本文關(guān)鍵詞：在宮頸癌細(xì)胞中microRNA-429下調(diào)IKKβ的表達(dá)發(fā)揮抑癌基因的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:宮頸癌是世界上常見的惡性腫瘤之一,在女性惡性腫瘤中排名第四位,而且在年輕女性中有發(fā)病率增加的趨勢(shì)。已有大量研究表明,宮頸癌的發(fā)生與HPV感染相關(guān),但隨著對(duì)宮頸癌研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)microRNAs(miRNAs)也能夠參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中。miRNAs是長度大約為22nt的單鏈非編碼RNA,能夠通過與mRNA3’UTR的結(jié)合來抑制其翻譯或降解其mRNA,達(dá)到調(diào)節(jié)體內(nèi)靶基因表達(dá)的目的,通過上述過程,miRNA參與調(diào)節(jié)與腫瘤發(fā)生相關(guān)的增殖、遷徙、轉(zhuǎn)移和凋亡等多個(gè)過程。已有文獻(xiàn)報(bào)道,宮頸癌的發(fā)生伴隨著多種miRNAs表達(dá)譜的異常改變,暗示著miRNAs可能與宮頸癌的發(fā)生相關(guān)。已發(fā)現(xiàn)miR-429在許多腫瘤中表達(dá)下調(diào),并具有抑制腫瘤增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用,但在宮頸癌中的作用還不清楚。因此本研究旨在探討miR-429在宮頸癌中細(xì)胞中的作用,及其發(fā)揮作用的分子學(xué)機(jī)制,為更好的研究宮頸癌發(fā)生的分子學(xué)機(jī)制提供新的基礎(chǔ)。方法:首先我們通過RT-qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了15對(duì)宮頸癌組織中miR-429的表達(dá)水平,然后通過MTT實(shí)驗(yàn)、集落實(shí)驗(yàn)和凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了miR-429對(duì)宮頸癌細(xì)胞系HeLa和C33A細(xì)胞增殖和凋亡的影響。接下來我們利用生物信息學(xué)方法,通過miRBase Targets、TargetScan和PicTar等靶基因預(yù)測(cè)軟件,篩選出IKKβ作為miR-429的靶基因,隨后我們構(gòu)建了包含IKKβ3’UTR的野生型和突變型序列的EGFP報(bào)告載體,然后通過熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-429靶定IKKβ并下調(diào)其表達(dá),接下來,我們還通過Real-time PCR和western blotting實(shí)驗(yàn)分別從mRNA水平和蛋白水平證實(shí)了二者的靶定關(guān)系,另外,還通過RT-qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了15對(duì)宮頸癌組織中IKKβ的表達(dá)水平,并對(duì)宮頸癌組織中miR-429和IKKβ進(jìn)行了相關(guān)性分析。為了深入研究miR-429和IKKβ的關(guān)系和靶基因IKKβ的功能,構(gòu)建了IKKβ過表達(dá)和敲降質(zhì)粒,并且通過MTT實(shí)驗(yàn)、集落實(shí)驗(yàn)和凋亡實(shí)驗(yàn)證實(shí)IKKβ具有促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞He La和C33A增殖和抑制細(xì)胞凋亡的功能。最后,通過挽救實(shí)驗(yàn)來證實(shí)miR-429對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的影響是由IKKβ介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。結(jié)果:與癌旁正常組織相比,在宮頸癌組織中miR-429表達(dá)下調(diào)。過表達(dá)miR-429能夠抑制宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A的增殖能力并誘導(dǎo)其凋亡。利用miRBase Targets、TargetScan和Pic Tar等生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)IKKβ的3’UTR區(qū)域存在miR-429的結(jié)合位點(diǎn)。通過熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-429直接靶定IKKβ并下調(diào)其表達(dá),Real-time PCR和western blotting實(shí)驗(yàn)也分別從mRNA水平和蛋白水平證實(shí)了二者的靶定關(guān)系。在宮頸癌組織中IKKβ表達(dá)上調(diào)且與miR-429呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。在宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A中,IKKβ發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制凋亡的作用。挽救實(shí)驗(yàn)證實(shí)IKKβ介導(dǎo)了miR-429對(duì)宮頸癌細(xì)胞的增殖能力和凋亡的影響。結(jié)論:本篇文章首次發(fā)現(xiàn)在宮頸癌細(xì)胞系HeLa和C33A中miR-429通過靶定并下調(diào)其靶基因IKKβ的表達(dá)來發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,為深入研究宮頸癌發(fā)生的分子學(xué)機(jī)制提供了新的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：miR-429 宮頸癌 IKKβ 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 縮略語11-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、MIR-429在宮頸癌細(xì)胞中的作用研究17-32
