本文關(guān)鍵詞：雌激素結(jié)合不同受體差異性調(diào)控SK0V-3內(nèi)Sema4D的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]探討在人卵巢漿液性乳頭狀腺癌細胞株SKOV-3中,雌激素通過結(jié)合不同的雌激素受體,差異性調(diào)控Sema4D的表達。[方法]1、構(gòu)建ERα及ER β高表達載體,培養(yǎng)SKOV-3細胞株。將培養(yǎng)好的細胞分為a、b、c三組。a組將ERα過表達載體通過慢病毒感染SKOV-3細胞；b組將ER β過表達載體通過慢病毒感染SKOV-3細胞；c組將未處理的SKOV-3細胞作為對照組。2、慢病毒感染SKOV-3細胞24小時,RT-PCR及Western Blot檢測a、b、c三組細胞感染前后ERα、ER βmRNA及蛋白的表達水平。3、慢病毒感染SKOV-3細胞24小時后,Western Blot檢測三組細胞Sema4D蛋白的表達水平。4、10-6 mol/L的17-β雌二醇刺激各組細胞24h后,RT-PCR及Western Blot檢測a、b、c三組細胞內(nèi)Sema4D mRNA及蛋白的表達水平。5、先添加100nM的雌激素受體拮抗劑(ICI182,780)處理各組細胞6小時后再添加10-6 mol/L的17-β雌二醇處理12小時,RT-PCR及WesternBlot檢測三組細胞內(nèi)Sema4D mRNA及蛋白表達水平。[結(jié)果]1、慢病毒感染SKOV-3細胞24小時后,RT-PCR檢測a組細胞ER αmRNA 2-AACt為100.99±5.80較c組9.75±1.01明顯升高(P0.01),b組為8.47±0.74,較c組無明顯差異(P0.05)。a組ER βRNA 2-△△Cτ為58.45±2.95較c組59.64±4.20無明顯差異(P0.05),b組為292.05±12.27,較c組明顯升高(P0.01)。2、Western Blot a組細胞ER α/β-actin為100.99±5.80較C組9.75±1.01明顯升高(P0.01),b組為8.47±0.74,較c組無明顯差異(P0.05)。a組ERβ/β-actin為58.45±2.95較c組59.64±4.20無明顯差異(P0.05),b組為292.05±12.27,較c組明顯升高(P0.01)。3、Western Blot檢測慢病毒感染細胞24h后,各組細胞內(nèi)Sema4D的表達水平,Sema4D/β-actin分別為0.22±0.02,0.28±0.05,0.26±0.04,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)4、RT-PCR檢鋇10-6 mol/L 17-β雌二醇刺激c三組細胞24小時后,a組Sema4DmRNA 2-△△Cτ值為21.280±0.745,較c組13.556±2.181明顯升高(P0.01),b組為0.000548±0.00009,較c組明顯降低(P0.01)。5、Western Blot檢測10-6 mol/L 17-β雌二醇刺激三組細胞24小時后,a組細胞內(nèi)Sema4D/β-actin為0.530±0.085,較c組0.263±0.042明顯升高(P0.01),b組內(nèi)Sema4D/β-actin為0.140±0.046,較c組明顯降低(P0.01)。6、RT-PCR及檢測(ICI180,782)處理各組細胞后,a、b、c三組細胞內(nèi)Sema4D mRNA 2-△△Cτ值分別為11.556±2.181,9.548±0.009,10.210±0.632三組對比無明顯差異(P0.05)。7、Western Blot檢測(ICI180,782)處理各組細胞后a、b、c三組細胞內(nèi)Sema4D/β-actin值分別為0.303±0.083,0.257±0.061,0.298±0.042,三組對比無明顯差異(P0.05)[結(jié)論]1、通過慢病毒介導ERα及ERβ過表達載體后感染SKOV-3細胞的方法,我們成功建立了高表達ER α及ER β的卵巢癌細胞株,為后續(xù)的研究奠定了基礎(chǔ)。2、無雌激素作用時,慢病毒介導過表達載體感染目的細胞不影響Sema4D的表達。3、細胞內(nèi)高表達ERα,雌激素能夠促進細胞內(nèi)Sema4DmRNA及蛋白的表達。4、細胞內(nèi)高表達ER β,雌激素能夠抑制細胞內(nèi)Sema4DmRNA及蛋白的表達。5、雌激素受體拮抗劑能夠抑制雌激素對Sema4D的調(diào)控作用,證明雌激素對Sema4D的差異性調(diào)控是由不同的雌激素受體介導的。6、以上結(jié)論證實雌激素通過結(jié)合不同受體能差異性調(diào)控卵巢癌細胞內(nèi)靶基因Sema4D的表達。也許能為尋找卵巢癌的發(fā)病機制提供新的理論依據(jù),也可能為卵巢癌的靶向治療提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：雌激素 雌激素受體α 雌激素受體β 卵巢癌 軸突導向蛋白4D
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中英文術(shù)語對照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-39
• 綜述39-48
• 參考文獻44-48
• 碩士期間發(fā)表的文章48-49
• 致謝49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 吳成,廖秦平;雌激素受體亞型mRNA在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達[J];中國婦產(chǎn)科臨床;2003年03期

2 郭瑞霞,魏麗惠,王建六;17β-雌二醇對子宮內(nèi)膜癌細胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信號傳導通路的活化[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2005年04期

3 許志鋒;李敬來;韓振;馮鋼;任明明;;陽離子脂質(zhì)體介導增強型綠色熒光蛋白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染骨骼肌衛(wèi)星細胞[J];中國組織工程研究;2013年46期

  本文關(guān)鍵詞：雌激素結(jié)合不同受體差異性調(diào)控SK0V-3內(nèi)Sema4D的表達，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335740