目的:在課題組前期研究的基礎(chǔ)上繼續(xù)探討沉默hnRNP A2/B1基因后對(duì)人宮頸癌Hela及CaSki細(xì)胞中PI3K/AKT通路中相關(guān)蛋白及裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響。方法:慢病毒載體介導(dǎo)shRNA沉默宮頸癌細(xì)胞中的hnRNP A2/B1基因的細(xì)胞株由課題組前期制備;Western blot實(shí)驗(yàn)用來(lái)檢測(cè)PI3K、AKT、p-AKT、p21、p27、caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)。MTT和劃痕實(shí)驗(yàn)用來(lái)評(píng)估各組細(xì)胞在加入通路抑制劑LY294002和激活劑IGF-1后的變化。運(yùn)用Hela細(xì)胞來(lái)建立裸鼠移植瘤模型,免疫組化法檢測(cè)移植瘤組織中PCNA和Ki-67的表達(dá),蘇木精伊紅染色（H&E）驗(yàn)證腫瘤細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果:細(xì)胞水平及裸鼠移植瘤中Western blot結(jié)果均顯示hnRNP A2/B1的沉默組中PI3K/AKT信號(hào)通路中的相關(guān)蛋白p21、p27和cleaved caspase-3的表達(dá)明顯上調(diào),且p-AKT的表達(dá)均降低（P<0.05）。MTT和劃痕實(shí)驗(yàn)顯示各組細(xì)胞中的PI3K/AKT信號(hào)通路均可分別被LY294002和IGF-1抑制及激活。免疫組化... 

【文章來(lái)源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

westernblot驗(yàn)證課題組前期hnRNPA2/B1沉默效果

圖 2-2 western blot 檢測(cè)各組 PI3K/AKT 信號(hào)通路中的相關(guān)分子的表達(dá)水平與對(duì)照組相比較，*P<0.05Fig.2-2 The expression of related molecules in PI3K / AKT signaling pathwayCompared to the control group，*P<0.052.3 運(yùn)用 IGF-1 及 LY294002 激活或抑制 PI3K/AKT 通路后對(duì)各組細(xì)胞的影響通過(guò)上述 western blot 實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)在沉默 hnRNP A2/B1 后宮頸癌細(xì)胞中的PI3K/AKT 信號(hào)轉(zhuǎn)到通路中的部分相關(guān)分子發(fā)生改變，為了進(jìn)一步論證 hnRNPA2/B1 在宮頸癌細(xì)胞中與 PI3K/AKT 的作用關(guān)系，分別運(yùn)用 PI3K/AKT 通路的激活劑 IGF-1 和抑制劑 LY294002 在激活和關(guān)閉通路后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。MTT 結(jié)果顯示，在運(yùn)用 IGF-1 將 PI3K/AKT 通路激活后，Hela 及 CaSki 細(xì)胞的 hnRNP A2/B1 沉默組的增殖率相較之前被部分逆轉(zhuǎn)，細(xì)胞增殖率明顯增加(P<0.05)，而運(yùn)用 LY294002 將 PI3K/AKT 通路關(guān)閉后，Hela 及 CaSki 細(xì)胞的正

15圖 2-3 MTT 檢測(cè)運(yùn)用通路激活劑或抑制劑后各組細(xì)胞的增殖情況與對(duì)照組相比，*P<0.05；**P<0.01Fig.2-3 The proliferation of cells in each group after inhibition or activation of PI3K/AKT pathway by MTT assayCompared to the control group, *P<0.05; **P<0.01

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3369797