第一部分:非編碼RNA在雙酚A致小鼠精母細(xì)胞凋亡中的表達(dá)譜改變【目的】分析非編碼RNA在雙酚A致小鼠精母細(xì)胞凋亡中表達(dá)譜的改變,分析其參與的重要通路和相關(guān)分子,尋找進(jìn)一步研究的靶標(biāo)�！痉椒ā坎捎貌煌瑵舛鹊腂PA對(duì)小鼠精母細(xì)胞系GC-2細(xì)胞進(jìn)行染毒,對(duì)照組為0.1%DMSO溶劑組處理的GC-2細(xì)胞,采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性,探索BPA處理對(duì)GC-2細(xì)胞在半抑制濃度IC50。選擇接近于IC50的120μM濃度對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染毒,檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制能力和凋亡率。對(duì)BPA 120μM處理48 h后以及對(duì)照組的細(xì)胞進(jìn)行收集,提取RNA。將樣品分為三份,分別進(jìn)行circular RNA（circ RNA）,micro RNA（mi RNA）和m RNA測(cè)序,測(cè)序深度為10G。circ RNA、mi RNA和m RNA測(cè)序深度分別為10G、10M和6G。差異表達(dá)的circ RNA母基因的和m RNA的GO和KEGG分析采用R語言的Bioconductor包進(jìn)行分析,并用ggplot包進(jìn)行圖形可視化輸出。差異mi RNA參與生物學(xué)功能和信號(hào)通路分析是基于其... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：221 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同劑量BPA處理下細(xì)胞活性

圖 2. Edu 摻入檢測(cè)細(xì)胞 DNA 復(fù)制活性。a.0 μM 和 120 μM 的 BPA 處理 GC-2 細(xì)胞 48 h 后Edu 增殖實(shí)驗(yàn)；b.定量展示 a 圖 Edu 摻入百分比。實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù) 3 次，數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤展示（***P < 0.0001）。3.1.3 流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè) BPA 染毒后細(xì)胞凋亡情況。采用流式細(xì)胞學(xué)儀以Annexin V-APC/7-AAD試劑盒檢測(cè)為暴露組和120 μM BPA暴露組細(xì)胞的凋亡率，處理組細(xì)胞凋亡率（早期凋亡率 LR% + 晚期凋亡率 UR%）約為 17%左右，較未處理組細(xì)胞凋亡率（7.5%左右）明顯升高（圖 3）（***P < 0.001）。

圖 2. Edu 摻入檢測(cè)細(xì)胞 DNA 復(fù)制活性。a.0 μM 和 120 μM 的 BPA 處理 GC-2 細(xì)胞 48 h 后Edu 增殖實(shí)驗(yàn)；b.定量展示 a 圖 Edu 摻入百分比。實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù) 3 次，數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤展示（***P < 0.0001）。3.1.3 流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè) BPA 染毒后細(xì)胞凋亡情況。采用流式細(xì)胞學(xué)儀以Annexin V-APC/7-AAD試劑盒檢測(cè)為暴露組和120 μM BPA暴露組細(xì)胞的凋亡率，處理組細(xì)胞凋亡率（早期凋亡率 LR% + 晚期凋亡率 UR%）約為 17%左右，較未處理組細(xì)胞凋亡率（7.5%左右）明顯升高（圖 3）（***P < 0.001）。


本文編號(hào)：3226702