體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖受到明顯抑制,同時促進孕激素受體的表達;另外,二甲雙胍能夠減弱IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ的促進子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的作用;在裸鼠體內(nèi)實驗也驗證了二甲雙胍能夠顯著抑制子宮內(nèi)膜癌細胞的增生[18、19]。以上提示二甲雙胍能夠抑制體內(nèi)外子宮內(nèi)膜癌細胞的生長,并有可能改善孕激素的耐藥,提高孕激素的臨床治療效果。本實驗旨在以體外培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa(高分化)、HEC-1A(中分化)及AN3CA(低分化)細胞作為研究對象,觀察不同濃度的二甲雙胍聯(lián)合或者不聯(lián)合EGFR-TK抑制劑對分化程度不同的子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的影響及二甲雙胍對EGFR和ERK相關(guān)通路蛋白表達的變化。目的通過細胞增殖實驗(CCK-8)分析二甲雙胍對子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的影響;應用熒光定量PCR、western blot技術(shù)分析EGFR信號通路在二甲雙胍對子宮內(nèi)膜癌細胞中的作用,為臨床治療子宮內(nèi)膜癌提供一個新的思路。方法1.細胞增殖法(CCK-8)檢測不同濃度的二甲雙胍聯(lián)合或者不聯(lián)合EGFR信號通路抑制劑AG1478對分化程度不同的子宮內(nèi)膜癌細胞增殖的影響;2.應用熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測不同濃度的二甲雙胍對EGFR m RNA的影響;3.應用蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測二甲雙胍作用下子宮內(nèi)膜癌細胞磷酸化EGFR/總EGFR和磷酸化ERK/總ERK蛋白水平的變化。4.統(tǒng)計學處理:采用SPSS19.0軟件對試驗結(jié)果數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析;所有實驗均獨立重復3次,多組間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t法,P0.05即差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1.二甲雙胍和EGFR-TK抑制劑AG1478均能抑制分化程度不同的子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖,同時二甲雙胍可增強AG1478對子宮內(nèi)膜癌細胞的抑制作用(P0.05);2.二甲雙胍能夠降低子宮內(nèi)膜癌細胞中EGFR m RNA的表達,其作用成劑量依賴性(P0.05);3.二甲雙胍作用于子宮內(nèi)膜癌不同時間后,總的EGFR及總的ERK的蛋白表達水平無明顯變化(P0.05),而磷酸化的EGFR及磷酸化的ERK蛋白表達水平降低(P0.05),抑制了EGFR及ERK信號通路,其作用呈時間依賴性(P0.05)。結(jié)論1.二甲雙胍可抑制子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖,同時能夠增強EGFR信號通路阻斷劑AG1478對子宮內(nèi)膜癌的抑制作用;2.二甲雙胍可能通過調(diào)節(jié)EGFR信號通路即抑制EGFR磷酸化蛋白的表達從而抑制其下游ERK蛋白的磷酸化,即抑制ERK信號通路的激活進而抑制子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：二甲雙胍 子宮內(nèi)膜癌 EGFR信號通路 ERK AG1478
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-8
• 英文摘要8-14
• 英文縮略詞表14-15
• 引言15-18
• 材料和方法18-32
• 結(jié)果32-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41
• 展望41-42
• 參考文獻42-46
• 綜述部分 二甲雙胍的抗腫瘤作用46-57
• 參考文獻52-57
• 個人簡歷、在讀期間發(fā)表的論文57-58
• 致謝58-59

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本文編號：360056