本文關(guān)鍵詞：IMP3在宮頸HSIL與SCC病理診斷和臨床預(yù)后的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景宮頸癌是全球女性第三常見的癌癥,在2008年造成275000死亡人。眾多研究證明高級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變(High-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)能進展為鱗狀細胞癌(Squamous cell carcinoma, SCC)。但區(qū)分兩者非常必要,因為前者不一定進展為SCC,屬于癌前病變；而后者具有侵襲性與轉(zhuǎn)移性,而且兩者臨床治療方式也不同。液基細胞學(xué)(LBC)比傳統(tǒng)細胞學(xué)收集的宮頸細胞更豐富、制片背景清爽、診斷的敏感性更高,逐漸替代了傳統(tǒng)的宮頸細胞學(xué)。通常,HSIL和SCC在經(jīng)液基制片后不會造成診斷困難。但是有時由于細胞量少、腫瘤特征缺失和組織碎片的重疊等,難以區(qū)分SCC與HSIL,其中組織碎片和細胞擁擠是宮頸細胞學(xué)診斷上最常見的錯誤來源。因此,把宮頸細胞制成細胞塊,不但保存了部分組織結(jié)構(gòu)與細胞形態(tài),而且還可以開展免疫組化、原位雜交和染色體倍性分析等輔助檢查,成為細胞學(xué)診斷的一種輔助手段。宮頸鱗狀上皮異常的細胞學(xué)診斷包括低級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變(Low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)、 HSIL和SCC,這種分類方案不僅提供了標準化的術(shù)語,而且能指導(dǎo)臨床治療。值得注意的是,在實踐工作中有些標本很難歸于診斷模式細胞,導(dǎo)致LSIL過度診斷或HSIL診斷過低。為了減少細胞學(xué)與組織學(xué)診斷的之間的不一致率,免疫細胞化學(xué),已被成為宮頸細胞學(xué)輔助診斷的重要手段。P16INK4a(p16),為腫瘤抑制蛋白,調(diào)節(jié)細胞的增殖,抑制細胞周期的G1期的進展,已證明在幾乎所有的宮頸癌前期病變和浸潤性癌均高表達。在宮頸細胞學(xué)檢查,有文獻用p16標記HSIL和SCC,研究證實HSIL和SCC均表達p16,因此采用免疫組化的方法有時難以區(qū)別SCC和HSIL。IMP3是胰島素樣生長因子(IGF)結(jié)合蛋白基因(IMP)的家庭成員,該家族包括IMP1, IMP2,和IMP3。也正是已知的KOC, IGF2BP3和1523s。成人IMP3通常在胎盤、淋巴結(jié)的生發(fā)中心和宮頸粘膜腺上皮,一些惡性腫瘤包括非小細胞肺癌、肺的神經(jīng)內(nèi)分泌癌、肺外小細胞癌、間皮瘤、腎細胞癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤、平滑肌肉瘤高表達。采用免疫組化分析可以用來區(qū)分良性病變、低級別瘤變、高級別瘤變和浸潤性癌,正常組織和宮頸上皮內(nèi)瘤變I級IMP3表達陰性,CINⅡ表達極低、CIN Ⅲ表達增高、SCC高表達,高表達示臨床過程不良和預(yù)后較差,在促進細胞的粘附和侵襲性偽足的形成發(fā)揮了重要作用。但IMP3未發(fā)現(xiàn)在宮頸細胞學(xué)標本檢測的報道,宮頸癌前病變和宮頸癌的研究報道也較少。為此,本研究首先利用液基細胞學(xué)殘液制備細胞蠟塊,觀測比較HSIL與SCC在液基細胞學(xué)形態(tài)特點與鑒別要點,隨后檢測細胞塊切片IMP3和p16的表達,探究IMP3與p16分子標志物聯(lián)合運用區(qū)別HSIL和SCC的可行性,同時檢測了宮頸癌細胞株SiHa、HeLa細胞IMP3蛋白和mRNA的表達,爾后運用用免疫組織化學(xué)觀測了IMP3在正常宮頸組織、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、與SCC的表達模式,評估IMP3與SCC發(fā)生、進展與預(yù)后的關(guān)系。目的1.建立一套宮頸液基細胞學(xué)細胞塊的研制方法；2.提出宮頸HSIL與SCC鑒別的具體形態(tài)特征；3.驗證IMP3和p16INK4a聯(lián)合運用提高宮頸細胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率；4.觀測IMP3在正常宮頸組織、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ、SCC和宮頸癌細胞株的表達模式,評估IMP3與SCC發(fā)生、進展與預(yù)后的關(guān)系。方法1.宮頸液基細胞學(xué)細胞塊的研制及宮頸HSIL與SCC鑒別的形態(tài)特征收集南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦科門診2008年1月1日到2009年12月30日液基殘留標本制備細胞塊。病變包括非典型鱗狀細胞(ASC-H), LSIL, HSIL和SCC,共計141例,其中43例有活檢確診,95.7%制成細胞塊,測量取得細胞塊的大小,評估的細胞的形態(tài)特征：細胞簇(至少50個細胞)存在或不存在,細胞簇平均數(shù)；上皮間質(zhì)交界的存在或不存在,上皮間質(zhì)的平均數(shù),間質(zhì)消失情況,存在間質(zhì)浸潤的平均數(shù)；存在或不存在腫瘤壞死；進行統(tǒng)計分析。2.IMP3和p16INK4a聯(lián)合運用提高宮頸細胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率的研究收集南方科大學(xué)第三附屬醫(yī)院2008-2010年的檔案陽性標本(LSIL, HSIL,和SCC)共98例,由兩位病理醫(yī)師按照國際細胞學(xué)診斷標準(2001 Bethesda)對所有液基細胞學(xué)診斷及其對應(yīng)細胞塊切片進行了診斷并達成共識。細胞學(xué)診斷為LSIL、HSIL和SCC,細胞塊診斷根據(jù)WHO宮頸診斷標準CIN1、CIN 2/CIN 3或SCC, CIN1的病理診斷相當于LSIL細胞學(xué)診斷,CIN2/3相當于HSIL, SCC相當于SCC。采用免疫細胞化學(xué)的方法,檢測p16和IMP3在細胞塊LSIL、HSIL和SCC表達,統(tǒng)計分析p16和IMP3表達在LSIL、HSIL和SCC的敏感性和特異性。3.IMP3表達與宮頸SCC預(yù)后相關(guān)性的研究運用免疫組化的方法,觀測IMP3在宮頸正常組織、CIN及SCC的表達和染色定位,分析IMP3的表達與年齡、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、浸潤間質(zhì)深度、腫瘤大小和淋巴血管間隙浸潤、患者生存關(guān)系。