本文關(guān)鍵詞：IMP3在宮頸HSIL與SCC病理診斷和臨床預(yù)后的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景宮頸癌是全球女性第三常見的癌癥,在2008年造成275000死亡人。眾多研究證明高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變(High-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)能進(jìn)展為鱗狀細(xì)胞癌(Squamous cell carcinoma, SCC)。但區(qū)分兩者非常必要,因?yàn)榍罢卟灰欢ㄟM(jìn)展為SCC,屬于癌前病變；而后者具有侵襲性與轉(zhuǎn)移性,而且兩者臨床治療方式也不同。液基細(xì)胞學(xué)(LBC)比傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)收集的宮頸細(xì)胞更豐富、制片背景清爽、診斷的敏感性更高,逐漸替代了傳統(tǒng)的宮頸細(xì)胞學(xué)。通常,HSIL和SCC在經(jīng)液基制片后不會(huì)造成診斷困難。但是有時(shí)由于細(xì)胞量少、腫瘤特征缺失和組織碎片的重疊等,難以區(qū)分SCC與HSIL,其中組織碎片和細(xì)胞擁擠是宮頸細(xì)胞學(xué)診斷上最常見的錯(cuò)誤來源。因此,把宮頸細(xì)胞制成細(xì)胞塊,不但保存了部分組織結(jié)構(gòu)與細(xì)胞形態(tài),而且還可以開展免疫組化、原位雜交和染色體倍性分析等輔助檢查,成為細(xì)胞學(xué)診斷的一種輔助手段。宮頸鱗狀上皮異常的細(xì)胞學(xué)診斷包括低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變(Low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)、 HSIL和SCC,這種分類方案不僅提供了標(biāo)準(zhǔn)化的術(shù)語(yǔ),而且能指導(dǎo)臨床治療。值得注意的是,在實(shí)踐工作中有些標(biāo)本很難歸于診斷模式細(xì)胞,導(dǎo)致LSIL過度診斷或HSIL診斷過低。為了減少細(xì)胞學(xué)與組織學(xué)診斷的之間的不一致率,免疫細(xì)胞化學(xué),已被成為宮頸細(xì)胞學(xué)輔助診斷的重要手段。P16INK4a(p16),為腫瘤抑制蛋白,調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞周期的G1期的進(jìn)展,已證明在幾乎所有的宮頸癌前期病變和浸潤(rùn)性癌均高表達(dá)。在宮頸細(xì)胞學(xué)檢查,有文獻(xiàn)用p16標(biāo)記HSIL和SCC,研究證實(shí)HSIL和SCC均表達(dá)p16,因此采用免疫組化的方法有時(shí)難以區(qū)別SCC和HSIL。IMP3是胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)結(jié)合蛋白基因(IMP)的家庭成員,該家族包括IMP1, IMP2,和IMP3。也正是已知的KOC, IGF2BP3和1523s。成人IMP3通常在胎盤、淋巴結(jié)的生發(fā)中心和宮頸粘膜腺上皮,一些惡性腫瘤包括非小細(xì)胞肺癌、肺的神經(jīng)內(nèi)分泌癌、肺外小細(xì)胞癌、間皮瘤、腎細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤、平滑肌肉瘤高表達(dá)。采用免疫組化分析可以用來區(qū)分良性病變、低級(jí)別瘤變、高級(jí)別瘤變和浸潤(rùn)性癌,正常組織和宮頸上皮內(nèi)瘤變I級(jí)IMP3表達(dá)陰性,CINⅡ表達(dá)極低、CIN Ⅲ表達(dá)增高、SCC高表達(dá),高表達(dá)示臨床過程不良和預(yù)后較差,在促進(jìn)細(xì)胞的粘附和侵襲性偽足的形成發(fā)揮了重要作用。但I(xiàn)MP3未發(fā)現(xiàn)在宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本檢測(cè)的報(bào)道,宮頸癌前病變和宮頸癌的研究報(bào)道也較少。