• 1.1 材料和方法17-28
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-28
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法28
• 1.2 結(jié)果28-31
• 1.2.1 RT-qPCR檢測(cè)miR-429在宮頸癌組織中與癌旁正常組織中的表達(dá)水平差異28
• 1.2.2 驗(yàn)證過表達(dá)質(zhì)粒pri-miR-429和ASO-miR-429的有效性28-29
• 1.2.3 miR-429抑制宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A的細(xì)胞活性29-30
• 1.2.4 miR-429抑制宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A克隆形成能力30
• 1.2.5 miR-429促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞C33A的凋亡30-31
• 1.3 小結(jié)31-32
• 二、MIR-429與IKKΒ的靶定關(guān)系32-46
• 2.1 材料和方法32-41
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料32
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法32-41
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析41
• 2.2 結(jié)果41-45
• 2.2.1 miR-429靶基因的篩選41-42
• 2.2.2 EGFP熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)證實(shí)IKKβ是miR-429的直接靶基因42
• 2.2.3 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)證實(shí)在HeLa和C33A中miR-429調(diào)控IKKβmRNA的表達(dá)水平。42-43
• 2.2.4 WB驗(yàn)證在HeLa和C33A中miR-429能夠調(diào)節(jié)IKKβ蛋白的表達(dá)43-44
• 2.2.5 RT-qPCR檢測(cè)在宮頸癌組織和癌旁正常組織中IKKβ表達(dá)水平的差異44-45
• 2.2.6 相關(guān)性分析結(jié)果顯示在宮頸癌組織中miR-429表達(dá)水平與IKKβ的表達(dá)水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系45
• 2.3 小結(jié)45-46
• 三、IKKΒ在宮頸癌細(xì)胞中的作用46-52
• 3.1 材料和方法46-47
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料46
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法46-47
• 3.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法47
• 3.2 結(jié)果47-51
• 3.2.1 RT-qPCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證IKKβ過表達(dá)質(zhì)粒及敲降質(zhì)粒的有效性47-48
• 3.2.2 Western Blotting驗(yàn)證IKKβ過表達(dá)質(zhì)粒及干擾質(zhì)粒的有效性48-49
• 3.2.3 MTT實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證IKKβ促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A細(xì)胞活性49-50
• 3.2.4 集落實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證IKKβ增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A克隆形成能力50
• 3.2.5 IKKβ抑制宮頸癌細(xì)胞C33A凋亡能力50-51
• 3.3 小結(jié)51-52
• 四、挽救實(shí)驗(yàn)52-57
• 4.1 材料和方法52-53
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料52
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 4.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法53
• 4.2 結(jié)果53-56
• 4.2.1 miR-429與靶基因IKKβ對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A中IKKβ蛋白表達(dá)水平的挽救實(shí)驗(yàn)53-54
• 4.2.2 miR-429與靶基因IKKβ對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A細(xì)胞活性的挽救實(shí)驗(yàn)54-55
• 4.2.3 miR-429與靶基因IKKβ對(duì)宮頸癌細(xì)胞HeLa和C33A克隆形成能力的挽救實(shí)驗(yàn)55-56
• 4.2.4 miR-429與靶基因IKKβ對(duì)宮頸癌細(xì)胞C33A凋亡能力的挽救實(shí)驗(yàn)56
• 4.3 小結(jié)56-57
• 討論57-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明68-69
• 綜述 MIR-200家族與腫瘤69-80
• 綜述參考文獻(xiàn)76-80
• 致謝80-81
• 個(gè)人簡歷81

  本文關(guān)鍵詞：在宮頸癌細(xì)胞中microRNA-429下調(diào)IKKβ的表達(dá)發(fā)揮抑癌基因的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：304162