研究背景:流行病學(xué)調(diào)查提示,孕期不良因素（如飲酒、藥物等）暴露可導(dǎo)致胚胎器官發(fā)育不良,子代幼年及成年心血管、免疫及代謝系統(tǒng)疾病易感性增加。本室前期研究證實(shí),孕期咖啡因暴露可抑制胎胸腺發(fā)育,導(dǎo)致胎胸腺初始T細(xì)胞輸出減少,子代成年后免疫功能紊亂及免疫相關(guān)疾�。ㄈ缦�,1型糖尿病等）易感性增加。然而,孕期咖啡因暴露如何抑制胎胸腺T細(xì)胞輸出亟待進(jìn)一步研究。已知咖啡因可誘導(dǎo)肝星形細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞等發(fā)生自噬,而細(xì)胞自噬與胸腺細(xì)胞發(fā)育密切相關(guān)。因此,本研究擬從細(xì)胞自噬角度闡明孕期咖啡因暴露對胎胸腺細(xì)胞發(fā)育的影響及其分子機(jī)制。目的:觀察孕期咖啡因暴露對胎胸腺細(xì)胞發(fā)育表型的影響,探討細(xì)胞自噬在胎胸腺細(xì)胞發(fā)育中的作用,進(jìn)一步闡明咖啡因調(diào)控細(xì)胞自噬的分子機(jī)制。方法:（1）動物實(shí)驗(yàn)觀察孕期咖啡因暴露對胎胸腺細(xì)胞表型及自噬的影響:受孕小鼠隨機(jī)分為對照組和咖啡因組,咖啡因組孕鼠于孕9天（gestational day 9,GD9）開始灌胃給予咖啡因（96mg/kg/d,每天給藥兩次,早晚各一次）,持續(xù)至生產(chǎn),正常對照組給予等體積生理鹽水。于孕18天（gestational day 18,GD18）剖腹取胎鼠,記錄... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．孕期咖啡因（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）暴露對孕１８日胎鼠和胎胸腺生長發(fā)育參數(shù)的影響．Ａ：胎??鼠體重；Ｂ：胎胸腺重量；Ｃ：胎胸腺指數(shù)；Ｍｅａｎ士ＳＤ，ｎ＝８－１０，與對照組相比，＊尺０．０５，??

圖２．孕期咖啡因暴露（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）對孕１８日胎胸腺細(xì)胞表型和分化的影響。Ａ．胎胸腺??流式細(xì)胞典型圖；Ｂ．胎胸腺各業(yè)型細(xì)胞絕對計數(shù)；Ｍｅａｎ士ＳＤ，ｎ＝３－４，與對照組相比；＊／＾０．０５。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｐｒｅｎａｔａｌ?ｃａｆｆｅｉｎｅ?（９６?ｍｇ／ｋｇ／ｄ）?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｅｔａｌ?ｔｈｙｍｕｓ?ｏｎ?ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ?ｄａｙ?（ＧＤ?１８）．?Ａ．?Ｔｙｐｉｃａｌ?ｆｏｗ?ｄｉａｇｒａｍｓ；?Ｂ．??Ａｂｓｏｌｕｔｅ?ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ?ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ?ｎｕｍｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｆｅｔａｌ?ｔｈｙｍｕｓｅｓ；?ｎ＝３￣４?ｐｅｒ?ｇｒｏｕｐ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ｆｌｏｗ??ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ．?＊／＊＜０．０５．?＾ｃｏｎｔｒｏｌ．??３．孕期咖啡因暴露對胎胸腺Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路的影響??研究證實(shí)，Ａ２ＡＲ在胸腺細(xì)胞表面高度表達(dá)，腺苷激活Ａ２ＡＲ受體后，腺苷??酸環(huán)化酶活化，促進(jìn)下游ＰＫＡ磷酸化，進(jìn)一步引起細(xì)胞自噬等生物學(xué)變化。因??此，我們首先通過ＲＴ－ＰＣＲ檢測孕期咖啡因暴露對Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路ｍＲＮＡ水平??的影響。結(jié)果如圖，咖啡因組ＰＫＡ基因表達(dá)較對照組顯著降低（／Ｍ３．０５，圖３?Ａ），??Ａ２ＡＲ表達(dá)未有明顯變化。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測咖啡因?qū)Γ校耍粱罨挠绊�，結(jié)果顯??示，孕期咖啡因暴露后，Ｐ－ＰＫＡ在組織中的含量較對照組下調(diào)２４％?（圖３?Ｂ）。??

酸環(huán)化酶活化，促進(jìn)下游ＰＫＡ磷酸化，進(jìn)一步引起細(xì)胞自噬等生物學(xué)變化。因??此，我們首先通過ＲＴ－ＰＣＲ檢測孕期咖啡因暴露對Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路ｍＲＮＡ水平??的影響。結(jié)果如圖，咖啡因組ＰＫＡ基因表達(dá)較對照組顯著降低（／Ｍ３．０５，圖３?Ａ），??Ａ２ＡＲ表達(dá)未有明顯變化。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測咖啡因?qū)Γ校耍粱罨挠绊�，結(jié)果顯??示，孕期咖啡因暴露后，Ｐ－ＰＫＡ在組織中的含量較對照組下調(diào)２４％?（圖３?Ｂ）。??提示，孕期咖啡因暴露對胎胸腺自噬的促進(jìn)作用可能通過影響Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路??實(shí)現(xiàn)。??Ａ?Ｂ??§?１．５－１?ＣＤ?Ｃｏｎｔｒａｌ?ｃ?ｉ．ｓ－??ｇ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ?．２??ｉｉｒｉ?ｆｎ?ｎ?．??ｉ?■?■?ｇａｐｄｈ｜＾＾＾＾｜?＿?ＩＨ??Ｅ?０．０－ＬＩ?＾＾０．０－Ｉ??，??＾???Ａ２ＡＲ?ＰＫＡ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃａｆｆｅｉｎｅ??圖３．孕期咖啡因暴露（９６ｍｇ／ｋｇ／ｄ）對孕１８日胎胸腺細(xì)胞Ａ２ＡＲ／ＰＫＡ通路的影響。Ａ．胎??胸腺細(xì)胞?Ａ２ＡＲ?和?ＰＫＡｍＲＮＡ?表達(dá)，Ｍｅａｎ土ＳＤ，?ｎ＝１０；?Ｂ．?ｐ－ＰＫＡ?蛋白表達(dá)情況，Ｍｅａｎ土ＳＤ，??ｎ＝３？４；與對照組相比


本文編號：3097760