背景與目的:卵巢癌是死亡率最高的婦科腫瘤,卵巢癌的臨床一線化療藥物為鉑類和紫杉醇,然而鉑類和紫杉醇經(jīng)常誘發(fā)耐藥,最終腫瘤出現(xiàn)復發(fā)和轉(zhuǎn)移,所以開發(fā)新的化療藥物作為鉑類和紫杉醇耐藥后的候選藥物已成為臨床上卵巢癌治療的迫切需求。細胞周期蛋白CDC25B高表達于包括卵巢癌在內(nèi)的多種腫瘤中,并與臨床預后不良相關(guān)。本研究以CDC25B為靶點,篩選獲得其小分子化合物抑制劑,并研究其作為卵巢癌靶向治療藥物的潛力。研究方法:采用Western Blot法檢測FX01對CDC25B蛋白水平及其下游信號蛋白CDC2（即CDK1）的表達和磷酸化水平的影響。采用qRT-PCR法檢測FX01對CDC25B mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響。采用MTS法檢測FX01對卵巢癌細胞系和原代卵巢癌細胞增殖能力的影響。采用PI染色法檢測FX01誘導卵巢癌細胞周期阻滯的功效。采用Annexin V和PI雙染法,檢測FX01誘導卵巢癌細胞凋亡的功效。結(jié)果:1)小分子化合物FX01可靶向抑制CDC25B的表達,并進一步抑制其下游信號分子CDC2的活化。CDC2的失活導致卵巢癌細胞的周期進展阻滯于G2/M期。2)FX01可有效抑制卵巢癌細胞... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CDC25B的表達與卵巢癌患者預后不良相關(guān)

圖 2. FX01 抑制 CDC25B/CDC2 信號通路的活化。A， 5 μM FX01 作用 SKOV3 細胞24 h，qRT-PCR 檢測 CDC25B 的 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。**，p < 0.01。B，不同濃度的 FX01處理 SKOV3 細胞 24 h，Western Blot 法檢測 CDC25B 和 CDC2 的蛋白表達水平，以及CDC2 的 Tyr15 酪氨酸殘基磷酸化水平。PI3K 抑制劑 LY294002 為陰性對照。GAPDH 為內(nèi)參基因。3.2 FX01 誘導卵巢癌細胞周期阻滯快速分裂是腫瘤細胞的一大屬性，抑制腫瘤細胞的細胞周期進展，可有效殺傷腫瘤細胞。通過檢測 FX01 對卵巢癌細胞周期進展的影響，結(jié)果表明（圖 3），5 μM FX01 在作用 6 h 時就已表現(xiàn)出周期抑制的功能。FX0

圖 3. FX01 誘導卵巢癌細胞周期阻滯于 G2/M 期。SKOV3（A 和 B）或 ES2（C 和 細胞經(jīng) FX01 處理 6 h、12 h 或 24 h 后，用 PI 染色，于流式細胞儀中檢測細胞周期布。A 和 C 為代表圖，C 和 D 為統(tǒng)計圖。3.3 FX01 抑制卵巢癌細胞系和原代細胞的增殖通過檢測 FX01 對卵巢癌細胞增殖抑制的 IC50，可反應(yīng)其對腫瘤細的相對殺傷能力。研究結(jié)果表明（圖 4 和表 1），F(xiàn)X01 抑制卵巢癌細系 SKOV3（圖 4 A）、ES2 （圖 4 B）、IGROV1（圖 4 C）、MCAS（圖 4 D和 HO8910PM（圖 4 E），以及卵巢癌原代腫瘤細胞 CZ001（圖 4 G）、CZ0（圖 4 H）和 CZ008（圖 4 I）的 IC50均小于 5 μM。FX01 對正常卵巢上

【參考文獻】：
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本文編號：3417357