為此,本研究首先利用液基細(xì)胞學(xué)殘液制備細(xì)胞蠟塊,觀測(cè)比較HSIL與SCC在液基細(xì)胞學(xué)形態(tài)特點(diǎn)與鑒別要點(diǎn),隨后檢測(cè)細(xì)胞塊切片IMP3和p16的表達(dá),探究IMP3與p16分子標(biāo)志物聯(lián)合運(yùn)用區(qū)別HSIL和SCC的可行性,同時(shí)檢測(cè)了宮頸癌細(xì)胞株SiHa、HeLa細(xì)胞IMP3蛋白和mRNA的表達(dá),爾后運(yùn)用用免疫組織化學(xué)觀測(cè)了IMP3在正常宮頸組織、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、與SCC的表達(dá)模式,評(píng)估IMP3與SCC發(fā)生、進(jìn)展與預(yù)后的關(guān)系。目的1.建立一套宮頸液基細(xì)胞學(xué)細(xì)胞塊的研制方法；2.提出宮頸HSIL與SCC鑒別的具體形態(tài)特征；3.驗(yàn)證IMP3和p16INK4a聯(lián)合運(yùn)用提高宮頸細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率；4.觀測(cè)IMP3在正常宮頸組織、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、SCC和宮頸癌細(xì)胞株的表達(dá)模式,評(píng)估IMP3與SCC發(fā)生、進(jìn)展與預(yù)后的關(guān)系。方法1.宮頸液基細(xì)胞學(xué)細(xì)胞塊的研制及宮頸HSIL與SCC鑒別的形態(tài)特征收集南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦科門診2008年1月1日到2009年12月30日液基殘留標(biāo)本制備細(xì)胞塊。病變包括非典型鱗狀細(xì)胞(ASC-H), LSIL, HSIL和SCC,共計(jì)141例,其中43例有活檢確診,95.7%制成細(xì)胞塊,測(cè)量取得細(xì)胞塊的大小,評(píng)估的細(xì)胞的形態(tài)特征：細(xì)胞簇(至少50個(gè)細(xì)胞)存在或不存在,細(xì)胞簇平均數(shù)；上皮間質(zhì)交界的存在或不存在,上皮間質(zhì)的平均數(shù),間質(zhì)消失情況,存在間質(zhì)浸潤(rùn)的平均數(shù)；存在或不存在腫瘤壞死；進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2.IMP3和p16INK4a聯(lián)合運(yùn)用提高宮頸細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率的研究收集南方科大學(xué)第三附屬醫(yī)院2008-2010年的檔案陽(yáng)性標(biāo)本(LSIL, HSIL,和SCC)共98例,由兩位病理醫(yī)師按照國(guó)際細(xì)胞學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)(2001 Bethesda)對(duì)所有液基細(xì)胞學(xué)診斷及其對(duì)應(yīng)細(xì)胞塊切片進(jìn)行了診斷并達(dá)成共識(shí)。細(xì)胞學(xué)診斷為L(zhǎng)SIL、HSIL和SCC,細(xì)胞塊診斷根據(jù)WHO宮頸診斷標(biāo)準(zhǔn)CIN1、CIN 2/CIN 3或SCC, CIN1的病理診斷相當(dāng)于LSIL細(xì)胞學(xué)診斷,CIN2/3相當(dāng)于HSIL, SCC相當(dāng)于SCC。采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法,檢測(cè)p16和IMP3在細(xì)胞塊LSIL、HSIL和SCC表達(dá),統(tǒng)計(jì)分析p16和IMP3表達(dá)在LSIL、HSIL和SCC的敏感性和特異性。3.IMP3表達(dá)與宮頸SCC預(yù)后相關(guān)性的研究運(yùn)用免疫組化的方法,觀測(cè)IMP3在宮頸正常組織、CIN及SCC的表達(dá)和染色定位,分析IMP3的表達(dá)與年齡、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、浸潤(rùn)間質(zhì)深度、腫瘤大小和淋巴血管間隙浸潤(rùn)、患者生存關(guān)系。