目的：初步探討PI3K/AKT通路在血清刺激宮頸癌HeLa細(xì)胞UBF1磷酸化及核仁轉(zhuǎn)錄中的調(diào)控作用。方法：通過Realtime PCR技術(shù)和Western Blot技術(shù)分別檢測血清刺激和血清饑餓對細(xì)胞的核仁轉(zhuǎn)錄狀態(tài)及UBF S388磷酸化、PI3K/AKT通路活化的影響；再分別用P13K抑制劑及AKT抑制劑處理血清刺激的細(xì)胞以阻斷相應(yīng)通路,借助Realtime PCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)和Lucif erase Assay技術(shù)觀察PI3K/AKT通路對血清刺激后的核仁轉(zhuǎn)錄、UBF S388磷酸化、核糖體基因（rDNA）啟動子活性的影響；隨后通過Western Blot實驗和Luciferase Assay實驗來比較PI3K α抑制劑、PI3K β抑制劑及LY294002對HeLa細(xì)胞內(nèi)PI3K/AKT通路的阻斷作用、UBF S388磷酸化狀態(tài)及rDNA啟動子活性的影響。最后通過Western Blot技術(shù)和PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測P13K通路和Akt通路各自對下游mTORCl通路活化、周期蛋白cyclinE和cyclinA的蛋白水平及細(xì)胞周期的影響是否存在差異。結(jié)果：血清饑... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一部分 血清刺激影響核仁轉(zhuǎn)錄及UBF活化
    1.1 材料
        1.1.1 試劑及耗材
        1.1.2 儀器
        1.1.3 實驗所用細(xì)胞系
        1.1.4 主要試劑和溶液的配制
    1.2 實驗方法
        1.2.1 HeLa細(xì)胞株的培養(yǎng)
        1.2.2 血清饑餓處理
        1.2.3 血清刺激處理
        1.2.4 Reverse Transcription PCR
        1.2.5 Real-time PCR
        1.2.6 Western blot實驗
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 血清饑餓對核仁轉(zhuǎn)錄及UBF活化影響
        1.3.2 血清刺激對核仁轉(zhuǎn)錄及UBF活化影響
    1.4 討論
第二部分 PI3K/AKT通路參與血清刺激調(diào)控核仁轉(zhuǎn)錄
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑和耗材
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 RT-PCR
        2.2.2 Western blot實驗
        2.2.3 熒光素酶檢測實驗（Luciferase Assay）
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 PI3K/AKT通路參與血清刺激調(diào)控核仁轉(zhuǎn)錄
        2.3.2 PI3K/AKT通路參與調(diào)控血清刺激UBF磷酸化
        2.3.3 I A型PI3K參與核仁轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        2.3.4 PI3K/AKT通路調(diào)控rDNA啟動子活性
    2.4 討論
第三部分 PI3K、AKT對核仁轉(zhuǎn)錄的調(diào)控有區(qū)別
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑和耗材
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要溶液配制
    3.2 主要實驗方法
        3.2.1 Western Blot實驗
        3.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 PI3K和AKT對下游mTOR調(diào)控不同
        3.3.2 PI3K和AKT對下游cyclinE和cyclinA的調(diào)控不同
        3.3.3 PI3K和AKT對細(xì)胞周期的調(diào)控不同
    3.4 討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1：英文縮寫注解（Alphabatic）
    附錄2：綜述
        參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表論文情況
致謝
統(tǒng)計學(xué)審核證明



本文編號：3150633