目的觀察巨噬細(xì)胞移動抑制因子（MIF）及其受體CD74對宮頸鱗癌細(xì)胞株SiHa增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響。方法培養(yǎng)人宮頸癌SiHa細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞中MIF及CD74蛋白的表達(dá)情況;應(yīng)用外源性人重組MIF（rhMIF）、抗-CD74單抗處理細(xì)胞,分別采用CCK-8法、細(xì)胞劃痕實驗及Transwell小室法觀察MIF及CD74對癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲力的改變。結(jié)果免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示MIF及CD74蛋白均可在SiHa細(xì)胞中表達(dá);rhMIF處理后細(xì)胞增殖力加強(qiáng)、呈時間-劑量依賴性,且細(xì)胞的體外遷移及侵襲力明顯提升（P<0.05）;當(dāng)用抗CD74單抗預(yù)處理細(xì)胞后,可抑制MIF的促宮頸癌細(xì)胞惡性增殖作用,但對細(xì)胞的遷移及侵襲能力無明顯影響。結(jié)論MIF具有調(diào)控SiHa細(xì)胞增殖、遷移及侵襲等生物學(xué)行為的作用,其中CD74介導(dǎo)MIF促進(jìn)了癌細(xì)胞的惡性增殖力,提示兩者在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 

【文章來源】：中國實驗診斷學(xué). 2020,24(10)

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【部分圖文】：

MIF及CD74在SiHa細(xì)胞中的表達(dá)（×400)

為明確CD74是否參與MIF對宮頸癌細(xì)胞的增殖調(diào)控過程，我們進(jìn)行了分組實驗，結(jié)果表明（如圖2B），與單純MIF刺激組相比，抗-CD74mAb預(yù)先處理的細(xì)胞，其增殖受抑制，提示CD74參與MIF對細(xì)胞增殖的調(diào)控。2.3 MIF對SiHa細(xì)胞遷移力的影響

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是多步驟、多因素參與的復(fù)雜過程，涉及細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、無限增殖、細(xì)胞間粘附力下降及浸潤周圍組織或進(jìn)入脈管系統(tǒng)，形成浸潤轉(zhuǎn)移灶。因此，探尋這個復(fù)雜過程中的相關(guān)調(diào)控因素，對于阻斷宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，從而改善患者的預(yù)后具有重要的臨床意義。MIF最初是在活化的T淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，具有酶活性、參與淋巴免疫、內(nèi)分泌調(diào)控及促炎作用等多種生物學(xué)功能，單核/巨噬細(xì)胞是其主要來源。Meyer-Siegle等[6]在對前列腺癌原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行基因差異表達(dá)分析時發(fā)現(xiàn)MIF在轉(zhuǎn)移灶內(nèi)表達(dá)上調(diào)，這是關(guān)于MIF與腫瘤間存在關(guān)聯(lián)的首次報道。此后，研究者們發(fā)現(xiàn)MIF的其他生物學(xué)功能，如促增殖分化、調(diào)控血管生成、抑制p53基因等，由此，MIF與腫瘤關(guān)系的研究日益增多。近年研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤中觀察到MIF的過度表達(dá)，如前列腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等[3,7,8]，提示其參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。CD74作為MIF高親和力受體，隨著對MIF研究的逐漸深入，CD74的功能也備受關(guān)注，除在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用，亦在多種癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)CD74的過表達(dá)[9,10],Nagata等[11]研究發(fā)現(xiàn)CD74是評價胰腺癌患者預(yù)后的一個有用的指標(biāo)。McClelland等[12]對肺癌的研究發(fā)現(xiàn)，MIF和CD74的表達(dá)與血管趨化因子的表達(dá)及MVD呈正相關(guān)，MIF所誘導(dǎo)的CXC的表達(dá)可被抗CD74抗體所阻斷；在結(jié)腸癌中亦發(fā)現(xiàn)了MIF/CD74的共同作用[13]。而有關(guān)MIF及CD74在宮頸癌中的研究報道很少，我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)了宮頸癌組織中兩者的過度表達(dá)，MIF可通過調(diào)控促血管生成因子的表達(dá)，促進(jìn)惡性腫瘤的血管新生，對腫瘤的生長及侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)揮作用。那么，兩者是否對宮頸癌的增殖、遷移及侵襲等生物特性有調(diào)節(jié)作用，成為我們的研究目標(biāo)。在本文中，我們采用一系列實驗評價MIF及其受體CD74對宮頸癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響，探索其參與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制。本研究應(yīng)用rhMIF處理宮頸癌SiHa細(xì)胞，結(jié)果顯示MIF可促進(jìn)細(xì)胞增殖，且呈時間-劑量依賴性，這與其他研究結(jié)果一致[14]。當(dāng)抗CD74單抗處理細(xì)胞后，可顯著抑制MIF對細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用，表明兩者共同參與調(diào)控宮頸鱗癌細(xì)胞的增殖能力。細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜的降解是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的必要步驟，Koh等[7]通過傷口愈合實驗發(fā)現(xiàn)，MIF基因敲除可導(dǎo)致癌細(xì)胞遷移減少，提示MIF與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)。本實驗通過細(xì)胞劃痕法及transwell小室法分別檢測MIF對SiHa細(xì)胞遷移力及侵襲力的影響，結(jié)果顯示200ng/ml rhMIF可顯著促進(jìn)SiHa細(xì)胞遷移及侵襲力，與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義；但細(xì)胞經(jīng)CD74單抗預(yù)處理后，沒能阻斷或抑制MIF促癌細(xì)胞的遷移侵襲力，提示MIF可能通過其他受體作用途徑來調(diào)控其促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移力。以上結(jié)果證明MIF調(diào)控了宮頸癌的增殖，遷移及侵襲等生物學(xué)行為，CD74參與了MIF對細(xì)胞增殖的調(diào)控作用，從而在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用，而此過程中涉及具體的分子機(jī)制是我們將來進(jìn)一步的研究方向。期望能為尋求宮頸癌的治療新靶點(diǎn)提供思路，從而提高病人的生存率。


本文編號：3333707