目的:本課題選擇2014年1月～2019年6月在我院進行產(chǎn)前篩查的15992例妊娠孕婦、其中診斷為孕染色體非整倍體胎兒的孕婦58例為研究對象,采用血清學(xué)三聯(lián)指標(biāo)、染色體核型分析、熒光原位雜交技術(shù)、解整合素金屬蛋白酶12（ADAM12）聯(lián)合檢測技術(shù),以期優(yōu)化血清學(xué)篩查模式,提高血清學(xué)產(chǎn)前篩查的檢出率,降低假陰性率,為孕中期染色體非整倍體聯(lián)合篩查的臨床推廣應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法:（1）應(yīng)用時間分辨免疫熒光分析（TRFIA）測定孕14⁺⁰～20⁺⁶周的孕婦血清中甲胎蛋白（AFP）、游離人絨毛膜促性腺激素β亞基（freeβ-hCG）、游離雌三醇（uE₃）濃度水平,應(yīng)用Lifecycle 4.0軟件進行風(fēng)險評估;根據(jù)篩查風(fēng)險情況及患者自愿原則,行羊水細胞染色體核型分析和（或）羊水間期細胞熒光原位雜交技術(shù)進行產(chǎn)前診斷。通過妊娠結(jié)局,評價血清學(xué)三聯(lián)在染色體非整倍體篩查中的檢出效率;通過比較染色體核型分析與熒光原位雜交結(jié)果,證實兩種產(chǎn)前診斷方式在產(chǎn)前篩查高危人群中的臨床應(yīng)用價值。（2）收集2014年1月～2019年6月孕周為15+0～2... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1兩種ADAM12亞型結(jié)構(gòu)示意圖

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文7ThermoBrite原位雜交儀（美國雅培）熒光顯微鏡（奧林巴斯BX51）2方法2.1血清學(xué)三聯(lián)指標(biāo)檢測2.1.1標(biāo)本采集抽取孕婦空腹靜脈血3ml于自凝管內(nèi)，置室溫30分鐘左右，3000rpm離心10分鐘分離血清，吸取血清置于微量離心管（吸取血清過程中需注意吸其上清液，防止吸到中間部分的白細胞）。采集的標(biāo)本置于-4℃保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。溶血和脂血標(biāo)本均需重新采血。2.1.2測定方法采用全自動時間分辨熒光免疫分析儀一周內(nèi)檢測孕婦血清中AFP、freeβ-hCG、uE3水平，檢測結(jié)果采用Lifecycle4.0軟件結(jié)合孕婦年齡、體重、孕周等因素計算得出中位數(shù)倍數(shù)（MoM），對21-三體綜合征、18-三體綜合征和開放性神經(jīng)管缺陷（ONTD）進行風(fēng)險評估。檢測完成后，標(biāo)本置于-80℃保存。2.1.3檢測原理及步驟2.1.3.1檢測原理（TRFIA）圖2AFP、freeβ-hCG檢測原理示意圖（直接雙抗體夾心法）Fig.2SchematicdiagramofAFPandfreeβ-hCGdetection(directdoubleantibodysandwichmethod)

