本文關鍵詞：黃芩苷對子癇前期血清誘導HUVECs增殖和ICAM-1表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察子癇前期患者(濕熱瘀結(jié)證)臍帶血管內(nèi)皮細胞細胞間粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表達;探討子癇前期(Pre-eclampsia,PE)患者的血清對體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖和ICAM-1表達的影響;觀察不同濃度黃芩苷(baicalin,BAI)對血清誘導后細胞增殖的影響,進而選擇最佳藥物濃度;觀察藥物對HUVECs細胞上ICAM-1表達的影響。探討黃芩苷對PE濕熱瘀結(jié)證防治作用的靶點及可能機制,規(guī)范藥物最佳有效濃度,為黃芩苷的進一步臨床廣泛應用提供理論和實驗依據(jù)。方法第一部分臨床觀察中選取濕熱瘀結(jié)證子癇前期PE患者50例及正常妊娠孕婦(Normal pregnancy,NP)50例。子癇前期的西醫(yī)臨床診斷標準參考《婦產(chǎn)科學》(第七版)。中醫(yī)辨證分型診斷標準參照文獻。無菌采血后分離出血清,56℃30min滅活補體,分裝后-20℃保存?zhèn)溆谩＿m宜的分娩方式下收集臍帶-80℃保存。隨機選取PE和NP組中的各20段臍帶,SABC法測定血管內(nèi)皮上細胞ICAM-1表達。第二部分實驗研究,人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(Human umbilical vein endothelial cells,簡稱HUVECs),理論上可無限次的傳代培養(yǎng),易于實驗操作。含10%子癇前期血清DMEM培養(yǎng)基誘導HUVECs 48h建立PE患者體內(nèi)內(nèi)皮細胞損傷模型。正常孕婦的血清48h的HUVECs作為陰性對照。分子癇前期模型a組,正常b組(陰性對照組),黃芩苷治療c組(PE模型+黃芩苷),共3大組。收獲a組和b組融合成單層呈鋪路石狀HUVECs,調(diào)整細胞密度,分別接種到96孔板中,待細胞貼壁后,棄舊培養(yǎng)液,加入含或不含黃芩苷的培養(yǎng)基,黃芩苷按高低濃度梯度加入對應的孔中,復5個平行孔,做好標記。培養(yǎng)箱中孵育24h進行cck-8實驗。進行三次實驗,分別調(diào)整細胞濃度為2×104細胞/孔,1×104細胞/孔,5×103細胞/孔,每次實驗重復三次。收獲a組,b組融合成單層呈鋪路石狀的HUVECs,根據(jù)摸索結(jié)果,調(diào)整最佳細胞密度接種到96孔板中,方法同上,根據(jù)細胞增殖實驗結(jié)果,調(diào)整黃芩苷不同濃度后加入對應的孔中進行孵育,操作同上。傳代細胞貼壁后,建立子癇前期模型a組和正常妊娠b組,進行標記;設立藥物治療c組:PE模型造好換含有效濃度的黃芩苷培養(yǎng)液,干預24h。收集a、b、c三組細胞,RT-PCR、蛋白印跡法方法檢測內(nèi)皮細胞中ICAM-1表達,記錄數(shù)據(jù)進行比較。結(jié)果(1)臨床臍帶標本的血管內(nèi)皮細胞中ICAM-1陽性表達于子癇前期模型(PE)組,呈棕褐色胞漿著色。免疫組化平均光密度值示PE組(51.42±4.46)顯著高于正常妊娠(NP)組(14.68±2.73),有顯著統(tǒng)計學意義(p0.01)。(2)PE內(nèi)皮損傷模型組內(nèi)皮細胞增殖活性(OD值1.49±0.08)較NP組(1.18±0.07)有明顯的增加,p0.01;黃芩苷抑制PE組內(nèi)皮細胞的增殖,有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(3)PE模型組內(nèi)皮細胞ICAM-1m RNA(倍增值4.68±0.20)表達明顯高于NP組(1.16±0.19),p0.01;黃芩苷(60μg/ml)干預后顯著抑制了PE組ICAM-1 m RNA的表達(1.51±0.07),p0.01,與NP組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(4)PE組ICAM-1蛋白(0.64±0.05)表達顯著高于NP組(0.37±0.05),p0.01;黃芩苷(60μg/ml)干預后明顯降低了PE組ICAM-1蛋白的表達(0.41±0.01),P0.01,但是與NP組相比,藥物干預后ICAM-1蛋白的表達變化無明顯統(tǒng)計學差異,p0.05。結(jié)論(1)臨床觀察中濕熱瘀結(jié)證型子癇前期患者臍帶內(nèi)皮細胞ICAM-1出現(xiàn)陽性表達。(2)體外實驗中濕熱瘀結(jié)證子癇前期患者血清促進人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的失衡性增殖;黃芩苷抑制PE血清誘導內(nèi)皮細胞的失衡性增殖以及表面粘附分子ICAM-1的過表達;黃芩苷在有效濃度為60μg/ml時,內(nèi)皮細胞的增殖得到有效抑制,同時細胞增殖活性與正常組最為接近。黃芩苷對子癇前期(濕熱瘀結(jié)證)的防治有一定作用,可能是通過抑制病理環(huán)境下血管內(nèi)皮細胞的失衡性增殖,抑制細胞表面粘附分子的過表達從而維持內(nèi)皮細胞的增殖與凋亡平衡,降低血管內(nèi)皮的粘附,保護血管內(nèi)皮細胞來實現(xiàn)的。(3)基礎實驗研究中內(nèi)皮細胞接種到96孔板中,細胞密度為1×104細胞/孔,cck-8試劑加入4h時的吸光度OD值處在最適宜觀察范圍,為今后的進一步實驗研究提供經(jīng)驗。
