本文關(guān)鍵詞：抑制性KIR在不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者蛻膜中的表達(dá)及調(diào)控，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探索不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者(Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion, URSA)子宮蛻膜中抑制性殺傷免疫球蛋白樣受體(Killer Immunoglobulin-like Receptor, KIR)的表達(dá)和調(diào)控機(jī)制,分析抑制性KIR與不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)相關(guān)的分子生物學(xué)機(jī)制。材料及方法 1.選擇30例不明原因連續(xù)發(fā)生三次或三次以上自然流產(chǎn)的患者作為研究組,30例同期妊娠并且曾經(jīng)正常分娩過至少一個胎兒的正常妊娠者作為對照組。 2. TRIZOL法抽提子宮蛻膜組織總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后,qRT-PCR分別檢測兩組子宮蛻膜組織中KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DL4、KIR2DL5mRNA相對表達(dá)量。 3.含蛋白酶抑制劑的RIPA蛋白質(zhì)裂解液抽提子宮蛻膜組織蛋白質(zhì),采用BCA法進(jìn)行蛋白定量,通過Western blot技術(shù)進(jìn)行KIR2DL2蛋白質(zhì)相對表達(dá)量檢測。 4.應(yīng)用QIAGEN公司Genomic DNA Kits試劑盒抽提DNA,亞硫酸氫鹽修飾后,進(jìn)行基因目的片段擴(kuò)增,應(yīng)用焦磷酸測序進(jìn)行KIR2DL2基因啟動子區(qū)甲基化率的檢測。 5.收取正常妊娠者子宮蛻膜進(jìn)行原代蛻膜細(xì)胞培養(yǎng),免疫熒光技術(shù)鑒定子宮蛻膜細(xì)胞,采用KIR2DL2單基因siRNA與lipo2000共轉(zhuǎn)染,干擾KIR2DL2表達(dá),48小時抽提蛻膜細(xì)胞RNA, qRT-PCR法檢測KIR2DL2基因mRNA相對表達(dá)量,72小時提取蛻膜細(xì)胞蛋白質(zhì),Western blot技術(shù)檢測KIR2DL2蛋白質(zhì)相對表達(dá)量,構(gòu)建體外子宮蛻膜細(xì)胞系。 結(jié)果 1.不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)組和正常妊娠組在年齡、身高、體重、初潮年齡、月經(jīng)周期,行經(jīng)天數(shù)等方面無差異。 2. qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),子宮蛻膜組織KIR2DL2在不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)組的mRNA相對表達(dá)量顯著低于對照組,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。子宮蛻膜組織KIR2DL1、KIR2DL3、KIR2DL4和KIR2DL5在不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)組和正常妊娠組mRNA相對表達(dá)量無顯著差異(P0.05)。 3.不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組子宮蛻膜組織KIR2DL2蛋白質(zhì)相對表達(dá)量顯著低于正常妊娠組,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.焦磷酸測序發(fā)現(xiàn)在不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)組和正常妊娠組子宮蛻膜組織KIR2DL2基因啟動子區(qū)DNA甲基化率無顯著差異(P0.05)。 5.原代子宮蛻膜細(xì)胞培養(yǎng),光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)呈梭形,不規(guī)則多角形或星形；免疫熒光鑒定蛻膜細(xì)胞可達(dá)95%；采用KIR2DL2單基因siRNA-lipo2000共轉(zhuǎn)染后,KIR2DL2蛋白質(zhì)相對表達(dá)量降低,完成體外子宮蛻膜細(xì)胞系的構(gòu)建。 結(jié)論 1.不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中基因KIR2DL2轉(zhuǎn)錄和翻譯水平表達(dá)量顯著下降。 2. KIR2DL2表達(dá)下降可能不是通過DNA甲基化修飾調(diào)控,可能是通過其他通路或者其它修飾調(diào)節(jié)來完成,需要進(jìn)一步研究。 3.成功構(gòu)建體外子宮蛻膜細(xì)胞系,為探索KIR2DL2缺乏與不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)關(guān)聯(lián)性研究奠定原代細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：URSA 基因表達(dá) KIR siRNA
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R714.21
【目錄】：

• 致謝4-5
• 序言5-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-14
• 縮略詞表14-16
• 1 引言16-18
• 2 材料與方法18-37
• 3 結(jié)果37-46
• 4 討論46-49
• 5 結(jié)論49-50
• 6 參考文獻(xiàn)50-55
• 綜述55-67
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 作者簡介及在讀期間所取得成果67-68

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：抑制性KIR在不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者蛻膜中的表達(dá)及調(diào)控，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：316940