本文關(guān)鍵詞：黃芩苷對(duì)子癇前期血清誘導(dǎo)HUVECs增殖和ICAM-1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察子癇前期患者(濕熱瘀結(jié)證)臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞間粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表達(dá);探討子癇前期(Pre-eclampsia,PE)患者的血清對(duì)體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖和ICAM-1表達(dá)的影響;觀察不同濃度黃芩苷(baicalin,BAI)對(duì)血清誘導(dǎo)后細(xì)胞增殖的影響,進(jìn)而選擇最佳藥物濃度;觀察藥物對(duì)HUVECs細(xì)胞上ICAM-1表達(dá)的影響。探討黃芩苷對(duì)PE濕熱瘀結(jié)證防治作用的靶點(diǎn)及可能機(jī)制,規(guī)范藥物最佳有效濃度,為黃芩苷的進(jìn)一步臨床廣泛應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法第一部分臨床觀察中選取濕熱瘀結(jié)證子癇前期PE患者50例及正常妊娠孕婦(Normal pregnancy,NP)50例。子癇前期的西醫(yī)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《婦產(chǎn)科學(xué)》(第七版)。中醫(yī)辨證分型診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)。無(wú)菌采血后分離出血清,56℃30min滅活補(bǔ)體,分裝后-20℃保存?zhèn)溆�。適宜的分娩方式下收集臍帶-80℃保存。隨機(jī)選取PE和NP組中的各20段臍帶,SABC法測(cè)定血管內(nèi)皮上細(xì)胞ICAM-1表達(dá)。第二部分實(shí)驗(yàn)研究,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(Human umbilical vein endothelial cells,簡(jiǎn)稱HUVECs),理論上可無(wú)限次的傳代培養(yǎng),易于實(shí)驗(yàn)操作。含10%子癇前期血清DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)HUVECs 48h建立PE患者體內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。正常孕婦的血清48h的HUVECs作為陰性對(duì)照。分子癇前期模型a組,正常b組(陰性對(duì)照組),黃芩苷治療c組(PE模型+黃芩苷),共3大組。收獲a組和b組融合成單層呈鋪路石狀HUVECs,調(diào)整細(xì)胞密度,分別接種到96孔板中,待細(xì)胞貼壁后,棄舊培養(yǎng)液,加入含或不含黃芩苷的培養(yǎng)基,黃芩苷按高低濃度梯度加入對(duì)應(yīng)的孔中,復(fù)5個(gè)平行孔,做好標(biāo)記。培養(yǎng)箱中孵育24h進(jìn)行cck-8實(shí)驗(yàn)。進(jìn)行三次實(shí)驗(yàn),分別調(diào)整細(xì)胞濃度為2×104細(xì)胞/孔,1×104細(xì)胞/孔,5×103細(xì)胞/孔,每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。收獲a組,b組融合成單層呈鋪路石狀的HUVECs,根據(jù)摸索結(jié)果,調(diào)整最佳細(xì)胞密度接種到96孔板中,方法同上,根據(jù)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果,調(diào)整黃芩苷不同濃度后加入對(duì)應(yīng)的孔中進(jìn)行孵育,操作同上。傳代細(xì)胞貼壁后,建立子癇前期模型a組和正常妊娠b組,進(jìn)行標(biāo)記;設(shè)立藥物治療c組:PE模型造好換含有效濃度的黃芩苷培養(yǎng)液,干預(yù)24h。收集a、b、c三組細(xì)胞,RT-PCR、蛋白印跡法方法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1表達(dá),記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果(1)臨床臍帶標(biāo)本的血管內(nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)于子癇前期模型(PE)組,呈棕褐色胞漿著色。免疫組化平均光密度值示PE組(51.42±4.46)顯著高于正常妊娠(NP)組(14.68±2.73),有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。(2)PE內(nèi)皮損傷模型組內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性(OD值1.49±0.08)較NP組(1.18±0.07)有明顯的增加,p0.01;黃芩苷抑制PE組內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(3)PE模型組內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1m RNA(倍增值4.68±0.20)表達(dá)明顯高于NP組(1.16±0.19),p0.01;黃芩苷(60μg/ml)干預(yù)后顯著抑制了PE組ICAM-1 m RNA的表達(dá)(1.51±0.07),p0.01,與NP組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(4)PE組ICAM-1蛋白(0.64±0.05)表達(dá)顯著高于NP組(0.37±0.05),p0.01;黃芩苷(60μg/ml)干預(yù)后明顯降低了PE組ICAM-1蛋白的表達(dá)(0.41±0.01),P0.01,但是與NP組相比,藥物干預(yù)后ICAM-1蛋白的表達(dá)變化無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,p0.05。結(jié)論(1)臨床觀察中濕熱瘀結(jié)證型子癇前期患者臍帶內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)。