目的:研究體外誘導(dǎo)人胚胎干細胞（human embryonic stem cell,hESC）向下丘腦神經(jīng)祖細胞分化,并以此為細胞模型,觀察不同濃度雄激素對下丘腦神經(jīng)祖細胞分化的影響。方法:鑒定hESC細胞株CCRM22,體外誘導(dǎo)CCRM22向下丘腦神經(jīng)祖細胞分化,對其進行初步的細胞生物學(xué)鑒定;在分化培養(yǎng)基中添加1×10^-8mol/L、1×10^-7mol/L睪酮（以無水乙醇為助溶劑對照）,收集不同分化時期細胞,比較分化效率;利用RT-qPCR、流式細胞術(shù)、免疫熒光檢測等方法鑒定分化細胞,并檢測生殖功能調(diào)控相關(guān)基因的表達。結(jié)果:CCRM22分化為下丘腦神經(jīng)祖細胞的效率超過85%,但睪酮處理降低其分化效率;分化細胞表達神經(jīng)細胞標志物NESTIN以及下丘腦神經(jīng)祖細胞特異性標志物NKX2.1,同時表達KISS1和雄激素受體（androgen receptor,AR）,且AR的表達水平與睪酮濃度呈正相關(guān)。結(jié)論:成功誘導(dǎo)hESC分化形成下丘腦神經(jīng)祖細胞,高濃度睪酮處理抑制hESC向下丘腦神經(jīng)祖細胞分化,該細胞模型可應(yīng)用于后續(xù)體外研究多囊卵巢綜合征女性孕早... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 HNP的體外誘導(dǎo)分化
        1.2.2 雄激素處理
        1.2.3 RT-q PCR分析h ESC及HNP特異基因表達
        1.2.4 流式細胞術(shù)分析h ESC及HNP的特異基因表達
        1.2.5 免疫熒光檢測
    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 h ESC細胞株CCRM22的鑒定
    2.2 誘導(dǎo)CCRM22向HNP分化
    2.3 h ESC多能性標志物和HNP特異標志物的表達
    2.4 高雄激素處理抑制h ESC向HNP分化
    2.5 高雄激素對HNP特異基因表達的影響
    2.6 高雄激素對生殖功能相關(guān)基因表達的影響
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]高效誘導(dǎo)人胚胎干細胞分化為表達生殖功能調(diào)控相關(guān)基因的下丘腦神經(jīng)細胞[J]. 徐瑜辰,覃蓮菊,寧松,曹孟,李真真,崔毓桂,馬翔,劉嘉茵.  生殖醫(yī)學(xué)雜志. 2019(08)
[2]PI3K/mTOR抑制劑NVP-BEZ235體內(nèi)外對鼻咽癌細胞增殖和凋亡的影響[J]. 楊芬,唐曉燕,吳鵬,譚運新.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2016(05)



本文編號：3159026