目的:本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SERPIND1在卵巢上皮性腫瘤組織和正常卵巢組織中的表達(dá),并分析SERPIND1與病理參數(shù)之間的關(guān)系;還檢測(cè)分析了SERPIND1的相互作用蛋白種類;構(gòu)建差異表達(dá)SERPIND1的上皮性卵巢癌細(xì)胞系,探究差異表達(dá)SERPIND1對(duì)卵巢癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響及相關(guān)調(diào)控機(jī)制;還對(duì)SERPIND1基因啟動(dòng)因子區(qū)進(jìn)行了初步探索,其結(jié)果對(duì)于卵巢上皮性腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)、術(shù)后隨訪及后續(xù)治療等都具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。研究方法:分別使用免疫組織化學(xué)、蛋白印跡等方法檢測(cè):SERPIND1在卵巢上皮性腫瘤組織、正常卵巢組織（來(lái)源于因?qū)m頸癌手術(shù)術(shù)中切除的正常卵巢標(biāo)本）、卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,并分析患者臨床病理參數(shù)與SERPIND1表達(dá)間的相關(guān)性。通過(guò)對(duì)113例原發(fā)性卵巢上皮性惡性腫瘤患者進(jìn)行術(shù)后隨訪調(diào)查,分析SERPIND1的表達(dá)對(duì)患者總生存時(shí)間、疾病無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間之間的關(guān)系。同時(shí)提取卵巢上皮性腫瘤組織和正常卵巢組織中的蛋白質(zhì),通過(guò)蛋白印跡法方法檢測(cè)SERPIND1的表達(dá)情況。進(jìn)一步分析卵巢上皮性腫瘤組織和正常卵巢組織中SERPIND1在蛋白水平上的表達(dá)差異。并分別構(gòu)建SERPIN... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :SERPIND1在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 標(biāo)本來(lái)源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 主要工作液的配制
        2.2 方法
            2.2.1 免疫組織化學(xué)
            2.2.2 蛋白印跡法
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 SERPIND1在各組卵巢組織中的表達(dá)情況
        3.2 SERPIND1的表達(dá)與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系
        3.3 SERPIND1表達(dá)與卵巢癌患者預(yù)后的關(guān)系
        3.4 SERPIND1蛋白在各組卵巢組織中的表達(dá)情況
        3.5 SERPIND1蛋白在人卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :SERPIND1對(duì)上皮性卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 材料
            7.1.1 細(xì)胞系
            7.1.2 主要材料
            7.1.3 主要儀器
        7.2 方法
            7.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            7.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
            7.2.3 干擾SERPIND1細(xì)胞系建立
            7.2.4 real-time PCR檢測(cè)目的基因的表達(dá)
            7.2.5 劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力
            7.2.6 細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)
            7.2.7 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
            7.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期
            7.2.9 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            7.2.10 裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
            7.2.11 免疫共沉淀驗(yàn)證SERPIND1與Vimentin為相互作用蛋白
        7.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    8 結(jié)果
        8.1 差異表達(dá)SERPIND1對(duì)卵巢細(xì)胞癌細(xì)胞遷移能力的影響
        8.2 差異表達(dá)SERPIND1對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的影響
        8.3 差異表達(dá)SERPIND1對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖能力的影響
        8.4 差異表達(dá)SERPIND1對(duì)卵巢癌細(xì)胞周期的影響
        8.5 差異表達(dá)SERPIND1對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡能力的影響
        8.6 差異表達(dá)SERPIND1對(duì)卵巢癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力的影響
        8.7 利用免疫共沉淀進(jìn)行驗(yàn)證SERPIND1與Vimentin為相互作用蛋白
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 :SERPIND1影響上皮性卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制研究
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 材料
            12.1.1 細(xì)胞系
            12.1.2 主要材料
            12.1.3 主要儀器
        12.2 方法
            12.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理
            12.2.2 蛋白印跡法檢測(cè)SERPIND1基因轉(zhuǎn)染前后PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP2及MMP9等蛋白的表達(dá)
            12.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
            12.2.4 劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力
            12.2.5 細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)
            12.2.6 MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
            12.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化
            12.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化
            12.2.9 CHIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子與SERPIND1啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合的結(jié)合情況
        12.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    13 結(jié)果
        13.1 差異表達(dá)SERPIND1基因前后PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP2及MMP9等蛋白的變化
        13.2 過(guò)表達(dá)SERPIND1的卵巢癌細(xì)胞系中加入PI3K/AKT通路抑制劑LY294002后生物學(xué)行為的改變
        13.3 轉(zhuǎn)錄因子NF-κB1可以結(jié)合于SERPIND1的啟動(dòng)子區(qū),并調(diào)控SERPIND1的表達(dá)
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3182990