第一部分孕中期血清學(xué)三聯(lián)在染色體非整倍體篩查中的應(yīng)用研究8圖3uE3檢測原理示意圖（固相時間分辨熒光免疫法）Fig.3SchematicdiagramofuE3detectionprinciple(solid-phasetime-resolvedfluorescenceimmunoassay)2.1.3.2操作步驟a標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品復(fù)溶b配制微孔板、樣本處理器洗液c標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)d上機測定2.1.4判斷標(biāo)準(zhǔn)正常范圍：AFP：0.7～2.5MoM，freeβ-hCG：0.4～2.5MoM，uE3：0.5～2.0MoM。高風(fēng)險臨界值(cut-off值)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)：21-三體風(fēng)險值≥1/270為高風(fēng)險；18-三體風(fēng)險值≥1/350為高風(fēng)險；ONTD高風(fēng)險為AFPMoM值≥2.5。高風(fēng)險者建議進一步進行羊膜腔穿刺取羊水，進行羊水細胞培養(yǎng)染色體核型分析和（或）熒光原位雜交檢測以明確診斷胎兒是否存在染色體異常。ONTD高風(fēng)險者定期進行多普勒超聲監(jiān)測。2.2羊水細胞培養(yǎng)2.2.1細胞培養(yǎng)在多普勒超聲引導(dǎo)下經(jīng)腹膜壁行羊膜腔穿刺抽取孕婦羊水25～30ml(棄去最初2ml，以防混有母源細胞)，5ml羊水置于無菌離心管中進行FISH檢測，其余注入離心管中做羊水培養(yǎng)，離心后棄去上層清液，取下層懸濁液接種于羊水培養(yǎng)瓶。加入培養(yǎng)液置于37℃5%二氧化碳培養(yǎng)箱培育7d。換液，倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長情況，至貼壁細胞生長旺盛即可收獲。2.2.2細胞收獲、染色體制片低滲、預(yù)固定、固定、制片、G顯帶、染色。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]熒光原位雜交技術(shù)在產(chǎn)前診斷染色體嵌合體中的應(yīng)用價值[J]. 李顯箏,許玲,胡晶晶,黎鳳珍,蔡嬋慧.  國際生殖健康/計劃生育雜志. 2020(02)
[2]孕中期NIPT聯(lián)合血清AFP、free β-hCG及uE3檢測在唐氏綜合征篩查的臨床價值[J]. 陳志美,杜珍,王定珺.  中國婦產(chǎn)科臨床雜志. 2020(01)
[3]2023例遺傳咨詢者染色體核型遺傳效應(yīng)分析[J]. 王芳,劉曉丹.  中國性科學(xué). 2020(01)
[4]胎兒染色體異常類型與不同種類數(shù)量產(chǎn)前診斷指征及孕婦妊娠結(jié)局研究[J]. 龐霞,白艷霞.  山西醫(yī)藥雜志. 2019(24)
[5]11468例孕婦妊娠中期血清學(xué)產(chǎn)前篩查分析[J]. 鄭尾珍,陳小婷.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2019(24)
[6]血清生化標(biāo)志物聯(lián)合超聲用于唐氏綜合征產(chǎn)前篩查的價值[J]. 周平安,石秀英,刁杰,張小斌,閆娟.  中國計劃生育學(xué)雜志. 2019(12)
[7]孕中期血清學(xué)指標(biāo)產(chǎn)前篩查對胎兒染色體異常及妊娠結(jié)局的指導(dǎo)意義[J]. 周偉麗,柴霖,耿淑敏.  中國婦幼保健. 2019(19)
[8]兩種唐氏綜合征產(chǎn)前篩查方法的效果比較分析[J]. 盛蘭曦,滕彥玲.  當(dāng)代醫(yī)學(xué). 2019(24)
[9]產(chǎn)前無創(chuàng)篩查與唐氏篩查在孕中期臨床應(yīng)用中的總結(jié)分析[J]. 樊華,劉麗,劉爽.  中國婦幼保健. 2019(15)
[10]孕中期血清學(xué)產(chǎn)前篩查在出生缺陷防控中的臨床價值[J]. 童飛,黃衛(wèi)彤,王宗杰.  中國醫(yī)藥導(dǎo)報. 2019(21)

博士論文
[1]蒼柏祛痛膠囊藥效學(xué)研究和質(zhì)量控制體系建立[D]. 吳晶.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018

碩士論文
[1]不同產(chǎn)前篩查方案對胎兒染色體異常檢出效率的比較[D]. 郭穎.蘇州大學(xué) 2019
[2]ADAM12、Perilipin及Chemerin與妊娠期糖尿病的相關(guān)性研究[D]. 宋亞晶.華北理工大學(xué) 2018
[3]稽留流產(chǎn)患者與正常早孕ADAM12、IGF-Ⅱ的對比研究[D]. 張杰.山西醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號：3374515