本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍通過p38MAPK信號(hào)通路抑制ERCC1基因逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞的順鉑耐藥性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景卵巢癌是目前死亡率最高的婦科惡性腫瘤,嚴(yán)重威脅婦女生命和健康,惡性程度高、起病隱匿、發(fā)病晚、易轉(zhuǎn)移、預(yù)后差是卵巢癌的特點(diǎn)。大約70%的患者因?yàn)楦顾�、腹痛等原因就診時(shí)已經(jīng)是晚期(FIGO分級(jí)Ⅲ-Ⅳ期)。腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和以順鉑為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療是晚期卵巢上皮性癌綜合治療的重要手段[1],腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)的目的是最大限度和范圍地切除腫瘤組織,但多年臨床經(jīng)驗(yàn)表明,術(shù)后可能殘留的病灶仍然無法避免,且成為卵巢癌復(fù)發(fā)的重要因素。因此化療的應(yīng)用使卵巢癌的治療效果大為改觀,患者生存質(zhì)量明顯改善,但綜合來看,患者5年內(nèi)的生存率仍徘徊于30~40%,卵巢癌對(duì)化療藥物耐藥是導(dǎo)致患者治療失敗的主要原因。目前卵巢上皮性癌主要采用以順鉑為基礎(chǔ)的化療方案,順鉑通過使腫瘤細(xì)胞形成DNA加合物,造成腫瘤細(xì)胞的DNA損傷,繼而使腫瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制被抑制,細(xì)胞分裂再生停止,最終殺滅腫瘤細(xì)胞。然而,順鉑的療效會(huì)因癌細(xì)胞內(nèi)在或者后天(藥物誘導(dǎo))獲得的耐藥性而減弱。到目前為止,對(duì)順鉑的體內(nèi)耐藥機(jī)制并不完全清楚,但是其中核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repair,NER)途徑對(duì)鉑類藥物形成的DNA加合物的切割修復(fù)在腫瘤對(duì)鉑類藥物的耐藥過程中起著非常重要的作用[2],而在NER途徑中的切除修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白1(excision repair crosscomp lementing p rotein1,ERCC1)是最重要的一個(gè)修復(fù)蛋白。ERCC1在降低腫瘤細(xì)胞對(duì)鉑類化療藥物的一個(gè)可能性是因?yàn)樗軌蚣皶r(shí)地修復(fù)鉑類造成的DNA損傷[3]。沉默或干擾掉ERCC1基因可以增加卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性[4]。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kases,MAPK)信號(hào)通路在多種惡性腫瘤(包括卵巢癌)細(xì)胞的增殖、凋亡和化療藥物作用及化療藥物耐受發(fā)生中起重要作用[5-7],在多數(shù)腫瘤中都存在不正常激活或異常表達(dá)。有研究表明,p38MAPK信號(hào)通路的過度激活能夠?qū)е侣殉舶┑陌l(fā)生和影響其預(yù)后[8]。MAPK信號(hào)通路在非小細(xì)胞癌等多種腫瘤細(xì)胞的ERCC1基因高表達(dá)中起到重要作用[9]。二甲雙胍是一種常規(guī)用于治療2型糖尿病的口服降糖藥[10,11]。最近兩項(xiàng)大型流行病學(xué)調(diào)查研究表明:長期服用二甲雙胍能夠降低卵巢癌的發(fā)病率,而且二甲雙胍能夠顯著延長卵巢癌合并糖尿病患者的無進(jìn)展生存期[12]。在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究中,二甲雙胍能夠抑制包括卵巢癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的生長和發(fā)展[13,14]。特別是二甲雙胍能夠增加非小細(xì)胞癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞等對(duì)化療藥物的敏感性[15],已有報(bào)道稱,二甲雙胍能夠改善乳腺癌化療藥物耐藥的耐藥性,但具體機(jī)制不明[16]。本研究通過CCK-8法檢測(cè)人上皮性卵巢癌細(xì)胞耐藥株細(xì)胞C13K和CP70細(xì)胞的增殖、順鉑耐藥性及二甲雙胍對(duì)其的順鉑耐藥性改變,應(yīng)用si RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)分別抑制耐藥細(xì)胞株中ERCC1、p38MAPK基因的表達(dá),RT-PCR法檢測(cè)應(yīng)用二甲雙胍前后的耐藥細(xì)胞中的ERCC1基因的m RNA的表達(dá)情況,同時(shí)western blot方法檢測(cè)ERCC1、AMPK、p-AMPK、p38MAPK及p-p38MAPK蛋白的表達(dá),探討ERCC1基因?qū)β殉舶┘?xì)胞順鉑耐藥性的影響,以及二甲雙胍應(yīng)用后卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥性的變化情況,試圖進(jìn)一步了解二甲雙胍能否改善順鉑耐藥性,以及以及是否通過調(diào)節(jié)p38MAPK信號(hào)通路降低細(xì)胞中ERCC1基因的表達(dá)從而發(fā)揮作用,以期對(duì)卵巢癌的化學(xué)治療提供新的理論依據(jù)。目的通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(CCK-8)、熒光定量PCR、western blot技術(shù)分析二甲雙胍對(duì)卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株耐藥性的改善,以及通過si RNA轉(zhuǎn)染技術(shù)分別抑制耐藥細(xì)胞中ERCC1和p38MAPK基因的表達(dá),分析二甲雙胍影響卵巢癌以上生物學(xué)行為的分子機(jī)制,為逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥研究以及臨床應(yīng)用提供一個(gè)新的思路。方法1.siRNA轉(zhuǎn)染抑制C13K和CP70細(xì)胞中ERCC1、p38MAPK基因的表達(dá);2.細(xì)胞增殖法(CCK-8)檢測(cè)轉(zhuǎn)染ERCC1si RNA前后耐藥細(xì)胞的順鉑耐藥性的改變、二甲雙胍對(duì)耐藥細(xì)胞順鉑耐藥性的改善;3.應(yīng)用熒光定量PCR(RT-PCR)或/和蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測(cè)二甲雙胍作用前后耐藥細(xì)胞中ERCC1的表達(dá)改變、AMPK信號(hào)通路、p38MAPK信號(hào)通路變化情況;3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:利用SPSS17.0軟件對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次,多組間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,然后組間兩兩比較采用LSD-t法進(jìn)行比較。依P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.二甲雙胍能夠逆轉(zhuǎn)C13K和CP70細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性(P0.05)。2.二甲雙胍作用能夠降低C13K和CP70細(xì)胞中ERCC1 m RNA和蛋白的表達(dá)水平(P0.001),并激活A(yù)MPK信號(hào)通路(P0.01);而聯(lián)合應(yīng)用AMPK信號(hào)通路阻斷劑Compound C可以阻斷二甲雙胍的這種作用(即ERCC1蛋白表達(dá)升高)(P0.001)。3.p38MAPK信號(hào)通路抑制劑SB203580作用耐藥后,細(xì)胞中ERCC1蛋白表達(dá)水平降低(P0.05);而二甲雙胍作用可降低p38MAPK的磷酸化水平(P0.001),抑制p38MAPK信號(hào)通路;二甲雙胍作用轉(zhuǎn)染了p38MAPK si RNA的C13K和CP70細(xì)胞后,ERCC1蛋白的表達(dá)水平無明顯變化(P0.05)。結(jié)論1、ERCC1基因可能參與卵巢癌C13K和CP70細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性形成;2、二甲雙胍能夠逆轉(zhuǎn)C13K和CP70細(xì)胞的順鉑耐藥性;3、二甲雙胍可能通過調(diào)節(jié)AMPK信號(hào)通路、p38MAPK信號(hào)通路調(diào)節(jié)C13K和CP70細(xì)胞的順鉑耐藥性。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 二甲雙胍 順鉑耐藥 ERCC1基因 p38MAPK信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-13
• 引言13-16
• 1 材料和方法16-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 1.1.1 主要試劑16-17
• 1.1.2 主要儀器及耗材17-18
• 1.1.3 研究對(duì)象18
• 1.1.4 試劑配制18-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-29
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19-21
• 1.2.2 CCK-8 法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)21-22
• 1.2.3 siRNA轉(zhuǎn)染22-24
• 1.2.4 熒光定量PCR（qRT-PCR）24-26
• 1.2.5 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blot）26-29
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-31
• 2 結(jié)果31-41
• 3 討論41-47
• 3.1 卵巢癌的化療藥物耐藥相關(guān)機(jī)制41-42
• 3.2 順鉑耐藥相關(guān)的ERCC1 基因42-43
• 3.3 二甲雙胍43-44
• 3.4 與耐藥相關(guān)的P38MAPK信號(hào)通路44-45
• 3.5 逆轉(zhuǎn)耐藥的現(xiàn)狀及展望45-46
• 3.6 總結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述 二甲雙胍的抗腫瘤作用52-65
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 個(gè)人簡歷及發(fā)表論文情況65-66
• 個(gè)人簡歷65
• 發(fā)表論文情況65-66
• 致謝66

