目的探討不同病理子宮頸組織TP63基因啟動(dòng)子區(qū)的DNA甲基化狀態(tài),TP63、survivin和RUNX2的表達(dá)以及RUNX2在兩組子宮頸組織中TP63基因啟動(dòng)子DNA甲基化特異位點(diǎn)的結(jié)合情況,統(tǒng)計(jì)分析宮頸癌組織中TP63基因啟動(dòng)子DNA甲基化狀態(tài)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。方法選取2015年9月～2018年9月唐山市工人醫(yī)院收治的因?qū)m頸病變及其他良性疾病行手術(shù)治療的標(biāo)本共85例,嚴(yán)格按照標(biāo)本的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行選取,所有標(biāo)本均由實(shí)驗(yàn)人員與醫(yī)院病理科醫(yī)師共同確認(rèn)病理分級(jí)和類型,其中宮頸癌患者40例（CC）和因子宮良性病變行全子宮切除術(shù)的患者45例（Control）宮頸組織。采用全基因組DNA甲基化分析（WGBS）和RNA sequence聯(lián)合篩查CC和年齡相匹配的Control組織（各3例）的DNA甲基化度和m RNA表達(dá);采用亞硫酸氫鹽測(cè)序法（BSP）和實(shí)時(shí)定量PCR（q PCR）方法檢測(cè)TP63基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化和RUNX2、TP63、survivin的m RNA表達(dá);采用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（CHIP）檢測(cè)RUNX2在宮頸組織中與TP63基因啟動(dòng)子的結(jié)合情況,并分析TP63基因... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TP63基因啟動(dòng)子CpG位點(diǎn)甲基化狀態(tài)注：每個(gè)表示20%甲基化，表示未甲基化

-16-330、-505、-535、-688、-888、-892CpG）甲基化率分別為：27.3%、63.2%、66.6%、42.7%、100%、47.7%、71.9%，相應(yīng)的正常宮頸組織中TP63基因啟動(dòng)子區(qū)各位點(diǎn)甲基化率分別為：6.7%、31.2%、27.5%、25.7%、48.8%、31.4%、22.6%，其中-688CpG位點(diǎn)甲基化率最高，見(jiàn)圖3。圖3TP63基因啟動(dòng)子CpG位點(diǎn)甲基化狀態(tài)注：每個(gè)表示20%甲基化，表示未甲基化。1.4.3人宮頸組織的RNA-seq檢測(cè)及qPCR驗(yàn)證RNA-seq結(jié)果分層聚類分析顯示，與Control相比，在宮頸鱗癌（CC）中RUNX2、survivin表達(dá)上調(diào)，而TP63基因表達(dá)下調(diào)，不同顏色表示基因表達(dá)水平的差異，顏色深淺表示基因表達(dá)的強(qiáng)度。采用qPCR方法對(duì)芯片檢測(cè)結(jié)果中的2個(gè)上調(diào)基因、1個(gè)下調(diào)基因進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示，與Control相比，在CC組織中survivin（2.86±0.44）和RUNX2（2.68±0.32）的mRNA表達(dá)均顯著上調(diào)；而TP63（0.45±0.12）mRNA表達(dá)均顯著下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。圖4宮頸組織基因芯片測(cè)序及qPCR驗(yàn)證結(jié)果注：Control表示正常宮頸組織，CC表示宮頸鱗癌組織，*表示與Control組比較P<0.05。

-17-1.4.4BSP法檢測(cè)宮頸組織中TP63基因的DNA甲基化度BSP檢測(cè)結(jié)果顯示，CC組織和Control組織中TP63各位點(diǎn)（-319、-330、-505、-535、-688、-888、-892CpG）的甲基化率檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4，其中-688CpG位點(diǎn)在兩組中DNA甲基化水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示CC組織中TP63基因啟動(dòng)子區(qū)-688CpG位點(diǎn)發(fā)生高度甲基化。表4兩組宮頸組織中TP63基因啟動(dòng)子甲基化率的比較組別N-319(n,%)-330(n,%)-505(n,%)-535(n,%)-688(n,%)-888(n,%)-892(n,%)Control4512（26.7）11（24.4）11（24.4）11（24.4）14（31.1）10（22.2）10（22.2）CC4017（42.5）19（47.5）18（45）18（45）31（77.5）22（55）19（47.5）Χ2值0.7401.7441.3951.3954.8103.5632.258P值0.3900.1870.2380.2380.0280.0590.1331.4.5TP63基因啟動(dòng)子區(qū)生物信息學(xué)分析通過(guò)在線軟件TFSEARCH發(fā)現(xiàn)TP63基因啟動(dòng)子區(qū)可能包含4個(gè)RUNX2轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合域（RUNX2結(jié)合序列為T(mén)GTGGTT），其中-688CpG位點(diǎn)甲基化與RUNX2結(jié)合序列重合，提示該位點(diǎn)DNA甲基化可能影響RUNX2介導(dǎo)的TP63基因的表達(dá)（見(jiàn)圖5）。圖5TP63基因啟動(dòng)子區(qū)與轉(zhuǎn)錄因子RUNX2結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)

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