目的:作為成功妊娠的關(guān)鍵環(huán)節(jié),胚胎植入的順利完成需要功能完整的囊胚與處于容受態(tài)的子宮內(nèi)膜協(xié)同發(fā)揮作用。子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的蛻膜化是胚胎植入的重要組成部分,但其機制尚不清楚。本文旨在探討Pik3r1在小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化過程中的作用及相關(guān)分子機制。方法:（1）建立小鼠正常妊娠模型,于妊娠第4天子宮角注射PI3K的抑制劑LY294002,妊娠第6天取材,觀察抑制PI3K對胚胎植入的影響。（2）建立小鼠正常妊娠模型,利用免疫組織化學(xué)和Western Blot檢測D1-D7子宮內(nèi)膜組織中pik3r1的蛋白表達。（3）建立小鼠人工誘導(dǎo)蛻膜化模型,利用Western Blot檢測pik3r1的蛋白表達水平。（4）分離原代小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞進行培養(yǎng),借助免疫熒光檢測基質(zhì)細胞分子標(biāo)志物波形蛋白的表達,觀察原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的純度;利用pik3r1的siRNA轉(zhuǎn)染和PI3K抑制劑LY294002處理細胞,通過Western Blot檢測轉(zhuǎn)染前后pik3r1的蛋白水平,觀察轉(zhuǎn)染效果,通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡水平,研究pik3r1對子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞的影響。（5）分離原代小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞進行培... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pik3r1在早孕小鼠子宮的表達區(qū)域A：免疫組織化學(xué)檢測pik3r1在小鼠早孕子宮內(nèi)膜中的表達區(qū)域

圖 3pik3r1 在早孕小鼠子宮的表達量A：Western blot 檢測 Pik3r1 在早孕小鼠子宮內(nèi)膜的表達量；B：定量分析。P＜0.05Fig. 3Expression of pik3r1 in the uterus of early pregnant mice.A: Western blot detected the expression of Pik3r1 in the endometrium of early pregnantmice.B: Quantitative analysis.P < 0.053.4 pik3r1 在人工誘導(dǎo)蛻膜化小鼠子宮內(nèi)膜中的表達水平建立人工誘導(dǎo)蛻膜化模型，結(jié)果顯示誘導(dǎo)側(cè)的子宮角明顯大于對照側(cè)，且誘導(dǎo)側(cè)的子宮角重量明顯重于對照側(cè)，說明人工誘導(dǎo)蛻膜化模型是成功的（圖 4A,4B對人工誘導(dǎo)蛻膜化的兩側(cè)子宮進行 pik3r1 的 western blot 檢測，結(jié)果顯示 pik3r在誘導(dǎo)側(cè)子宮角的表達明顯少于對照側(cè)（圖 4C，4D）。

圖 4 在人工誘導(dǎo)蛻膜化子宮 pik3r1 的表達：小鼠人工誘導(dǎo)蛻膜化子宮。B：蛻膜化子宮重量的統(tǒng)計。C：Western blot 檢測 pik3r1表達。D：定量分析，P＜0.05。IDC，誘導(dǎo)蛻膜化對照；ID，誘導(dǎo)蛻膜化。Fig. 4 Expression of pik3r1 in vitro induced decidualization.A: Artificially induced decidualization of the uterus in mice. B: Statistics of decidualizeduterine weight.C: Western blot tests the expression of pik3r1.D: Quantitative analysis, P <0.05.IDC, Induced decidualizationcontrol;ID, Induced decidualization..5 小鼠原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞純度的鑒定利用免疫熒光檢測基質(zhì)細胞分子標(biāo)志物 Vimentin 的表達，結(jié)果顯示視野里胞明顯陽性表達綠色熒光，說明分離的細胞純度超過 95%（圖 5）。


本文編號：2999405