本文關(guān)鍵詞：五味子脂A通過抑制ROS增強(qiáng)紫杉醇抑制卵巢癌Skov3細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)背景：卵巢癌的病死率居于婦科惡性腫瘤的首位。因早期癥狀不典型，故在發(fā)現(xiàn)時已處于晚期，導(dǎo)致預(yù)后較差，病死率較高。目前卵巢癌的治療方式主要是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，并在術(shù)后給予輔助化療（紫杉醇+卡鉑方案為主）。但是在臨床應(yīng)用中，化療常常引起不良反應(yīng)及耐藥性，因此，如何減輕藥物的不良反應(yīng)、降低耐藥性的發(fā)生、增強(qiáng)藥物的抗腫瘤作用，成為研究的焦點(diǎn)。 五味子（Fructus Schizandra，F(xiàn)S）是常用中藥，具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心的功效，藥用價值較高。既往研究發(fā)現(xiàn)，五味子粗提物及其活性成分可通過抑制P糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）和蛋白激酶C（protein kinase C，，PKC）的表達(dá)，從而逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性（multidrug resistance，MDR）[1]。 活性氧（reactive oxygen species，ROS）是化學(xué)性質(zhì)活躍的含氧原子或原子團(tuán)，具有較強(qiáng)的氧化能力[2]，在先天免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用，但是過量的ROS可介導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的細(xì)胞損傷，并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡[3]。研究表明[4]，大量的ROS通過介導(dǎo)線粒體DNA（Mitochondrial DNA，mtDNA）突變和更多ROS的蓄積，從而產(chǎn)生持續(xù)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而有利于癌癥的發(fā)生。N-乙酰半胱氨酸（N-Acetyl-L-cysteine，NAC）為巰基類化合物，是一種抗氧化劑，可作為ROS抑制劑，容易通過細(xì)胞膜，影響細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，并有效地減少氧化損傷的發(fā)生[5]。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察五味子脂A（GomisinA，GA）與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用后，卵巢癌Skov3細(xì)胞中ROS的變化，探討ROS在GA增強(qiáng)紫杉醇化療敏感性中的作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法：體外培養(yǎng)人漿液性囊腺性卵巢癌細(xì)胞Skov3，分組給予GA和/或紫杉醇，或者給予NAC和/或紫杉醇，分別作用6小時，應(yīng)用MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞周期及ROS水平，Dichlorofluorescindiacetate（DCFH-DA）染色檢測ROS水平，Western blot檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4、CyclinB1、P53的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：五味子脂A與紫杉醇聯(lián)合作用于卵巢癌Skov3細(xì)胞，可增強(qiáng)紫杉醇的化療敏感性，協(xié)同抑制Skov3細(xì)胞的增殖。通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及ROS，發(fā)現(xiàn)五味子脂A可通過降低ROS水平抑制細(xì)胞周期，從而發(fā)揮協(xié)同紫杉醇的抗腫瘤作用；通過Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，五味子脂A與紫杉醇單獨(dú)給藥后，可影響細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4、CyclinB1和P53的表達(dá)，聯(lián)合用藥組后蛋白表達(dá)的改變更加明顯。從NAC作用后，可得出與五味子脂A相同的結(jié)果，進(jìn)一步證實(shí)五味子脂A通過降低ROS水平，增強(qiáng)紫杉醇對卵巢癌細(xì)胞Skov3增殖的敏感性。 結(jié)論：五味子脂A與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用于卵巢癌Skov3細(xì)胞，可通過抑制細(xì)胞周期，增強(qiáng)紫杉醇的敏感性，提高藥物的抗腫瘤效果。這一作用的機(jī)制可能是五味子脂A下降Skov3細(xì)胞中的ROS水平，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白CDK4、CyclinB1及P53的表達(dá)，來抑制細(xì)胞周期進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：Skov3細(xì)胞 紫杉醇 五味子脂A 活性氧 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要英文詞縮寫表10-11
• 第1章 引言11-12
• 第2章 文獻(xiàn)綜述12-16
• 2.1 腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性12
• 2.2 中藥協(xié)同化療藥物抗腫瘤作用的機(jī)制12-16
• 2.2.1 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡13
• 2.2.2 抑制細(xì)胞周期13
• 2.2.3 逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞中多藥耐藥基因 P-gp 的表達(dá)13-14
• 2.2.4 拮抗鈣離子通道，增加細(xì)胞內(nèi)藥物濃度14
