目的:通過(guò)檢測(cè)卵巢癌SKOV3細(xì)胞株和卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞株mi R-1271的表達(dá)情況,研究mi R-1271在卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞順鉑耐藥形成中的作用。方法:1.采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞mi R-1271的表達(dá)。2.MTT法檢測(cè)在耐藥細(xì)胞株中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-1271模擬物后卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的IC50。3.運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-1271模擬物后SKOV3/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑誘導(dǎo)的凋亡。4.構(gòu)建XIAP-3’-UTR熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒驗(yàn)證mi R-1271的靶基因。5.采用Western blot檢測(cè)卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞和母代SKOV3細(xì)胞中抗凋亡蛋白XIAP表達(dá)。檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-1271模擬物后卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞中XIAP的表達(dá)。結(jié)果:1.mi R-1271在卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞中呈低表達(dá)。與母代卵巢癌SKOV3細(xì)胞比較,卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞中mi R-1271的表達(dá)明顯降低（P<0.01）,下調(diào)倍數(shù)為4.7±0.3。2.在耐藥株中上調(diào)mi R-1271后顯著增加... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 引言
第二章 研究?jī)?nèi)容
    2.1 研究目的和意義
    2.2 研究方法、思路
        2.2.1 研究方法
        2.2.2 研究思路
    2.3 技術(shù)路線
        2.3.1 miR-1271 在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞株之間差異表達(dá)的研究
        2.3.2 miR-1271 對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐藥表型的影響
        2.3.3 miR-1271 調(diào)控卵巢癌細(xì)胞耐藥表型的分子機(jī)制研究
第三章 miR-1271 在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞株之間差異表達(dá)的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 引物
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 主要溶液的配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
        3.2.2 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
        3.2.3 細(xì)胞總RNA提取
        3.2.4 RNA濃度測(cè)定
        3.2.5 miRNA的逆轉(zhuǎn)錄
        3.2.6 Real-time PCR擴(kuò)增
        3.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞和卵巢癌SKOV3中miR-1271 的表達(dá)差異
    3.4 討論
第四章 miR-1271 對(duì)卵巢癌細(xì)胞耐藥表型的影響的研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        4.1.1 細(xì)胞株
        4.1.2 寡核苷酸模擬物及對(duì)照序列
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.2 體外藥物敏感性實(shí)驗(yàn)（MTT）
        4.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)耐藥細(xì)胞的凋亡
        4.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 上調(diào)miR-1271 對(duì)SKOV3/DDP耐藥性的影響
        4.3.2 上調(diào)miR-1271 對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞凋亡的影響
    4.4 討論
第五章 miR-1271 調(diào)控卵巢癌細(xì)胞耐藥表型的分子機(jī)制研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.1.1 細(xì)胞株
        5.1.2 寡核苷酸模擬物及對(duì)照序列
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要儀器
        5.1.5 各種溶液的配置
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 miR-1271 調(diào)控卵巢癌耐藥相關(guān)靶基因的預(yù)測(cè)
        5.2.2 熒光素酶實(shí)驗(yàn)
        5.2.3 總蛋白提取
        5.2.4 免疫印跡（Western blot）
        5.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 上調(diào)miR-1271 對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞熒光素酶質(zhì)�；钚缘挠绊�
        5.3.2 抗凋亡蛋白XIAP在卵巢癌SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)
        5.3.3 上調(diào)miR-1271 對(duì)抗凋亡蛋白XIAP表達(dá)水平的影響
    5.4 討論
第六章 主要結(jié)論和展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
綜述 miRNA與卵巢癌及卵巢癌耐藥
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文及學(xué)術(shù)交流


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA: a new and promising potential biomarker for diagnosis and prognosis of ovarian cancer[J]. Manish K.Pal,Shyam P.Jaiswar,Vinaya N.Dwivedi,Amit K.Tripathi,Ashish Dwivedi,Pushplata Sankhwar.  Cancer Biology & Medicine. 2015(04)



本文編號(hào)：3269046