(2)體外實(shí)驗(yàn)中濕熱瘀結(jié)證子癇前期患者血清促進(jìn)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的失衡性增殖;黃芩苷抑制PE血清誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的失衡性增殖以及表面粘附分子ICAM-1的過(guò)表達(dá);黃芩苷在有效濃度為60μg/ml時(shí),內(nèi)皮細(xì)胞的增殖得到有效抑制,同時(shí)細(xì)胞增殖活性與正常組最為接近。黃芩苷對(duì)子癇前期(濕熱瘀結(jié)證)的防治有一定作用,可能是通過(guò)抑制病理環(huán)境下血管內(nèi)皮細(xì)胞的失衡性增殖,抑制細(xì)胞表面粘附分子的過(guò)表達(dá)從而維持內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與凋亡平衡,降低血管內(nèi)皮的粘附,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)的。(3)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究中內(nèi)皮細(xì)胞接種到96孔板中,細(xì)胞密度為1×104細(xì)胞/孔,cck-8試劑加入4h時(shí)的吸光度OD值處在最適宜觀察范圍,為今后的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究提供經(jīng)驗(yàn)。
【關(guān)鍵詞】：黃芩苷 子癇前期 濕熱瘀結(jié)證 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 增殖 細(xì)胞間粘附分子-1
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.244
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 縮略詞表12-14
• 前言14-16
• 第一部分 臨床觀察16-19
• 1 研究對(duì)象16-17
• 1.1 子癇前期濕熱瘀結(jié)證病例納入標(biāo)準(zhǔn)16
• 1.2 對(duì)照組16
• 1.3 兩組的排除標(biāo)準(zhǔn)16-17
• 2 實(shí)驗(yàn)材料17
• 2.1 病例樣本收集17
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑17
• 3 免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定細(xì)胞ICAM-1 的表達(dá)和定量17
• 4 數(shù)據(jù)處理17
• 5 結(jié)果17-19
• 5.1 切片圖像17-18
• 5.2 平均灰度值18-19
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究19-36
• 1 研究對(duì)象19-20
• 1.1 子癇前期濕熱瘀結(jié)證病例納入標(biāo)準(zhǔn)19
• 1.2 對(duì)照組19
• 1.3 兩組排除標(biāo)準(zhǔn)19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 2.1 標(biāo)本收集20
• 2.2 細(xì)胞來(lái)源20
• 2.3 主要試劑20-21
• 2.4 實(shí)驗(yàn)耗材21
• 2.5 主要儀器設(shè)備21-22
• 2.6 試劑的配置22
• 3 實(shí)驗(yàn)方法22-29
• 3.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代、凍存22-23
• 3.2 內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型建立23-24
• 3.3 cck-8 檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞增殖抑制率24-25
• 3.4 細(xì)胞形態(tài)觀察25
• 3.5 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)25-28
• 3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理28-29
• 4 技術(shù)路線29-30
• 5 結(jié)果30-36
• 5.1 cck-8 實(shí)驗(yàn)摸索結(jié)果30-31
• 5.2 細(xì)胞增殖活性檢測(cè)31-33
• 5.3 細(xì)胞形態(tài)觀察33-34
• 5.4 黃芩苷對(duì)子癇前期血清誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子ICAM-1 基因表達(dá)的影響34-35
• 5.5 黃芩苷對(duì)子癇前期血清誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子ICAM-1 蛋白表達(dá)的影響35-36
• 討論36-46
• 1 子癇前期的理論研究與課題結(jié)果的相關(guān)分析36-40
• 1.1 子癇前期的病因和發(fā)病機(jī)制36
• 1.2 子癇前期與血管內(nèi)皮損傷36-37
• 1.3 中醫(yī)對(duì)子癇前期濕熱瘀結(jié)證的認(rèn)識(shí)37-39
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析39-40
• 2 細(xì)胞間粘附分子-1 的基礎(chǔ)研究與結(jié)果的探討40-42
• 2.1 細(xì)胞粘附分子與子癇前期血管內(nèi)皮損傷41
• 2.2 濕熱瘀結(jié)證與細(xì)胞粘附分子41-42
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析42
• 3 黃芩苷與細(xì)胞損傷模型相關(guān)結(jié)果的分析42-46
• 3.1 黃芩苷與細(xì)胞間粘附分子-143-44
• 3.2 黃芩苷與子癇前期內(nèi)皮損傷模型44-46
• 結(jié)語(yǔ)46-48
• 1 實(shí)驗(yàn)結(jié)論46
• 2 實(shí)驗(yàn)意義46-47
• 3 存在不足及改進(jìn)措施47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述52-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張艷;黃芩苷和黃芩素的抗炎和免疫調(diào)控作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：黃芩苷對(duì)子癇前期血清誘導(dǎo)HUVECs增殖和ICAM-1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：314042