目的:以最原始的羊水樣本為起始模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增,建立一種快速、簡便的骨骼發(fā)育異常單基因遺傳病的產(chǎn)前基因診斷方法。方法:對2013年4月—2018年1月于南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的超聲提示骨骼發(fā)育異常的38例胎兒行羊膜腔穿刺并進(jìn)行軟骨發(fā)育不全、軟骨發(fā)育低下、致死性發(fā)育不全及成骨發(fā)育不全4種單基因遺傳病診斷,抽取孕婦羊水后不經(jīng)過胎兒細(xì)胞培養(yǎng),也不經(jīng)過羊水中胎兒細(xì)胞DNA的提取,加入中性鹽等物質(zhì)作為PCR緩沖液,控制緩沖液pH值為8～10,擴(kuò)增FGFR3及COL1A2基因上的靶標(biāo)片段,直接在反應(yīng)體系中加入8μL羊水進(jìn)行PCR擴(kuò)增測序,行產(chǎn)前基因診斷;考察擴(kuò)增體系中的成分及含量對羊水直接擴(kuò)增方法的影響。結(jié)果:38例胎兒樣本中檢出單基因遺傳病致死性發(fā)育不全3例,分別為Ⅰ型1例,Ⅱ型2例;軟骨發(fā)育不全3例,軟骨發(fā)育低下1例。中性鹽緩沖液、0.20 U/μL Promega Taq DNA聚合酶、每條引物1.2 pmol/μL用于羊水直接擴(kuò)增效率最佳。結(jié)論:本方法省略了羊水細(xì)胞培養(yǎng)和羊水中胎兒DNA核酸提取這兩步繁瑣步驟,無需濃縮羊水即可直接擴(kuò)增,縮短了診斷時間,節(jié)約了診斷成本,可以減少P... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,40(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 羊水標(biāo)本采集
        1.2.2 骨發(fā)育異常單基因遺傳病檢測
2 結(jié)果
    2.1 羊水直接擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)
    2.2 骨發(fā)育異常單基因遺傳病檢測結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于FOK1酶體系的PCR防污染法及在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J]. 吳江平,黃歡,瞿琳,姚維銀.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(09)
[2]假性軟骨發(fā)育不全的臨床影像學(xué)分析[J]. 顧海斌,唐文偉.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(09)



本文編號：3174776