發(fā)布時間：2017-05-09 14:51

  本文關(guān)鍵詞：ROS在竹節(jié)香附素A抑制Skov3細胞增殖中的作用及機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 卵巢癌（ovariancancer）是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率居于婦科惡性腫瘤的首位。手術(shù)輔以術(shù)后化療是目前治療卵巢癌的主要方式，雖然手術(shù)、化療和放療技術(shù)均有所改進，但晚期卵巢癌患者的長期生存率未得到明顯提高，究其原因與化療藥物的毒副作用以及產(chǎn)生耐藥性有關(guān)，因此尋找新的治療藥物并闡明其作用機制具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。中醫(yī)藥的研究與應(yīng)用歷史悠久，已證實多種中草藥具有抗腫瘤活性，且毒副作用低，因而成為抗腫瘤藥物的研究熱點。兩頭尖是毛莨科銀蓮花屬多被銀蓮花的干燥根莖，又名竹節(jié)香附，具有良好的抗腫瘤效應(yīng)，其中以單體成分竹節(jié)香附素A最為顯著。研究表明，竹節(jié)香附素A對包括卵巢癌在內(nèi)的多種腫瘤具有良好的抗腫瘤效應(yīng)，但其抑癌機制尚未明確�；钚匝酰╮eactiveoxygenspecies,ROS）是細胞內(nèi)重要的氧化還原信號分子，可調(diào)控細胞凋亡及細胞增殖，多種藥物可通過改變腫瘤細胞內(nèi)的ROS水平發(fā)揮其藥物活性。 研究目的： 以竹節(jié)香附素A處理卵巢癌Skov3細胞，探討ROS在竹節(jié)香附素A抑制卵巢癌細胞Skov3增殖中的作用及機制。 研究方法： ①MTT法檢測竹節(jié)香附素A對Skov3細胞增殖活性的影響；②流式細胞術(shù)檢測竹節(jié)香附素A對Skov3細胞內(nèi)ROS含量的影響；③MTT法檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞增殖活性影響；④相差顯微鏡下觀察NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞形態(tài)的影響；⑤流式細胞術(shù)、DHE探針熒光染色檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞內(nèi)ROS含量的影響；⑥流式細胞術(shù)檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞凋亡及細胞周期的影響；⑦WesternBlot法檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對P53、CDK4、cyclinB1、Chk1、P21、ATR蛋白表達的影響；⑧AO染色檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞內(nèi)自噬溶酶體的影響；⑨WesternBlot法檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3表達的影響；⑩MTT法檢測自噬抑制劑3-MA預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞增殖活性的影響。 研究結(jié)果： ①竹節(jié)香附素A可抑制Skov3細胞的增殖，該作用具有量效關(guān)系；②竹節(jié)香附素A可以引起Skov3細胞內(nèi)ROS含量升高，NAC預(yù)處理后，可以降低細胞內(nèi)ROS的水平，并使細胞增殖抑制率升高，該作用與細胞凋亡無關(guān)，但使G2/M期細胞比例升高，產(chǎn)生G2/M期阻滯，并下調(diào)ATR、Chk1、CDK4和cyclinB1蛋白的表達，上調(diào)P21、P53蛋白的表達；③竹節(jié)香附素A作用Skov3細胞后可使細胞自噬增多，上調(diào)LC3蛋白的表達；NAC預(yù)處理后抑制細胞自噬，下調(diào)LC3蛋白的表達；④3-MA預(yù)處理后，竹節(jié)香附素A對Skov3細胞的增殖抑制率升高。 結(jié)論： ①竹節(jié)香附素A可抑制卵巢癌細胞Skov3增殖，該作用具有量效關(guān)系；②竹節(jié)香附素A作用于Skov3細胞后，在發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)的同時，通過產(chǎn)生低濃度的ROS，降低其藥物活性；③清除ROS后，竹節(jié)香附素A的抗腫瘤活性增強，該作用與細胞凋亡無關(guān)，其可能的機制是：一方面通過調(diào)控ATM/ATR-Chk1/Chk2-Cdc25信號通路，使細胞周期阻滯于G2期，另一方面通過抑制細胞自噬，減弱自噬對腫瘤細胞的保護作用。
【關(guān)鍵詞】：竹節(jié)香附素A 人卵巢癌細胞Skov3 ROS 細胞周期 細胞自噬