采用Real-time PCQ和Western blot檢測(cè)IMP3在宮頸癌細(xì)胞株的SiHa、HeLa細(xì)胞mRNA表達(dá)和蛋白的表達(dá)。4.統(tǒng)計(jì)方法采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析。組間比較采用計(jì)數(shù)資料的)c2檢驗(yàn)。使用Log-Rank法進(jìn)行單因素生存分析,繪制]Kaplan-Meier生存曲線,多因素生存分析采用Cox回歸。Real-time PCR結(jié)果用單向方差分析(one-way ANOVA).按P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.宮頸液基細(xì)胞學(xué)細(xì)胞塊的研制及宮頸HSIL與SCC鑒別的形態(tài)特征93%(40/43)細(xì)胞塊診斷與組織學(xué)診斷一致,比單純采用細(xì)胞學(xué)診斷(81.4%,35/43)要好。細(xì)胞塊平均大小,在HSIL為0.54cm(0.3-1.0cm),SCC為0.84cm(0.4-1.4cm),兩者相比存在顯著性差異(P0.0001)。細(xì)胞團(tuán)的存在,HSIL為70.8%(17/24),SCC為100%(19/19),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)。間質(zhì)浸潤(rùn)、突破基底膜和腫瘤壞死,SCC細(xì)胞塊84.2%(16/19)有問質(zhì)浸潤(rùn),68.4%(13/19)可見突破基底膜,42.1%(8/19)有腫瘤壞死,；而HSIL沒有觀察到基底突破,間質(zhì)浸潤(rùn)或腫瘤壞死,HSIL和SCC之間存在顯著性差異顯著(P0.0001)。2.IMP3和p16INK4a聯(lián)合運(yùn)用提高宮頸細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率研究在98例細(xì)胞病理診斷,其中37例為L(zhǎng)SIL,36例為HSIL,25例為SCC；LBC細(xì)胞病理診斷與組織病理診斷符合率分別為L(zhǎng)SIL59.5%(22/37), HSIL63.9%(23/36),SCC為88.0%(22/25),總符合率為68.4%(67/98)。P16在HSIL(72.2%)和SCC(100%)高表達(dá),而在LSIL(29.7%)表達(dá)率較低。IMP3在84%的SCC高表達(dá),LSIL和HSIL表達(dá)率分別為8.1%和25.0%。p16和IMP3組合表達(dá)歸納為以下三類：P16-/IMP3-,p16+/IMP3-,或p16+/IMP3+;一般情況下,P16-/IMP3-為CIN1,p16+/IMP3-為CIN2/3,p16+/ IMP3+為SCC。3.IMP3表達(dá)與宮頸SCC預(yù)后相關(guān)性的研究(1)IMP3在宮頸正常組織和宮頸CIN及宮頸SCC的表達(dá)IMP3在40例正常宮頸組織不表達(dá)(0%)。在204例宮頸上皮內(nèi)瘤變中4.4%表達(dá)IMP3,62例CIN I和38例CIN II中不表達(dá),104例CIN III中有9例(8.7%)表達(dá)IMP3,96例SCC中54例表達(dá)IMP3(56.3%)。所有測(cè)試的組之間存在顯著性差異(P0.001)。9例CIN Ⅲ中,8例(88.9%)IMP3弱陽(yáng)性表達(dá),染色定位于受累區(qū)的中心部,在細(xì)胞層基底部為陰性。IMP3陽(yáng)性54例SCC病例中,染色弱、中、強(qiáng)的比率分比例分別為15例(27.8%)、20例(37%)、19例(35.2%)；11例(20.3%)得分為1、9例(16.7%)得分為2、9例(16.7%)得分為3、25例(46.3%)得分為4；彌漫陽(yáng)性組88.9%(48/54)和中央陰性組11.1%(6/54),彌漫陽(yáng)性組在癌巢內(nèi)彌漫陽(yáng)性；而中央陰性組病例中,IMP3陽(yáng)性定位在癌巢周圍,癌巢中心不著色,癌巢周邊為角化的癌細(xì)胞,細(xì)胞間橋明顯,有角化珠形成,分化差的癌細(xì)胞和核分裂像位于癌巢的中心,組織病理學(xué)癌細(xì)胞呈嵌套式的增長(zhǎng)模式。