目的:研究不同極化狀態(tài)的巨噬細胞對上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移能力的影響及其可能的調(diào)控機制。方法:1.小鼠頸椎脫臼處死,取雙側(cè)脛骨和腓骨骨髓,提取小鼠骨髓細胞,細胞培養(yǎng)基中添加巨噬細胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）。分別應(yīng)用脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）、γ-干擾素（interferon-γ,INF-γ）和白細胞介素-4（interleukin-4,IL-4）進行刺激,誘導(dǎo)分化獲得M1型和M2型巨噬細胞。2.用流式細胞術(shù)鑒定不同極化狀態(tài)的巨噬細胞的表面和胞內(nèi)標志,巨噬細胞用F4/80,CD11b表面標志進行鑒定,M1型巨噬細胞利用CD11c表面標志進行鑒定,利用CD206標志對M2型巨噬細胞進行鑒定。利用qRT-PCR的方法鑒定M1型和M2型巨噬細胞相關(guān)細胞因子的mRNA表達水平。M1型巨噬細胞檢測IL-1β、TNFα、IL-6和iNOS的mRNA,M2型巨噬細胞檢測Arg-1、IL-10、TGF、Pparg和MCP-1的mRNA表達。3.建立0.4μM孔徑的Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng),用不同巨噬細胞... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同巨噬細胞不同時期的形態(tài)特征

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 一、小鼠骨髓來源巨噬細胞提取鑒定及極化研究倍數(shù)下的進行觀察。圖 1B 為 UM0，M1 型和 M2 型巨噬細胞在 100×放大倍數(shù)下的形態(tài)特征。1.2.2 應(yīng)用流式細胞術(shù)鑒定 M1 型和 M2 型巨噬細胞在小鼠細胞中，CD11b 主要表達于單核/巨噬細胞以及星形膠質(zhì)細胞表面，而 F4/80 抗原表達于大部分成熟巨噬細胞表面[34]。骨髓來源的巨噬細胞一般為F4/80high，CD11bhigh表型。對提取培養(yǎng)的 BMDM 細胞（UM0 巨噬細胞）用 F4/80，CD11b 表面標志進行鑒定，結(jié)果顯示 F4/80 和 CD11b 雙陽性的亞群（F4/80﹢，CD11b﹢），即圖 2B 右上角 Q2 為 94.9%，表明提取培養(yǎng)的骨髓單核細胞大部分分化為巨噬細胞（圖 2）。

14圖 3 應(yīng)用 CD11c 和 CD206 標志物鑒定 M1 和 M2 型巨噬細胞圖 3A F4/80﹢CD11b﹢雙陽 M1 型巨噬細胞，圖 3B 鑒定為 CD11c﹢CD206﹣；圖 3C F4/80﹢CD11b﹢雙陽 M2 型巨噬細胞，圖 3D 鑒定為 CD11c﹣CD206﹢。1.2.3 應(yīng)用 qRT-PCR 方法鑒定 M1 型和 M2 型巨噬細胞處于不同極化狀態(tài)的巨噬細胞能夠產(chǎn)生各自不同的細胞因子譜，以行使不同的生物學(xué)功能。為了觀察應(yīng)用不同的細胞因子誘導(dǎo)不同極化狀態(tài)的巨噬細胞，本研究通過 qRT-PCR 技術(shù)檢測 M1 型巨噬細胞標志物 IL-1β、TNFα、IL-6、iNOS


本文編號：3412334