[目的]探討通在卵巢漿液性癌SKOV-3細(xì)胞株中過表達(dá)雌激素受體ERα/β,檢測雌激素結(jié)合不同受體對Plexin-B1的影響。[方法]1、通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方法,把過表達(dá)ER α及ER β的載體轉(zhuǎn)染到SKO V-3細(xì)胞株中,構(gòu)建高表達(dá)ER α/β的SKOV-3細(xì)胞株。將培養(yǎng)好的細(xì)胞分為對照組（空白組）、過表達(dá)ER a組（ER α）、過表達(dá)ERβ組（ER β）。2、慢病毒感染SKOV-3細(xì)胞24小時,RT-PCR及Western Blotting檢測過表達(dá)ER a組（ER α）、過表達(dá)ER β組（ER β）兩組細(xì)胞感染前后SKOV-3細(xì)胞中ERα、ERβ表達(dá)情況。3、利用MTT實(shí)驗(yàn)檢測將17β-雌二醇（10-6mol/L）及雌激素受體拮抗劑ICI180,782 （100 nM）單獨(dú)及共同處理SKOV-3細(xì)胞24h后,檢測對照組、過表達(dá)ER α組、過表達(dá)ER β組三組SKOV-3各組細(xì)胞活性的影響。4、慢病毒感染細(xì)胞24h后,利用Western Blotting及RT-PCR分別檢測對照組、ER α組、ER β組中Plexin-B1總蛋白、RNA表達(dá)情況。5、用17 β-雌二醇（10-6mo... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１實(shí)驗(yàn)思路圖??

????結(jié)果??１、構(gòu)建過表達(dá)ＥＲａ及ＥＲ目的卵巢癌化ＯＶ－３細(xì)胞株??１．１?ＥＲ?ａ及ＥＲ目過表達(dá)載體慢病毒轉(zhuǎn)染ＳＫＯＶ－３細(xì)胞，構(gòu)建過表達(dá)ＥＲ?ａ及ＥＲ??ｅ的卵巢漿液癌細(xì)胞??ＥＲａ及ＥＲ目高表達(dá)載體委托廣州復(fù)能公司構(gòu)建質(zhì)粒（ＧＦＰ標(biāo)簽），培養(yǎng)??ＳＫＯＶ－３細(xì)胞株。將細(xì)月包分為Ｃｏｎ化〇１組、Ｅ民ａ組、ＥＲ目組，慢病毒轉(zhuǎn)染２４小??時后巧光顯微鏡下觀察感染效率，若綠色巧光占視野７０％＾上證明感染成功、細(xì)??胞存活率大于９５％。通過圖１顯示：利用慢病毒轉(zhuǎn)染后的過表達(dá)Ｅ民。組、過表??達(dá)ＥＲ日組綠色巧光均大于７０％。研究印明：感染成功，并可利用ＥＲａ及ＥＲ??目過表達(dá)載體慢病毒轉(zhuǎn)染ＳＫＯＶ－３如胞構(gòu)建過表達(dá)Ｅ民ａ及ＥＲＰ的人卵巢漿??液癌細(xì)胞模型。??

為了進(jìn)一步證明ＥＲａ及Ｅ民Ｐ在轉(zhuǎn)染后的ＳＫ０Ｖ－３細(xì)胞中穩(wěn)定過表達(dá)，??分別采用轉(zhuǎn)染后的化０Ｖ－３細(xì)胞傳代，培養(yǎng)２４小時后進(jìn)行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｒ??Ｔ－ＰＣＲ進(jìn)行檢測（圖３、圖４）。結(jié)果表明：ＥＲａ及ＥＲＰ在轉(zhuǎn)染后的ＳＫ０Ｖ－３??細(xì)胞穩(wěn)定高表達(dá)（Ｐ＜〇．〇５），可Ｗ進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＲｔｔ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＲ?ｐ??ＥＲａ?ＥＲ?ｐ??Ｉ?Ｐ－ａｃｔ善?Ｉ?？?１??８０?ｆ?＃?１８０?冉??Ｌａ?１加■??？ｔ?１?？２０?■?圓??—ｉＬｉｌＬ??圖３；利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測Ｅ民ａ、Ｅ民６蛋白在轉(zhuǎn)染后的ＳＫＯＶ－３細(xì)胞中穩(wěn)定??高表達(dá)??Ｆｉｇ．３：?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｉ＊ｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?Ｅ民ａａｎｄ?Ｅ民｜３ｗａｓ?ｄｅｔｅｃ化ｄ?ｉｎ?ｔｒａ


本文編號：3075769