目的：通過siRNA靶向沉默Akt基因，探討其對卵巢癌細(xì)胞系SKOV3/DDP細(xì)胞生長的影響作用，為卵巢癌的基因治療，提供新的實驗依據(jù)。方法：1、采用Lipofectamine2000脂質(zhì)體介導(dǎo)法將特異性的Akt siRNA轉(zhuǎn)染入人卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞，檢測siRNA靶向沉默Akt后對卵巢癌細(xì)胞生長的影響。2、用轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000包裹不同濃度熒光標(biāo)記的siRNA（FAM-siRNA）轉(zhuǎn)染SKOV3/DDP細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀檢測其轉(zhuǎn)染效率，確定siRNA最佳轉(zhuǎn)染濃度。3、篩選有效Akt siRNA片段，實驗分為5組：①空白對照組（control）②Akt siRNA-1③Akt siRNA-2④Akt siRNA-3⑤陰性對照組（Negative Control，NC）。轉(zhuǎn)染48h后，用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測各組Akt mRNA的表達(dá)情況，篩選出Akt siRNA片段。4、Akt siRNA片段轉(zhuǎn)染到卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞后對細(xì)胞生長的影響。將篩選出的Akt siRNA片段經(jīng)Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染到卵巢癌SKOV3... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 材料和方法
    2.1 細(xì)胞
    2.2 主要儀器
    2.3 主要試劑
    2.4 實驗方法
        2.4.1 Akt siRNA 序列的設(shè)計與合成
        2.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)及其相關(guān)試劑的配置
        2.4.3 qRT-PCR 和 Western Blot 主要試劑的配置
        2.4.4 siRNA 的轉(zhuǎn)染
    2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 卵巢癌 SKOV3/DDP 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率
    3.2 有效 Akt siRNA 片段的篩選
    3.3 siRNA 沉默 Akt 后對人卵巢癌 SKOV3/DDP 細(xì)胞生長的影響
        3.3.1 卵巢癌 SKOV3/DDP 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h 后，細(xì)胞周期的變化
        3.3.2 卵巢癌 SKOV3/DDP 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h 后，細(xì)胞凋亡率的變化
        3.3.3 卵巢癌 SKOV3/DDP 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h 后，細(xì)胞增殖活性的變化
        3.3.4 卵巢癌 SKOV3/DDP 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h 后，Akt、p-Akt 蛋白表達(dá)水平的變化
第4章 討論
    4.1 RNA 干擾及其作用機制
    4.2 人卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株 SKOV3/DDP 細(xì)胞 siRNA 的轉(zhuǎn)染
    4.3 siRNA 對人卵巢癌 SKOV3/DDP 細(xì)胞 Akt 基因表達(dá)的抑制作用
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 進一步研究方向
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3437763