背景：子宮內(nèi)膜的修復(fù)、再生與子宮內(nèi)膜干細(xì)胞（hESC）有關(guān)，以維持其月經(jīng)和孕育受精卵的功能。臨床上有些疾病也可能與子宮內(nèi)膜干細(xì)胞有關(guān)，如子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）。有學(xué)者提出了EMS的干細(xì)胞起源學(xué)說，認(rèn)為經(jīng)血倒流將子宮內(nèi)膜干細(xì)胞輸送到子宮腔以外的地方，這些種子在適宜的微環(huán)境下發(fā)生粘附、增殖、浸潤生長形成病灶。雖然有學(xué)者采用裸鼠進(jìn)行人EMS模型的建立，但由于其免疫功能缺陷,而缺乏代表性。目的：本實(shí)驗(yàn)將初步分離人子宮內(nèi)膜細(xì)胞（hEC），并利用人子宮內(nèi)膜細(xì)胞移植于ICR小鼠的一側(cè)子宮漿膜受損區(qū)，觀察異種移植是否有病灶形成。方法:差速貼壁法和二次篩網(wǎng)法分離子宮內(nèi)膜上皮和基質(zhì)細(xì)胞，并分別進(jìn)行低密度和挑克隆傳代培養(yǎng)，并用流式細(xì)胞儀、免疫組化進(jìn)行鑒定。將分離的hEC移植在ICR小鼠一側(cè)子宮的漿膜損傷區(qū)，對側(cè)子宮作為對照，實(shí)驗(yàn)分三組：第一組移植混合傳代培養(yǎng)的hEC；第二組移植新鮮消化分離的hEC；第三組移植機(jī)械分離至0.5-1mm3大小的新鮮子宮內(nèi)膜微組織。各組分別在2W、3W、4W處死小鼠。HE染色、免疫組化抗人ERα和CK鑒定，觀察hESC在子宮漿膜受損區(qū)的定植和局部反應(yīng)情況。結(jié)果：①差速貼壁和二次... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

lower細(xì)胞10x

二次篩網(wǎng)法可以將細(xì)胞初步分成上下兩部分，濾下去的那部分細(xì)胞（簡lower）幾乎都是單細(xì)胞，伴少許細(xì)胞微團(tuán)，細(xì)胞貼壁后大多呈梭形，排列呈放射狀或漩渦狀，生長速度快，24h 增殖一次，細(xì)胞微團(tuán)，貼壁后，未見增殖象，隨時(shí)間的延長，1w 后開始凋亡（圖 1 為 lower 細(xì)胞）。上面那部分細(xì)（簡稱 upper）幾乎都是細(xì)胞團(tuán)，貼壁后，細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞不增殖，部分細(xì)胞 1w后慢慢凋亡（圖 2為 upper 細(xì)胞）。

有的克隆呈梭形（圖3），有的呈橢圓形（圖 4）。對大克隆進(jìn)行挑取轉(zhuǎn)移至 6 孔板培養(yǎng)，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，但有橢圓形細(xì)胞克隆傳至 P6 細(xì)胞狀態(tài)就不好，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡，細(xì)胞輪廓變得模糊，大而扁平（圖 5）。梭形細(xì)胞克隆傳至 P9 也出現(xiàn)上述情況（圖 6）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]胚胎干細(xì)胞移植于內(nèi)膜損傷小鼠的初步研究[J]. 王燕華,曲軍英,呂一帆,江一平.  國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志. 2012(06)
[2]肥大細(xì)胞及其配體干細(xì)胞因子與EMs研究進(jìn)展[J]. 鄒倩,濮德敏.  國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊. 2006(03)
[3]人子宮內(nèi)膜碎屑注入小鼠腹腔后種植情況的連續(xù)觀察[J]. 欒英姿,湯春生,郎景和.  現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展. 2002(02)
[4]子宮內(nèi)膜腺上皮及基質(zhì)細(xì)胞分離、培養(yǎng)作為子宮內(nèi)膜異位癥體外細(xì)胞模型的探索[J]. 譚先杰,劉東遠(yuǎn),郎景和,沈鏗,冷金花,孫大為,朱蘭,劉珠鳳,許秀英.  現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展. 2002(01)

博士論文
[1]子宮內(nèi)膜異位癥體外細(xì)胞共培養(yǎng)模型的建立及細(xì)胞遷移和侵襲的研究[D]. 董喆.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3332526