目的:研究不同極化狀態(tài)的巨噬細(xì)胞對(duì)上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移能力的影響及其可能的調(diào)控機(jī)制。方法:1.小鼠頸椎脫臼處死,取雙側(cè)脛骨和腓骨骨髓,提取小鼠骨髓細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)基中添加巨噬細(xì)胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）。分別應(yīng)用脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）、γ-干擾素（interferon-γ,INF-γ）和白細(xì)胞介素-4（interleukin-4,IL-4）進(jìn)行刺激,誘導(dǎo)分化獲得M1型和M2型巨噬細(xì)胞。2.用流式細(xì)胞術(shù)鑒定不同極化狀態(tài)的巨噬細(xì)胞的表面和胞內(nèi)標(biāo)志,巨噬細(xì)胞用F4/80,CD11b表面標(biāo)志進(jìn)行鑒定,M1型巨噬細(xì)胞利用CD11c表面標(biāo)志進(jìn)行鑒定,利用CD206標(biāo)志對(duì)M2型巨噬細(xì)胞進(jìn)行鑒定。利用qRT-PCR的方法鑒定M1型和M2型巨噬細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平。M1型巨噬細(xì)胞檢測(cè)IL-1β、TNFα、IL-6和iNOS的mRNA,M2型巨噬細(xì)胞檢測(cè)Arg-1、IL-10、TGF、Pparg和MCP-1的mRNA表達(dá)。3.建立0.4μM孔徑的Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng),用不同巨噬細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同巨噬細(xì)胞不同時(shí)期的形態(tài)特征

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 一、小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞提取鑒定及極化研究倍數(shù)下的進(jìn)行觀(guān)察。圖 1B 為 UM0，M1 型和 M2 型巨噬細(xì)胞在 100×放大倍數(shù)下的形態(tài)特征。1.2.2 應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)鑒定 M1 型和 M2 型巨噬細(xì)胞在小鼠細(xì)胞中，CD11b 主要表達(dá)于單核/巨噬細(xì)胞以及星形膠質(zhì)細(xì)胞表面，而 F4/80 抗原表達(dá)于大部分成熟巨噬細(xì)胞表面[34]。骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞一般為F4/80high，CD11bhigh表型。對(duì)提取培養(yǎng)的 BMDM 細(xì)胞（UM0 巨噬細(xì)胞）用 F4/80，CD11b 表面標(biāo)志進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示 F4/80 和 CD11b 雙陽(yáng)性的亞群（F4/80﹢，CD11b﹢），即圖 2B 右上角 Q2 為 94.9%，表明提取培養(yǎng)的骨髓單核細(xì)胞大部分分化為巨噬細(xì)胞（圖 2）。

14圖 3 應(yīng)用 CD11c 和 CD206 標(biāo)志物鑒定 M1 和 M2 型巨噬細(xì)胞圖 3A F4/80﹢CD11b﹢雙陽(yáng) M1 型巨噬細(xì)胞，圖 3B 鑒定為 CD11c﹢CD206﹣；圖 3C F4/80﹢CD11b﹢雙陽(yáng) M2 型巨噬細(xì)胞，圖 3D 鑒定為 CD11c﹣CD206﹢。1.2.3 應(yīng)用 qRT-PCR 方法鑒定 M1 型和 M2 型巨噬細(xì)胞處于不同極化狀態(tài)的巨噬細(xì)胞能夠產(chǎn)生各自不同的細(xì)胞因子譜，以行使不同的生物學(xué)功能。為了觀(guān)察應(yīng)用不同的細(xì)胞因子誘導(dǎo)不同極化狀態(tài)的巨噬細(xì)胞，本研究通過(guò) qRT-PCR 技術(shù)檢測(cè) M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物 IL-1β、TNFα、IL-6、iNOS


本文編號(hào)：3412334