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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3 張?bào)鸩?廖虹;楊樹棟;董玲玲;隋龍;豐有吉;;二甲雙胍在腫瘤治療中的機(jī)制研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年17期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 黃為;二甲雙胍對(duì)膽管癌細(xì)胞株RBE的作用及其機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

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4 李偉寧;二甲雙胍對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖信號(hào)通路及豚鼠耳銀屑病模型影響研究[D];山東大學(xué);2014年

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2 劉暢;二甲雙胍對(duì)人乳腺癌MCF-7腫瘤細(xì)胞系SP細(xì)胞的抑制作用[D];中南大學(xué);2011年

3 董玲玲;二甲雙胍增強(qiáng)子宮內(nèi)膜癌化療藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

4 趙瑞杰;紫草素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的初步探討[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

5 朱智峰;二甲雙胍對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW480增殖、周期及凋亡的影響[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2012年

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7 張貝貝;二甲雙胍在卵巢癌細(xì)胞SKOV3體外增殖及凋亡中的作用[D];吉林大學(xué);2013年

8 謝穎;二甲雙胍和甘精胰島素對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株增殖作用的影響及其相關(guān)機(jī)制研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

9 徐學(xué)超;二甲雙胍誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞MKN-45發(fā)生細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究[D];蘭州大學(xué);2014年

10 陳榮川;二甲雙胍聯(lián)合塞來昔布對(duì)肺癌細(xì)胞A549增殖和凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];大理學(xué)院;2014年

  本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍通過p38MAPK信號(hào)通路抑制ERCC1基因逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞的順鉑耐藥性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：323171