【關鍵詞】：黃芩苷 子癇前期 濕熱瘀結(jié)證 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞 增殖 細胞間粘附分子-1
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.244
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 縮略詞表12-14
• 前言14-16
• 第一部分 臨床觀察16-19
• 1 研究對象16-17
• 1.1 子癇前期濕熱瘀結(jié)證病例納入標準16
• 1.2 對照組16
• 1.3 兩組的排除標準16-17
• 2 實驗材料17
• 2.1 病例樣本收集17
• 2.2 主要實驗試劑17
• 3 免疫組織化學染色法測定細胞ICAM-1 的表達和定量17
• 4 數(shù)據(jù)處理17
• 5 結(jié)果17-19
• 5.1 切片圖像17-18
• 5.2 平均灰度值18-19
• 第二部分 實驗研究19-36
• 1 研究對象19-20
• 1.1 子癇前期濕熱瘀結(jié)證病例納入標準19
• 1.2 對照組19
• 1.3 兩組排除標準19-20
• 2 實驗材料20-22
• 2.1 標本收集20
• 2.2 細胞來源20
• 2.3 主要試劑20-21
• 2.4 實驗耗材21
• 2.5 主要儀器設備21-22
• 2.6 試劑的配置22
• 3 實驗方法22-29
• 3.1 細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代、凍存22-23
• 3.2 內(nèi)皮細胞損傷模型建立23-24
• 3.3 cck-8 檢測內(nèi)皮細胞增殖活性、細胞增殖抑制率24-25
• 3.4 細胞形態(tài)觀察25
• 3.5 細胞實驗25-28
• 3.6 統(tǒng)計學處理28-29
• 4 技術(shù)路線29-30
• 5 結(jié)果30-36
• 5.1 cck-8 實驗摸索結(jié)果30-31
• 5.2 細胞增殖活性檢測31-33
• 5.3 細胞形態(tài)觀察33-34
• 5.4 黃芩苷對子癇前期血清誘導內(nèi)皮細胞粘附分子ICAM-1 基因表達的影響34-35
• 5.5 黃芩苷對子癇前期血清誘導內(nèi)皮細胞粘附分子ICAM-1 蛋白表達的影響35-36
• 討論36-46
• 1 子癇前期的理論研究與課題結(jié)果的相關分析36-40
• 1.1 子癇前期的病因和發(fā)病機制36
• 1.2 子癇前期與血管內(nèi)皮損傷36-37
• 1.3 中醫(yī)對子癇前期濕熱瘀結(jié)證的認識37-39
• 1.4 實驗結(jié)果分析39-40
• 2 細胞間粘附分子-1 的基礎研究與結(jié)果的探討40-42
• 2.1 細胞粘附分子與子癇前期血管內(nèi)皮損傷41
• 2.2 濕熱瘀結(jié)證與細胞粘附分子41-42
• 2.3 實驗結(jié)果分析42
• 3 黃芩苷與細胞損傷模型相關結(jié)果的分析42-46
• 3.1 黃芩苷與細胞間粘附分子-143-44
• 3.2 黃芩苷與子癇前期內(nèi)皮損傷模型44-46
• 結(jié)語46-48
• 1 實驗結(jié)論46
• 2 實驗意義46-47
• 3 存在不足及改進措施47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述52-62
• 參考文獻59-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 史華瑞;袁恩武;賈莉婷;;細胞黏附分子與子癇前期發(fā)病關系的研究[J];醫(yī)藥論壇雜志;2007年24期

2 孫潔;田林紅;王收寶;張濤;王春玲;;黃芩苷對糖尿病大鼠腎臟細胞凋亡及其Bcl-2和Bax表達的影響[J];實用醫(yī)學雜志;2011年05期

3 莊朋偉;張艷軍;龐坦;;黃芩苷作用于腦微血管內(nèi)皮細胞和星形膠質(zhì)細胞對神經(jīng)干細胞分化的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年01期

4 李會英;趙滿琳;陳惠珍;張英懷;;中藥黃芩苷對脂多糖刺激人牙周膜成纖維細胞分泌腫瘤壞死因子-α的影響[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志;2006年05期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張艷;黃芩苷和黃芩素的抗炎和免疫調(diào)控作用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

  本文關鍵詞：黃芩苷對子癇前期血清誘導HUVECs增殖和ICAM-1表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：314042