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要英文詞縮寫表10-11
• 第1章 引言11-12
• 第2章 文獻綜述12-17
• 2.1 卵巢癌的治療現(xiàn)況12
• 2.2 竹節(jié)香附素A的研究現(xiàn)況12-13
• 2.3 ROS與腫瘤相關(guān)性13-14
• 2.4 ROS與炎癥14
• 2.5 ROS與細胞周期14
• 2.6 ROS誘導(dǎo)血管生成14
• 2.7 ROS與腫瘤細胞的侵襲14-15
• 2.8 ROS對腫瘤的兩面性15
• 2.9 ROS與腫瘤的治療15
• 2.10 ROS誘導(dǎo)細胞自噬與腫瘤的治療15-17
• 第3 章研究內(nèi)容17-31
• 3.1 實驗材料17-21
• 3.1.1 實驗用細胞17
• 3.1.2 主要儀器與設(shè)備17-18
• 3.1.3 藥物及主要試劑18-19
• 3.1.4 實驗用主要相關(guān)試劑配制方法19-21
• 3.2 實驗方法21-30
• 3.2.1 細胞培養(yǎng)相關(guān)操作21-22
• 3.2.2 MTT法檢測竹節(jié)香附素A對Skov3細胞增殖活性的影響22-23
• 3.2.3 流式細胞術(shù)檢測竹節(jié)香附素A對Skov3細胞內(nèi)ROS含量的影響23-24
• 3.2.4 MTT法檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞增殖活性的影響24
• 3.2.5 倒置顯微鏡觀察NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞形態(tài)的影響24
• 3.2.6 流式細胞術(shù)檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞ROS含量的影響24
• 3.2.7 DHE染色檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞內(nèi)ROS含量的影響24-25
• 3.2.8 流式細胞術(shù)檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞凋亡的影響25-26
• 3.2.9 流式細胞術(shù)檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞周期的影響26
• 3.2.10 WesternBlot法檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞周期相關(guān)蛋白P53、CDK4、cyclinB1、Chk1、P21及ATR表達的影響26-29
• 3.2.11 AO染色檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞自噬溶酶體的影響29
• 3.2.12 WesternBlot法檢測NAC預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對自噬相關(guān)蛋白LC3表達的影響29
• 3.2.13 MTT法檢測3-MA預(yù)處理后竹節(jié)香附素A對Skov3細胞增殖活性的影響29-30
• 3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計30-31
• 第4章 實驗結(jié)果31-42
• 4.1 竹節(jié)香附素A抑制Skov3細胞的增殖31
• 4.2 竹節(jié)香附素A使Skov3細胞內(nèi)ROS含量升高31-32
• 4.3 NAC預(yù)處理后細胞增殖抑制率增加32-33
• 4.4 NAC預(yù)處理后對Skov3細胞形態(tài)的影響33-34
• 4.5 NAC預(yù)處理后降低Skov3細胞內(nèi)ROS水平34-35
• 4.6 NAC預(yù)處理后對Skov3細胞凋亡無影響35-36
• 4.7 NAC預(yù)處理后產(chǎn)生G2/M期阻滯36-38
• 4.8 NAC預(yù)處理后對相關(guān)蛋白表達的影響38-39
• 4.9 NAC預(yù)處理后抑制細胞自噬39-41
• 4.10 3-MA預(yù)處理后細胞增殖抑制率增加41-42
• 第5章 討論42-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-56
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果56-57
• 致謝57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：ROS在竹節(jié)香附素A抑制Skov3細胞增殖中的作用及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：352672