研究背景:流行病學調(diào)查提示,孕期不良因素（如飲酒、藥物等）暴露可導致胚胎器官發(fā)育不良,子代幼年及成年心血管、免疫及代謝系統(tǒng)疾病易感性增加。本室前期研究證實,孕期咖啡因暴露可抑制胎胸腺發(fā)育,導致胎胸腺初始T細胞輸出減少,子代成年后免疫功能紊亂及免疫相關疾病（如哮喘,1型糖尿病等）易感性增加。然而,孕期咖啡因暴露如何抑制胎胸腺T細胞輸出亟待進一步研究。已知咖啡因可誘導肝星形細胞、骨骼肌細胞等發(fā)生自噬,而細胞自噬與胸腺細胞發(fā)育密切相關。因此,本研究擬從細胞自噬角度闡明孕期咖啡因暴露對胎胸腺細胞發(fā)育的影響及其分子機制。目的:觀察孕期咖啡因暴露對胎胸腺細胞發(fā)育表型的影響,探討細胞自噬在胎胸腺細胞發(fā)育中的作用,進一步闡明咖啡因調(diào)控細胞自噬的分子機制。方法:（1）動物實驗觀察孕期咖啡因暴露對胎胸腺細胞表型及自噬的影響:受孕小鼠隨機分為對照組和咖啡因組,咖啡因組孕鼠于孕9天（gestational day 9,GD9）開始灌胃給予咖啡因（96mg/kg/d,每天給藥兩次,早晚各一次）,持續(xù)至生產(chǎn),正常對照組給予等體積生理鹽水。于孕18天（gestational day 18,GD18）剖腹取胎鼠,記錄... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．孕期咖啡因（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）暴露對孕１８日胎鼠和胎胸腺生長發(fā)育參數(shù)的影響．Ａ：胎??鼠體重；Ｂ：胎胸腺重量；Ｃ：胎胸腺指數(shù)；Ｍｅａｎ士ＳＤ，ｎ＝８－１０，與對照組相比，＊尺０．０５，??

圖２．孕期咖啡因暴露（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）對孕１８日胎胸腺細胞表型和分化的影響。Ａ．胎胸腺??流式細胞典型圖；Ｂ．胎胸腺各業(yè)型細胞絕對計數(shù)；Ｍｅａｎ士ＳＤ，ｎ＝３－４，與對照組相比；＊／＾０．０５。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｐｒｅｎａｔａｌ?ｃａｆｆｅｉｎｅ?（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｅｔａｌ?ｔｈｙｍｕｓ?ｏｎ?ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ?ｄａｙ?（ＧＤ?１８）．?Ａ．?Ｔｙｐｉｃａｌ?ｆｏｗ?ｄｉａｇｒａｍｓ；?Ｂ．??Ａｂｓｏｌｕｔｅ?ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ?ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ?ｎｕｍｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｅｔａｌ?ｔｈｙｍｕｓｅｓ；?ｎ＝３￣４?ｐｅｒ?ｇｒｏｕｐ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ｆｌｏｗ??ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ．?＊／＊＜０．０５．?＾ｃｏｎｔｒｏｌ．??３．孕期咖啡因暴露對胎胸腺Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路的影響??研究證實，Ａ２ＡＲ在胸腺細胞表面高度表達，腺苷激活Ａ２ＡＲ受體后，腺苷??酸環(huán)化酶活化，促進下游ＰＫＡ磷酸化，進一步引起細胞自噬等生物學變化。因??此，我們首先通過ＲＴ－ＰＣＲ檢測孕期咖啡因暴露對Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路ｍＲＮＡ水平??的影響。結果如圖，咖啡因組ＰＫＡ基因表達較對照組顯著降低（／Ｍ３．０５，圖３?Ａ），??Ａ２ＡＲ表達未有明顯變化。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測咖啡因?qū)Γ校耍粱罨挠绊�，結果顯??示，孕期咖啡因暴露后，Ｐ－ＰＫＡ在組織中的含量較對照組下調(diào)２４％?（圖３?Ｂ）。??

酸環(huán)化酶活化，促進下游ＰＫＡ磷酸化，進一步引起細胞自噬等生物學變化。因??此，我們首先通過ＲＴ－ＰＣＲ檢測孕期咖啡因暴露對Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路ｍＲＮＡ水平??的影響。結果如圖，咖啡因組ＰＫＡ基因表達較對照組顯著降低（／Ｍ３．０５，圖３?Ａ），??Ａ２ＡＲ表達未有明顯變化。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測咖啡因?qū)Γ校耍粱罨挠绊懀Y果顯??示，孕期咖啡因暴露后，Ｐ－ＰＫＡ在組織中的含量較對照組下調(diào)２４％?（圖３?Ｂ）。??提示，孕期咖啡因暴露對胎胸腺自噬的促進作用可能通過影響Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路??實現(xiàn)。??Ａ?Ｂ??§?１．５－１?ＣＤ?Ｃｏｎｔｒａｌ?ｃ?ｉ．ｓ－??ｇ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ?．２??ｉｉｒｉ?ｆｎ?ｎ?．??ｉ?■?■?ｇａｐｄｈ｜＾＾＾＾｜?＿?ＩＨ??Ｅ?０．０－ＬＩ?＾＾０．０－Ｉ??，??＾???Ａ２ＡＲ?ＰＫＡ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ??圖３．孕期咖啡因暴露（９６ｍｇ／ｋｇ／ｄ）對孕１８日胎胸腺細胞Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路的影響。Ａ．胎??胸腺細胞?Ａ２ＡＲ?和?ＰＫＡｍＲＮＡ?表達，Ｍｅａｎ土ＳＤ，?ｎ＝１０；?Ｂ．?ｐ－ＰＫＡ?蛋白表達情況，Ｍｅａｎ土ＳＤ，??ｎ＝３？４；與對照組相比


本文編號：3097760