采用Real-time PCQ和Western blot檢測IMP3在宮頸癌細胞株的SiHa、HeLa細胞mRNA表達和蛋白的表達。4.統(tǒng)計方法采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理和分析。組間比較采用計數(shù)資料的)c2檢驗。使用Log-Rank法進行單因素生存分析,繪制]Kaplan-Meier生存曲線,多因素生存分析采用Cox回歸。Real-time PCR結(jié)果用單向方差分析(one-way ANOVA).按P0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.宮頸液基細胞學(xué)細胞塊的研制及宮頸HSIL與SCC鑒別的形態(tài)特征93%(40/43)細胞塊診斷與組織學(xué)診斷一致,比單純采用細胞學(xué)診斷(81.4%,35/43)要好。細胞塊平均大小,在HSIL為0.54cm(0.3-1.0cm),SCC為0.84cm(0.4-1.4cm),兩者相比存在顯著性差異(P0.0001)。細胞團的存在,HSIL為70.8%(17/24),SCC為100%(19/19),具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.0001)。間質(zhì)浸潤、突破基底膜和腫瘤壞死,SCC細胞塊84.2%(16/19)有問質(zhì)浸潤,68.4%(13/19)可見突破基底膜,42.1%(8/19)有腫瘤壞死,；而HSIL沒有觀察到基底突破,間質(zhì)浸潤或腫瘤壞死,HSIL和SCC之間存在顯著性差異顯著(P0.0001)。2.IMP3和p16INK4a聯(lián)合運用提高宮頸細胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率研究在98例細胞病理診斷,其中37例為LSIL,36例為HSIL,25例為SCC；LBC細胞病理診斷與組織病理診斷符合率分別為LSIL59.5%(22/37), HSIL63.9%(23/36),SCC為88.0%(22/25),總符合率為68.4%(67/98)。P16在HSIL(72.2%)和SCC(100%)高表達,而在LSIL(29.7%)表達率較低。IMP3在84%的SCC高表達,LSIL和HSIL表達率分別為8.1%和25.0%。p16和IMP3組合表達歸納為以下三類：P16-/IMP3-,p16+/IMP3-,或p16+/IMP3+;一般情況下,P16-/IMP3-為CIN1,p16+/IMP3-為CIN2/3,p16+/ IMP3+為SCC。3.IMP3表達與宮頸SCC預(yù)后相關(guān)性的研究(1)IMP3在宮頸正常組織和宮頸CIN及宮頸SCC的表達IMP3在40例正常宮頸組織不表達(0%)。在204例宮頸上皮內(nèi)瘤變中4.4%表達IMP3,62例CIN I和38例CIN II中不表達,104例CIN III中有9例(8.7%)表達IMP3,96例SCC中54例表達IMP3(56.3%)。所有測試的組之間存在顯著性差異(P0.001)。9例CIN Ⅲ中,8例(88.9%)IMP3弱陽性表達,染色定位于受累區(qū)的中心部,在細胞層基底部為陰性。IMP3陽性54例SCC病例中,染色弱、中、強的比率分比例分別為15例(27.8%)、20例(37%)、19例(35.2%)；11例(20.3%)得分為1、9例(16.7%)得分為2、9例(16.7%)得分為3、25例(46.3%)得分為4；彌漫陽性組88.9%(48/54)和中央陰性組11.1%(6/54),彌漫陽性組在癌巢內(nèi)彌漫陽性；而中央陰性組病例中,IMP3陽性定位在癌巢周圍,癌巢中心不著色,癌巢周邊為角化的癌細胞,細胞間橋明顯,有角化珠形成,分化差的癌細胞和核分裂像位于癌巢的中心,組織病理學(xué)癌細胞呈嵌套式的增長模式。(2)IMP3的表達與臨床病理特征的關(guān)系IMP3表達與年齡(P0.001)和臨床分期(P0.001)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P=0.001)顯著相關(guān),與組織學(xué)分級(P=0.125)、浸潤間質(zhì)深度(P=0.242)、腫瘤大小(P=0.298)和淋巴血管間隙浸潤(P=0.459)無關(guān)顯著相關(guān)。(3)IMP3表達與預(yù)后的意義60例患者隨訪60個月,患者的中位生存時間為58.13個月(范圍,9-87個月),其中18例(30.0%)死亡。IMP3陽性患者的存活率比IMP3陰性患者要差(P=0.005)。(4)IMP3蛋白在宮頸癌細胞株的mRNA表達IMP3 mRNA表達,與正常宮頸組織(1±0.05)相比,SiHa (2.29±0.14, P0.001)和HeLa (1.33±0.05, P0.05)。Western blot分析進一步表明IMP3蛋白在SiHa、HeLa細胞表達,而在正常宮頸IMP3表達很低。結(jié)論1.液基殘余液體樣品能制備完好的細胞塊,增加了液基細胞學(xué)診斷的準確性,在間質(zhì)浸潤、上皮間質(zhì)交界反應(yīng)和腫瘤壞死三方面的觀察有力于區(qū)別HSIL與SCC；2.p16/IMP3比LBC敏感性高,但特異性較低；IMP3是確定SCC有用的診斷免疫標記,與p16聯(lián)合運用,可提高細胞學(xué)診斷與組織學(xué)診斷HSIL和SCC的符合率；3.IMP3的表達是宮頸SCC預(yù)后的獨立因素,是預(yù)后差的指標；4.采用IMP3標記定位可將SCC分為彌漫陽性組和中央陰性組,在SCC表達模式不同意義仍待進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：子宮頸 宮頸上皮內(nèi)瘤變 鱗狀細胞癌 IMP3 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-19
• 前言19-27
• 參考文獻20-27
• 第一章 宮頸液基細胞學(xué)細胞塊的研制及HSIL與SCC區(qū)別的形態(tài)特征27-38
• 1 材料和方法27-28
• 2 結(jié)果28-32
• 3. 討論32-34
• 參考文獻34-38
• 第二章 IMP3和p16~(INK4α)聯(lián)合運用提高宮頸細胞學(xué)和組織學(xué)診斷符合率的研究38-52
• 1 材料和方法39-40
• 2 結(jié)果40-45
• 3. 討論45-47
• 參考文獻47-52
• 第三章 IMP3表達與宮頸SCC預(yù)后相關(guān)性的研究52-70
• 1 材料和方法52-59
• 2. 結(jié)果59-65
• 3. 討論65-67
• 參考文獻67-70
• 全文小結(jié)70-72
• 附錄1：英文縮寫注解72-73
• 附錄2：IMP3與宮頸癌侵襲與轉(zhuǎn)移的關(guān)系綜述73-82
• 參考文獻77-82
• 攻讀碩士學(xué)位期間成果82-83
• 致謝83-84