• 2.2.5 抑制 ABCB1 的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)功能，減少藥物排出14
• 2.2.6 降低谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶活性，減少細(xì)胞內(nèi)藥物代謝14-15
• 2.2.7 抑制 DNA 損傷修復(fù)相關(guān)蛋白的表達(dá)15
• 2.2.8 增加細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生15-16
• 第3章 研究內(nèi)容16-25
• 3.1 材料16-19
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株16
• 3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 3.1.3.1 實(shí)驗(yàn)用藥物17
• 3.1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑17
• 3.1.3.3 Annexin V-FITC/PI 雙染凋亡檢測試劑盒17
• 3.1.3.4 Western-blot相關(guān)試劑17-18
• 3.1.3.5 其他相關(guān)試劑18
• 3.1.4 主要試劑的配制方法18-19
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法19-24
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19-20
• 3.2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇及換液19
• 3.2.1.2 細(xì)胞換液19
• 3.2.1.3 細(xì)胞傳代19
• 3.2.1.4 細(xì)胞凍存19-20
• 3.2.2 MTT法檢測Skov3細(xì)胞的增殖活性20
• 3.2.3 DHE染色檢測活性氧20-21
• 3.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測活性氧21
• 3.2.5 Annexin V-FITC/PI 雙染檢測細(xì)胞凋亡21
• 3.2.6 PI單染檢測細(xì)胞周期21-22
• 3.2.7 Western blot檢測β-actin、CDK4、P53、CyclinB1蛋白的表達(dá)22-24
• 3.2.7.1 提取樣本總蛋白22
• 3.2.7.2 蛋白定量22
• 3.2.7.3 配置聚丙烯酰胺凝膠22-23
• 3.2.7.4 SDS-PAGE 電泳23
• 3.2.7.5 免疫印跡雜交23
• 3.2.7.6 脫脂牛奶封閉23
• 3.2.7.7 抗體孵育23-24
• 3.2.7.8 顯色24
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-37
• 4.1 五味子脂A增強(qiáng)紫杉醇抑瘤作用25-31
• 4.1.1 MTT 法檢測聯(lián)合用藥對 Skov3 細(xì)胞增殖的抑制作用25
• 4.1.2 五味子脂A下調(diào)紫杉醇處理后Skov3細(xì)胞中的ROS25-27
• 4.1.2.1 DHE染色檢測活性氧25-26
• 4.1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測GA聯(lián)合PTX作用于Skov3后細(xì)胞內(nèi)活性氧26-27
• 4.1.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測聯(lián)合用藥后 Skov3 細(xì)胞的凋亡百分率27-28
• 4.1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測 GA 與 PTX 聯(lián)合用藥后對 Skov3 細(xì)胞周期的影響28-29
• 4.1.5 Western Blot 方法檢測聯(lián)合用藥后 Skov3 細(xì)胞中周期相關(guān)蛋白的表達(dá)29-31
• 4.2 抗氧化劑NAC增強(qiáng)紫杉醇抑瘤作用的研究31-37
• 4.2.1 MTT 法檢測 NAC 聯(lián)合 PTX 作用于 Skov3 后對細(xì)胞增殖的抑制作用31
• 4.2.2 NAC 下調(diào)紫杉醇處理后 Skov3 細(xì)胞中的 ROS31-33
• 4.2.2.1 DHE 染色檢測活性氧31-32
• 4.2.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測活性氧32-33
• 4.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測 NAC 與 PTX 聯(lián)合用藥后 Skov3 細(xì)胞的凋亡百分率33-34
• 4.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測 NAC 與 PTX 聯(lián)合用藥對 Skov3 細(xì)胞周期的影響34-35
• 4.2.5 Western Blot 方法檢測聯(lián)合用藥后 Skov3 細(xì)胞中周期相關(guān)蛋白的表達(dá)35-37
• 第5章 討論37-42
• 5.1 五味子脂A聯(lián)合紫杉醇抑制Skov3細(xì)胞的增殖37-38
• 5.2 五味子脂 A 聯(lián)合紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌 Skov3 細(xì)胞內(nèi)活性氧的改變38-39
• 5.3 五味子脂 A 與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用對卵巢癌 Skov3 細(xì)胞凋亡的影響39
• 5.4 五味子脂 A 與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用后對卵巢癌 Skov3 細(xì)胞周期的影響39-40
• 5.5 五味子脂 A 與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用后對卵巢癌 Skov3 細(xì)胞周期影響的分子機(jī)制40-42
• 第6章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果47-48
• 致謝48

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：五味子脂A通過抑制ROS增強(qiáng)紫杉醇抑制卵巢癌Skov3細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：321334