目的:在課題組前期研究的基礎上繼續(xù)探討沉默hnRNP A2/B1基因后對人宮頸癌Hela及CaSki細胞中PI3K/AKT通路中相關蛋白及裸鼠移植瘤生長的影響。方法:慢病毒載體介導shRNA沉默宮頸癌細胞中的hnRNP A2/B1基因的細胞株由課題組前期制備;Western blot實驗用來檢測PI3K、AKT、p-AKT、p21、p27、caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白的表達。MTT和劃痕實驗用來評估各組細胞在加入通路抑制劑LY294002和激活劑IGF-1后的變化。運用Hela細胞來建立裸鼠移植瘤模型,免疫組化法檢測移植瘤組織中PCNA和Ki-67的表達,蘇木精伊紅染色（H&E）驗證腫瘤細胞形態(tài)。結果:細胞水平及裸鼠移植瘤中Western blot結果均顯示hnRNP A2/B1的沉默組中PI3K/AKT信號通路中的相關蛋白p21、p27和cleaved caspase-3的表達明顯上調,且p-AKT的表達均降低（P<0.05）。MTT和劃痕實驗顯示各組細胞中的PI3K/AKT信號通路均可分別被LY294002和IGF-1抑制及激活。免疫組化... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

westernblot驗證課題組前期hnRNPA2/B1沉默效果

圖 2-2 western blot 檢測各組 PI3K/AKT 信號通路中的相關分子的表達水平與對照組相比較，*P<0.05Fig.2-2 The expression of related molecules in PI3K / AKT signaling pathwayCompared to the control group，*P<0.052.3 運用 IGF-1 及 LY294002 激活或抑制 PI3K/AKT 通路后對各組細胞的影響通過上述 western blot 實驗已經證實在沉默 hnRNP A2/B1 后宮頸癌細胞中的PI3K/AKT 信號轉到通路中的部分相關分子發(fā)生改變，為了進一步論證 hnRNPA2/B1 在宮頸癌細胞中與 PI3K/AKT 的作用關系，分別運用 PI3K/AKT 通路的激活劑 IGF-1 和抑制劑 LY294002 在激活和關閉通路后進行后續(xù)實驗。MTT 結果顯示，在運用 IGF-1 將 PI3K/AKT 通路激活后，Hela 及 CaSki 細胞的 hnRNP A2/B1 沉默組的增殖率相較之前被部分逆轉，細胞增殖率明顯增加(P<0.05)，而運用 LY294002 將 PI3K/AKT 通路關閉后，Hela 及 CaSki 細胞的正

15圖 2-3 MTT 檢測運用通路激活劑或抑制劑后各組細胞的增殖情況與對照組相比，*P<0.05；**P<0.01Fig.2-3 The proliferation of cells in each group after inhibition or activation of PI3K/AKT pathway by MTT assayCompared to the control group, *P<0.05; **P<0.01

【參考文獻】：
期刊論文
[1]HnRNPA2/B1shRNA慢病毒載體感染Hela細胞的穩(wěn)定株篩選[J]. 劉瑤,石祥,方文.  貴州醫(yī)科大學學報. 2016(06)
[2]人hnRNPA2/B1shRNA慢病毒載體的構建[J]. 劉瑤,石祥,方文.  貴州醫(yī)科大學學報. 2016(06)
[3]下調hnRNP A2/B1基因表達對骨肉瘤MG-63細胞生長的影響及其機制[J]. 陳倩竹,馬磊,陳歡,蔣電明,李龍江.  腫瘤. 2015(12)
[4]The PI3K/AKT Pathway and Renal Cell Carcinoma[J]. Huifang Guo,Peter German,Shanshan Bai,Sean Barnes,Wei Guo,Xiangjie Qi,Hongxiang Lou,Jiyong Liang,Eric Jonasch,Gordon B.Mills,Zhiyong Ding.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(07)
[5]Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[6]The PI3K/Akt/m TOR pathway in ovarian cancer: therapeutic opportunities and challenges[J]. Bianca Cheaib,Aurélie Auguste,Alexandra Leary.  Chinese Journal of Cancer. 2015(01)
[7]分子靶向藥物PI3K抑制劑的研究進展[J]. 金美花,孔德新.  藥品評價. 2012(05)



本文編號：3369797