(2)IMP3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系IMP3表達(dá)與年齡(P0.001)和臨床分期(P0.001)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P=0.001)顯著相關(guān),與組織學(xué)分級(jí)(P=0.125)、浸潤(rùn)間質(zhì)深度(P=0.242)、腫瘤大小(P=0.298)和淋巴血管間隙浸潤(rùn)(P=0.459)無關(guān)顯著相關(guān)。(3)IMP3表達(dá)與預(yù)后的意義60例患者隨訪60個(gè)月,患者的中位生存時(shí)間為58.13個(gè)月(范圍,9-87個(gè)月),其中18例(30.0%)死亡。IMP3陽(yáng)性患者的存活率比IMP3陰性患者要差(P=0.005)。(4)IMP3蛋白在宮頸癌細(xì)胞株的mRNA表達(dá)IMP3 mRNA表達(dá),與正常宮頸組織(1±0.05)相比,SiHa (2.29±0.14, P0.001)和HeLa (1.33±0.05, P0.05)。Western blot分析進(jìn)一步表明IMP3蛋白在SiHa、HeLa細(xì)胞表達(dá),而在正常宮頸IMP3表達(dá)很低。結(jié)論1.液基殘余液體樣品能制備完好的細(xì)胞塊,增加了液基細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性,在間質(zhì)浸潤(rùn)、上皮間質(zhì)交界反應(yīng)和腫瘤壞死三方面的觀察有力于區(qū)別HSIL與SCC；2.p16/IMP3比LBC敏感性高,但特異性較低；IMP3是確定SCC有用的診斷免疫標(biāo)記,與p16聯(lián)合運(yùn)用,可提高細(xì)胞學(xué)診斷與組織學(xué)診斷HSIL和SCC的符合率；3.IMP3的表達(dá)是宮頸SCC預(yù)后的獨(dú)立因素,是預(yù)后差的指標(biāo)；4.采用IMP3標(biāo)記定位可將SCC分為彌漫陽(yáng)性組和中央陰性組,在SCC表達(dá)模式不同意義仍待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：子宮頸 宮頸上皮內(nèi)瘤變 鱗狀細(xì)胞癌 IMP3 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-19
• 前言19-27
• 參考文獻(xiàn)20-27
• 第一章 宮頸液基細(xì)胞學(xué)細(xì)胞塊的研制及HSIL與SCC區(qū)別的形態(tài)特征27-38
• 1 材料和方法27-28
• 2 結(jié)果28-32
• 3. 討論32-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 第二章 IMP3和p16~(INK4α)聯(lián)合運(yùn)用提高宮頸細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率的研究38-52
• 1 材料和方法39-40
• 2 結(jié)果40-45
• 3. 討論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 第三章 IMP3表達(dá)與宮頸SCC預(yù)后相關(guān)性的研究52-70
• 1 材料和方法52-59
• 2. 結(jié)果59-65
• 3. 討論65-67
• 參考文獻(xiàn)67-70
• 全文小結(jié)70-72
• 附錄1：英文縮寫注解72-73
• 附錄2：IMP3與宮頸癌侵襲與轉(zhuǎn)移的關(guān)系綜述73-82
• 參考文獻(xiàn)77-82
• 攻讀碩士學(xué)位期間成果82-83
• 致謝83-84

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 黃新立;高園園;丁軍;王學(xué)浩;;原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌組織中IMP3表達(dá)與臨床特點(diǎn)和基因甲基化相關(guān)性的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年05期

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  本文關(guān)鍵詞：IMP3在宮頸HSIL與SCC病理診斷和臨床預(yù)后的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：346525