本文關(guān)鍵詞：miR-99b-5p靶向mTOR誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞自噬，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:EEC進(jìn)程中自噬逐漸減弱,其機(jī)制和病理生理意義均不清楚,而自噬是第二大程序化細(xì)胞死亡方式,m TOR是自噬的核心調(diào)控器,m TOR在EEC進(jìn)程中活性增強(qiáng)。has-mi R-99b-5p是已經(jīng)被生物信息學(xué)和實(shí)驗(yàn)證實(shí)的強(qiáng)靶向m TOR的mi Rs,其在子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)程中表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌自噬情況同步,也是逐漸減弱,故該mi R存在通過(guò)m TOR調(diào)控EEC自噬的可能,并誘導(dǎo)EEC自噬性死亡。本研究主要目的是證實(shí)mi R-99b-5p可以靶向作用于m TOR誘導(dǎo)ishikawa細(xì)胞自噬,分析其調(diào)控自噬的時(shí)間和劑量效應(yīng),為后續(xù)研究促使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞自噬性死亡的機(jī)制和調(diào)控自噬為子宮內(nèi)膜癌治療提供新的理論依據(jù)。方法:首先進(jìn)行mi R99b-5p與m TOR靶向結(jié)合的生物信息學(xué)分析,進(jìn)行子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的培養(yǎng),然后分析mi R99b-5p在不同濃度和不同時(shí)間下誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的m RNA及其蛋白水平變化的情況。設(shè)置相同濃度mi R99b-5p進(jìn)行不同時(shí)間的轉(zhuǎn)染并觀察作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞,再次行蛋白印跡法檢測(cè)自噬標(biāo)志蛋白LC3和beclin1的表達(dá)情況,RT-PCR檢測(cè)自噬基因beclin1的m RNA的表達(dá)水平。第三,設(shè)置對(duì)照組觀察添加特異性自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素、自噬特異性抑制劑3MA和CQ與mi R99b-5p共同孵育后,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)LC3細(xì)胞免疫熒光和MDC自噬泡染色方法檢測(cè)自噬標(biāo)志物的表達(dá)情況,系統(tǒng)地分析mi R99b-5p誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞自噬的發(fā)生。Western blot檢測(cè)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白m TOR,LC3表達(dá)。細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)自噬蛋白MAP1-LC3表達(dá)量,MDC染色法檢測(cè)自噬泡的數(shù)量。用SPSS 13.0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析并作圖。結(jié)果:生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,mi R-99b-5p以m TOR為靶基因,且具有保守性。mi R-99b-5p劑量和時(shí)間依賴性地誘導(dǎo)ishikawa細(xì)胞自噬,以80nm和作用時(shí)間為6h時(shí),mi R-99b-5p對(duì)ishikawa細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用最為明顯,其增加LC3Ⅱ與LC3Ⅰ的比率,促進(jìn)beclin-1蛋白和m RNA的表達(dá),細(xì)胞內(nèi)的自噬泡和自噬小體數(shù)量均明顯增加了,分別用3MA和CQ抑制自噬過(guò)程后,則mi R-99b-5p對(duì)ishikawa細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用均減弱。結(jié)論:mi R-99b-5p靶向結(jié)合自噬調(diào)控關(guān)鍵蛋白m TOR;mi R99b-5p在濃度和時(shí)間依賴性上調(diào)LC3和beclin1表達(dá);抑制自噬減低mi R-99b-5p對(duì)ishikawa細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：自噬 凋亡 ishikawa細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略語(yǔ)10-11
• 前言11-16
• 1 材料與方法16-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-22
• 2 結(jié)果22-34
• 2.1 miR-99b-5p對(duì)mTOR靶基因生物信息學(xué)分析22-26
• 2.2 miR-199a-3p濃度和時(shí)間依賴性上調(diào)LC3和beclin1表達(dá)26-31
• 2.3 抑制自噬過(guò)程減低miR-99b-5p對(duì)ishikawa細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用31-34
• 3 討論34-38
• 4 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文51-52
• 致謝52

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