目的:甲狀腺激素（TH）在腦發(fā)育過(guò)程中具有極其重要的作用。先天性甲狀腺功能減退或者妊娠期母體甲狀腺激素不足,都會(huì)不同程度地影響胎兒神經(jīng)細(xì)胞的增殖、分化、遷移、突觸的發(fā)育、髓鞘的形成及功能的完善。亞臨床甲狀腺功能減退癥（Subclinical hypothyroidism,SH）又稱亞臨床甲減。Man發(fā)現(xiàn)輕微的母親甲減就可引起后代智力評(píng)分降低,本課題組的流行病學(xué)研究結(jié)果提示妊娠中期婦女單純亞臨床甲減、單純低T₄血癥和單純TPOAb陽(yáng)性皆可以使后代智力和運(yùn)動(dòng)發(fā)育評(píng)分下降。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究提示亞臨床甲減母鼠可導(dǎo)致后代學(xué)習(xí)和記憶能力的下降。母鼠孕13天之前開(kāi)始左旋T₄治療能夠阻止神經(jīng)細(xì)胞遷移及結(jié)構(gòu)定位破壞,并且可糾正這些蛋白含量的改變。但是母體亞臨床甲減引起后代神經(jīng)發(fā)育的確切機(jī)制還不清楚。研究證明了許多受TH調(diào)節(jié)且參與腦發(fā)育的靶分子,并且發(fā)現(xiàn)甲狀腺功能減退癥（甲減）動(dòng)物模型中這些靶分子的mRNA表達(dá)低于正常動(dòng)物。TH是在分子水平控制著大腦發(fā)育。TH反應(yīng)性基因?qū)H的反應(yīng)性及其mRNA和蛋白的表達(dá)有時(shí)間依賴性和組織特異性,由此推測(cè)在TH調(diào)節(jié)腦發(fā)育的過(guò)程中應(yīng)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分:亞臨床甲減母鼠的胎/仔鼠腦發(fā)育過(guò)程中microRNA的差異性表達(dá)
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 主要試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理
        2.3 大鼠血清甲狀腺功能測(cè)定
        2.4 miRNA芯片檢測(cè)
            2.4.1 總RNA抽提
            2.4.2 RNA的純度鑒定以及含的測(cè)定
            2.4.3 靶標(biāo)制備
        2.5 芯片結(jié)果分析
        2.6 實(shí)時(shí)定量PCR
            2.6.1 miRNAs實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)
            2.6.2 靶基因?qū)崟r(shí)定量PCR檢測(cè)
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 孕鼠血清TSH及TT4水平比較
        3.2 亞臨床甲減組與正常組相比表達(dá)差異的miRNA芯片圖譜
        3.3 甲減組與亞臨床甲減組相比表達(dá)差異的miRNA芯片圖譜
        3.4 亞臨床甲減與正常組相比表達(dá)差異的miRNAs實(shí)時(shí)定量驗(yàn)證
        3.5 差異表達(dá)的miRNA靶基因?qū)崟r(shí)定量驗(yàn)證
        3.6 差異表達(dá)的miRNAs靶基因GO和KEGGpathway分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:miR-125b-5p在甲減母鼠后代腦組織的表達(dá)及在去甲狀腺素培養(yǎng)的C17.2神經(jīng)干細(xì)胞中的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 細(xì)胞系:HEK293、C17.2
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 主要溶液及試劑的配置
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 動(dòng)物造模及標(biāo)本制備
            2.2.2 甲減母鼠miRNA芯片檢測(cè)
            2.2.3 Real time PCR檢測(cè)miR-125b-5p及靶基因STAT3 mRNA表達(dá)
            2.2.4 Western blot檢測(cè)各組胎鼠腦組織STAT3蛋白表達(dá)
            2.2.5 pMIR-GLO-STAT3質(zhì)粒構(gòu)建
            2.2.6 HEK293細(xì)胞的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、螢光素酶檢測(cè)
            2.2.7 C17.2神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定及轉(zhuǎn)染
            2.2.8 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞miR-125b-5p、STAT3、TUBB3、GFAP mRNA實(shí)時(shí)定量檢測(cè)
            2.2.9 STAT3總蛋白磷酸化蛋白檢測(cè)
            2.2.10 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞CCK-8檢測(cè)增殖
        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 甲減母鼠E13天仔鼠芯片結(jié)果
        3.2 甲減母鼠后代miR-125b-5p和STAT3 mRNA表達(dá)量
        3.3 甲減母鼠后代STAT3總蛋白檢測(cè)結(jié)果
        3.4 質(zhì)粒結(jié)果
        3.5 螢光素酶檢測(cè)結(jié)果
        3.6 C17.2神經(jīng)干細(xì)胞鑒定
        3.7 陰離子交換樹(shù)脂對(duì)血清中甲狀腺激素清除影響
        3.8 正常組和去甲狀腺激素培養(yǎng)C17.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimics STAT3 mRNA表達(dá)量檢測(cè)
        3.9 C17.2細(xì)胞轉(zhuǎn)然后STAT3總蛋白和磷酸化蛋白結(jié)果
        3.10 去甲狀腺激素培養(yǎng)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞分化變化
        3.11 轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimics對(duì)細(xì)胞分化的影響
        3.12 去甲狀腺激素培養(yǎng)對(duì)C17.2神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響
        3.13 轉(zhuǎn)染miR-125b-5p mimics對(duì)C17.2增殖影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-125a-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響[J]. 賈叢偉,孫洋,張婷婷,盧朝輝,陳杰.  中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào). 2016(04)



本文編號(hào)：3167947