研究背景與目的母體產(chǎn)道中的脫落胎兒細(xì)胞由于含有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)以及胎兒的整套基因組信息,而在非整倍體疾病、染色體微缺失、單基因性疾病以及新生兒溶血病等遺傳性疾病的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷中發(fā)揮著重要的作用。然而,脫落胎兒細(xì)胞的分離與鑒定仍缺乏快速、有效的檢測(cè)方法;此外,目前尚缺乏對(duì)這些稀有細(xì)胞進(jìn)行充分的胎源性驗(yàn)證;另外,目前這些稀有胎兒細(xì)胞在單基因性疾病的產(chǎn)前診斷應(yīng)用仍需探究。因此,在本課題中,我們將建立一種快速、簡(jiǎn)便、有效的方法,用于脫落滋養(yǎng)層細(xì)胞的鑒定與分離;同時(shí),我們將單細(xì)胞分離的胎兒細(xì)胞進(jìn)行深入的、多位點(diǎn)的胎源性驗(yàn)證;在第三部分中,我們還將這些稀有細(xì)胞運(yùn)用于地中海貧血的產(chǎn)前診斷中,并通過(guò)高通量測(cè)序分析,從而評(píng)估其在地中海貧血等單基因性疾病中的應(yīng)用。研究方法1.通過(guò)ddPCR與qPCR評(píng)估脫落胎兒細(xì)胞的數(shù)目;通過(guò)顯微鏡熒光定量與流式細(xì)胞術(shù)等評(píng)估滋養(yǎng)層細(xì)胞與母體細(xì)胞差異,建立脫落滋養(yǎng)層細(xì)胞新型鑒定方法（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色結(jié)合線性判別分析,ER-LDA）;評(píng)估ER-LDA在細(xì)胞系模型與臨床標(biāo)本中的檢測(cè)效果。2.通過(guò)單細(xì)胞分離,獲取滋養(yǎng)層單細(xì)胞;通過(guò)免疫熒光分析脫落滋養(yǎng)層細(xì)胞的蛋白標(biāo)志物表達(dá)情況;通過(guò)熒光原... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：142 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２脫落細(xì)胞樣本進(jìn)行免疫熒光鑒定

?第一章新型滋養(yǎng)層細(xì)胞鑒定方法ＥＲ－ＬＤＡ的建立???Ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ?ｃｅｌｌ?Ｃｅｒｖｉｃａｌ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌ?調(diào)??■Ｈ?ｐＤＩＡ３??七一?Ｉ：．．．：＇＇Ｑ?ＲＲＢＰ１??ＣＹＰ５１Ａ１??ｆｌ■■隱?１??「■畫(huà)醒?ＰＳＭＤ１??ｊ１－■■麵一?ＰＳＭＤ２??ＰＲＫＣＳＨ??ＲＰＮ１??ＫＴＮ１?????ＣＡＬＲ??ＢＣＡＰ３１??ｉ？ＨＳＥＣ６ｌＢ??■?ＲＰＮ２??Ｓ?ＨＳＰ９０Ｂ１??ＣＡＮＸ??ＤＤＯＳＴ??１?■■■■■Ｈｕｍｕｍｎｉ?ｐ４ｈｂ??ｃ／ＶＶ％，??圖１－３滋養(yǎng)層細(xì)胞中ＥＲ相關(guān)的基因表達(dá)升高。通過(guò)ＭＥＲＡＶ?jǐn)?shù)據(jù)，分析與ＥＲ活性或功能??相關(guān)的基因在滋養(yǎng)層細(xì)胞與宮頸上皮細(xì)胞中的表達(dá)量，結(jié)果顯示與宮頸上皮細(xì)胞相比，大部??分ＥＲ相關(guān)的基因在滋養(yǎng)層細(xì)胞中表達(dá)升高。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＥＲ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ａｒｅ?ｈｉｇｌｉｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｉｎ?ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ?ｃｅｌｌｓ．?Ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ｐｕｂｌｉｃｌｙ??ａｖａｉｌａｂｌｅ?ｄａｔａ?ｂａｓｅ，?ＭＥＲＡＶ，?ｔｈｅ?ｈｅａｔｍａｐ?ｓｈｏｗｓ?ｔｌｉａｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＥＲ－ｒｅｌａｔｅｄ?ｇｅｎｅｓ?ｉｓ??ｈｉｇｈｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｏｆ?ｃｅｍｃａｌ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ．??２８??

?博士學(xué)位論文???Ａ?１０］?１?巳?８－１???＇／?／?聲?／?／?／?＾??／??ｑ?Ｄ?Ｅ＾ＴＹａｃｋｅｒ?ＣＦＤ＾Ｅ??ＥＲ－ｔｒａｃｋｅｒ?ＤＡＰＩ?Ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?Ｍｅｒｇｅ??■參■■■??ＢｎａｈＵｉｅｌｄ??ＨＢ?議讓?zhuān)海海??瞧倫。??１＾１?：?Ａ??■■＿Ｈ?ｌ?ｉ??■■■■??■?Ｗｈｉｔｅ?ｂｌｏｏｄ?ｃｅｌｌｓ??０?１０３?１０４?１０５??Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ??圖１－４滋養(yǎng)層細(xì)胞與鱗狀上皮細(xì)胞、白細(xì)胞的ＥＲ熒光強(qiáng)度分析。（Ａ）滋養(yǎng)層細(xì)胞與鱗狀??上皮細(xì)胞的熒光差異分析。（Ｂ）滋養(yǎng)層細(xì)胞與白細(xì)胞的熒光差異分析。（Ｃ）共聚焦顯微鏡??分析滋養(yǎng)層細(xì)胞與鱗狀上皮細(xì)胞、白細(xì)胞的ＥＲ熒光強(qiáng)度差異。（Ｄ）ＣＦＤＡ－ＳＥ預(yù)標(biāo)的滋養(yǎng)??層細(xì)胞摻入Ｐａｐ標(biāo)本中進(jìn)汙ＥＲ染色分析。白色箭頭指示的是滋養(yǎng)層細(xì)胞，黃色箭頭指示的??是鱗狀上皮細(xì)胞。（Ｅ）流式細(xì)胞術(shù)分析滋養(yǎng)層細(xì)胞Ｕ鱗狀上皮細(xì)胞、白細(xì)胞的ＥＲ熒光差異。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４．?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ＥＲ－ｔｒａｃｋｅｒ?ｉｎ?ｔｈｒｅｅ?ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ，??ＨＴＲ８－Ｓ／Ｖｎｅｏ，?ＪＥＧ－３，?ａｎｄ?ＪＡＲ，?ａｎｄ?ｉｎ?ｓｑｕａｍｏｕｓ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ｗｈｉｔｅ?ｂｌｏｏｄ?ｃｅｌｌｓ?ｔａｋｅｎ?ｆｒｏｍ??ｈｅａｌｔｈｙ?ｆｅｍａｌｅ?ｄｏｎｏｒｓ?（Ａ，?Ｂ）．?（Ｃ）?Ｃｅｌｌｓ?ａｒｅ?ｓｔａｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ?Ｒｅｄ?ａ


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