本文關鍵詞：骨膜素對子宮內(nèi)膜間質細胞遷移、侵襲、粘附的調(diào)控及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的：子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EMs)是一種常見的婦科良性疾病,其發(fā)病率約占生育年齡女性的10%,治療方式主要包括腹腔鏡及促性腺激素釋放激素類似物(GnRHa)、芳香化酶抑制劑及孕酮等藥物治療,但術后仍有較高的復發(fā)率,長期使用藥物會引起許多副反應。而且,EMs與惡性腫瘤及許多慢性病的發(fā)生有關,因此尋找一有效的治療靶點至關重要。目前,EMs的發(fā)病機制尚不明確,但Sampson的經(jīng)血逆流學說仍占主導地位,近年郎景和院士提出的在位內(nèi)膜決定論為EMs的發(fā)病機理做出了補充說明,即子宮內(nèi)膜碎片的異位粘附、侵襲及血管形成。骨膜素(periostin, PN)是成束蛋白Ⅰ家族的成員,在成體組織中低表達,但在腫瘤、損傷及炎癥中起到至關重要的作用,高水平的PN可以促進腫瘤細胞粘附、侵襲、遷移及增殖。我們前期研究已表明PN在EMs的在位及異位內(nèi)膜間質中高度表達,而在EMs病理生理過程中所起的作用尚未研究。本文通過檢測PN對子宮內(nèi)膜間質細胞(ESCs)粘附、遷移、侵襲及增殖能力的影響,進一步探索PN在EMs發(fā)生過程中的機制。方法：1.收集25例正常女性的子宮內(nèi)膜,32例EMs患者的在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜,分離并純化子宮內(nèi)膜間質細胞,通過細胞免疫熒光法鑒定其來源及純度。2.用Western blot的方法分別檢測正常子宮內(nèi)膜間質細胞(NSCs)、子宮內(nèi)膜異位癥在位(EuSCs)及異位內(nèi)膜間質細胞(EcSCs)中PN、整合素連接激酶1 (integrin-linked kinase 1, ILK1)、 p-Akt的表達,比較三種蛋白的表達差異；通過實時定量PCR(qPCR)檢測,分析三組細胞中PN mRNA的表達情況。3. PN siRNA于擾后分別檢測PN、ILK1、p-Akt蛋白水平的變化。4. PN siRNA干擾后檢測細胞粘附、遷移、侵襲及增殖等生物學行為的改變。結果：1. ESCs的鑒定及其純度：采用膠原酶消化、篩網(wǎng)過濾法,成功地分離并純化ESCs,經(jīng)鑒定所培養(yǎng)的細胞絕大部分為間質細胞,其純度是(96.1±2.2)%。2. PN、ILKl及p-Akt在NSCs、EuSCs、EcSCs中的表達情況：與NSCs相比,EuSCs及EcSCs中PN蛋白及mRNA的表達水平上調(diào),但NSCs與EuSCs中PN mRNA表達無差異；在EuSCs及EcSCs中,ILK1和p-Akt的表達增加(P0.05)。3.PN對ILK1及p-Akt表達水平的影響：PN siRNA干擾后,PN、ILK1、 p-Akt的表達均下調(diào)(P0.05)。4.PN對ESCs遷移、侵襲、粘附及增殖的影響：EuSCs及EcSCs的遷移及侵襲能力較NSCs增強(P0.01；P0.001),PN siRNA干擾后,EcSCs的遷移及侵襲能力下降(P0.05；P0.01)；EcSCs的粘附速率最快(P0.05),PNsiRNA干擾的EcSCs與纖維連接蛋白(FN)相互作用60mins后,粘附能力下降明顯(P0.05),EcSCs之間纖維連接增多,PN siRNA干擾后,細胞之間纖維樣物質溶解；EuSCs與EcSCs的增殖能力較強,但是差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),PN siRNA轉染后,EcSCs增殖能力無明顯變化。結論：1.膠原酶消化、篩網(wǎng)過濾法分離培養(yǎng)的ESCs純度較高,NSCs、EuSCs及EcSCs的來源均為子宮內(nèi)膜間質。2.PN通過激活ILK1/Akt信號通路促進ESCs遷移、侵襲及粘附,PN還能夠促進細胞間纖維樣物質生成。3.PN可能是治療EMs的新型靶點。
【關鍵詞】：骨膜素 子宮內(nèi)膜間質細胞 ILK1/Akt 遷移 侵襲 粘附
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R711.71
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 符號說明11-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-29
• 實驗結果29-31
• 討論31-35
• 結論35-36
• 附圖36-45
• 參考文獻45-50
• 致謝50-51
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄51-52
• 附件52

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