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 黃新立;高園園;丁軍;王學(xué)浩;;原發(fā)性肝細胞肝癌組織中IMP3表達與臨床特點和基因甲基化相關(guān)性的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年05期

2 李明;張亞軍;;IMP3蛋白在子宮頸癌中的表達及其與MVD的關(guān)系[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年10期

3 張著學(xué);楊迎春;易韋;文安智;吳倩;;胃腸道間質(zhì)瘤中IMP3的表達及意義[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2014年19期

4 常江;王穎;柳利;王滿倉;;IGF2BP3低甲基化與結(jié)腸癌組織分化的關(guān)系[J];天津醫(yī)藥;2015年06期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李文君;IMP3、RFP、HER-2蛋白在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

2 王亞娟;IGF-Ⅱ及IMP3在重度子癇前期患者胎盤組織中的表達及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

3 李冰熠;IMP1在上皮性卵巢癌組織中的表達及其意義[D];鄭州大學(xué);2014年

4 胡帥;IMP3聯(lián)合CD44s預(yù)測肝癌肝切除患者預(yù)后的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

5 劉紀昀;胰島素樣生長因子Ⅱ mRNA結(jié)合蛋白3、p16在宮頸上皮內(nèi)腫瘤及癌的表達及意義[D];貴陽醫(yī)學(xué)院;2014年

  本文關(guān)鍵詞：IMP3在宮頸HSIL與SCC病理診斷和臨床預(yù)后的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：346525